Post on 08-Oct-2020
Vittorio Vellani
Effetti antiinfiammatori della alimentazione
con “pane funzionale eubiotico” in un
modello animale
Robert Tohm – “Ippocrate nel visitare un bambino” (1959)
“Fa che il cibo sia la tua medicina e la medicina sia il tuo cibo“
Ippocrate di Coo, 460-375 AC
I SHOKU DO GEN
“pane funzionale eubiotico”
Ingredienti del “pane funzionale eubiotico”:
Semola integrale di grano duro antico (Timilia e Cappelli), acqua, farina integrale di segale, lievito naturale, farina integrale di: farro,
grano antico Virgo, orzo, miglio, lino, avena, proteine isolate di legumi misti e cereali (soia, grano tenero, piselli, lupino, avena), crusca di avena, farina integrale di soia tostata, germe di grano
tenero, farina di psillio, sale di Cervia (0,9%)
Per lo studio sono stati utilizzati 24 topi maschi C57BL6J, un ceppo
di topi inincrociati particolarmente versatili adatti a studi su
metabolismo, risposta immunitaria, abilita’ motorie, sensibilita’ al
dolore etc. etc.
Grazie alla sua versatilita’ il ceppo C57BL6J viene utilizzato per la
produzione di animali transgenici
Tutti gli animali avevano la stessa eta’ (9 settimane) all’inizio dell’esperimento
tempo (min)
-20 0 20 40 60 80 100 120 140
Glicem
ia
80
100
120
140
glucosio 20g
PRIMUS glucidi 20g Pane funzionale
20g glucidi
Glic
em
ia
tempo
Glucosio 20g
La somministrazione parenterale di basse dosi di
Streptozotocina (80mg/kg, 1 volta al giorno per 3 giorni
consecutivi) è in grado di provocare la necrosi selettiva
delle cellule β delle isole di Langerhans.
Questo innesca un’attivazione del sistema immunitario con
attivazione dei linfociti T e richiamo dei macrofagi infiltranti che
aggrediscono le cellule β, mimando quello che accade nel diabete
autoimmune umano.
Inoltre come conseguenza, essendo le cellule β responsabili della
produzione di insulina, questa si riduce fino ad azzerarsi
completamente.
Gli animali trattati con streptozotocina diventano “diabetici” (tipo I)
Nel topo un soggetto viene ritenuto iperglicemico quando i livelli di glucosio nel
sangue sono >250mg/dl. Altra caratteristica del diabete è la perdita di peso.
Tali parametri, iperglicemia e andamento del peso corporeo, sono stati monitorati
nel corso dell’intero esperimento.
Per valutare la curva glicemica, dopo una notte di digiuno, agli animali è stato dato accesso
per 3h al pellet ad libitum e successivamente è stata monitorata la glicemia ogni 30 minuti.
FIGURA 1 - CURVA GLICEMICA: PELLET
0
200
400
600
CTR STZ
0GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
DIGIUNO
GLICEMIA
DOPO 3h CIBO
30 min 60 min 90 min 120 min
*** ***
250
glu
co
sio
(m
g/d
L)
FIGURA 1 - CURVA GLICEMICA: PELLET
0
200
400
600
CTR STZ
0GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
DIGIUNO
GLICEMIA
DOPO 3h CIBO
30 min 60 min 90 min 120 min
*** ***
250
glu
co
sio
(m
g/d
L)
Questo è stato fatto per avere un riscontro basale e verificare l’induzione del diabete:
il normale pellet innalza la glicemia senza che gli animali STZ riescano a controllarla,
mentre negli animali di controllo i livelli di glucosio nel sangue sono ben controllati.
Al T21, gli animali in un evidente stato di iperglicemia e
riduzione del peso corporeo, sono stati suddivisi in 4 gruppi
(3 animali per gruppo):
Pane di controllo: pane integrale con lievitazione con Saccaromyces
Pane FUNZIONALE: pane multi-ingrediente fermentato con lievito madre
FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO
0
200
400
600
CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
A DIGIUNO
GLICEMIA
DOPO 3h PANE
30 min 60 min 90 min 120 min
***
******
***
250
glu
co
sio
(m
g/d
L)FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO
0
200
400
600
CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
A DIGIUNO
GLICEMIA
DOPO 3h PANE
30 min 60 min 90 min 120 min
***
******
***
250
glu
co
sio
(m
g/d
L)
topi di controllo
pane di controllo
topi di controllo
pane FUNZIONALE
topi diabetici
pane di controllotopi diabetici
pane FUNZIONALE
CTR-pF
STZ-pF
Animali a digiuno: dopo il digiuno e’ stato consentito agli animali di alimentarsi per
3h con pane di controllo o Funzionale. Alla fine delle 3 ore gli animali sono stati
rimessi a digiuno e la glicemia è stata monitorata ogni 30 minuti.
Non sono state osservate differenze significative tra i due tipi di pane, nè negli STZ
nè nei CTR. Inoltre non abbiamo riscontrato differenze neanche rispetto ai valori di
riferimento basali, cioè la curva glicemica valutata dopo il solo pellet.
FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO
0
200
400
600
CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
A DIGIUNO
GLICEMIA
DOPO 3h PANE
30 min 60 min 90 min 120 min
***
******
***
250
glu
co
sio
(m
g/d
L)
CURVA GLICEMICA: 10gg DI PANE
0
200
400
600CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
GLICEMIA
BASALE
GLICEMIA
DOPO 6h PANE
***
**
*
***°
250
Ag
luco
sio
(m
g/d
L)
Dopo 10 giorni di alimentazione con solo pane (T31 da STZ), gli animali sono
stati messi a digiuno overnight. Il mattino seguente sono stati alimentati con pane
per circa 6h. Il pane Funzionale tende a non dare picco glicemico negli animali
diabetici a differenza del pCTR.
PANE CONSUMATO IN 6h
CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP0
2
4B
pan
e (
gra
mm
i)
CTR-pF STZ-pF
La minor glicemia nel gruppo STZ-pF non e’ dovuta a
minor consumo di alimento
Figura 5: Cinetica Glicemia
0
200
400
600CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
0 10 25
250
***
****
**
******
giorni dopo alimentazione con solo pane
glu
co
sio
(m
g/d
L)
Dopo 25 giorni di alimentazione con solo pane (T46 da STZ), negli
animali alimentati con pane Funzionale si osservava una significativa
riduzione della glicemia sia rispetto ai valori misurati negli stessi topi prima
del pane Funzionale, sia rispetto agli animali alimentati con pC
CURVA GLICEMICA: 25gg DI PANE
0
200
400
600
800CTR-pC CTR-pP
STZ-pC STZ-pP
GLICEMIA
BASALE
2h 4h 6h
***
250 ****** ** *
***°°°°
A
glu
co
sio
(m
g/d
L)
La glicemia in animali tenuti a digiuno e’ stata monitorata durante il periodo di alimentazione post-
digiuno overnight a 2, 4 e 6h. Lo scopo era di verificare se negli animali alimentati con pF il picco
glicemico si verificasse prima delle 6h. Si osserva invece che tutti gli animali hanno un aumento
glicemico a 2h che (negli animali diabetici) continua a salire con il pane di controllo, mentre e’ piu’ basso
e tende a diminuire fino ai valori basali negli animali alimentati col pane Funzionale.
PANE CONSUMATO IN 6h
CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP0
1
2
3
4B
pan
e (
gra
mm
i)
Anche in questi caso tutti gli animali hanno
mangiato circa la stessa quantità di pane
Durante l'intero esperimento (28 gg) è stata valutata la quantità di pane
mangiato dai vari gruppi.
Le differenze tra gruppi non sono significative:
CTR-pC --> hanno consumato in media 160,8 g di pane
CTR-pF --> hanno consumato in media 155,4 g di pane
STZ-pC --> hanno consumato in media 174,4 g di pane
STZ-pF --> hanno consumato in media 178,8 g di pane
(peso secco)
FIGURA 7: PESI
T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T5420
25
30 CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP
***
***
*** ***
peso
(g
ram
mi)
Il peso degli animali è stato monitorato al T0, T15, T31, T42 e T54 dall'induzione della
patologia.
Gli animali CTR alimentati con i due diversi tipi di pane aumentano di peso normalmente.
Negli animali STZ nessuno dei due tipi di pane è in grado di contrastare la perdita di peso
CTR-pF STZ-pF
Figura 8: IL-10
CTR-pC STZ-pC CTR-pP STZ-pP0
1000
2000
3000
4000
5000
***°°
**
pg
/mL
Abbiamo valutato la produzione di una citochina largamente coinvolta nei processi
infiammatori dal diabete: la interleuchina-10 (IL-10, anti-infiammatoria), nei macrofagi estratti
dagli animali dei vari gruppi e coltivati in vitro.
Si osserva che il rilascio di IL-10 viene significativamente ridotto dalla patologia in entrambi i
gruppi diabetici, ma negli STZ-pF il decremento è significativamente inferiore agli STZ-pC.
Effetti del pane Funzionale su una citochina anti-infiammatoria in una
popolazione di cellule immuni
CTR-pFSTZ-pF
Studio su effetti della alimentazione in un
modello di infiammazione sistemica
Modello: infiammazione sistemica da LPS
Specie: Mus musculus (C57BL/6)
Test: quantificazione fattori pro/antiinfiammatori in colture di cellule immuni da espianti e nel siero
4 gruppi sperimentali:
PelletNo LPS
PaneNo LPS
PaneLPS
PelletLPS
Alimentazione di controllo / pane funzionale
Nessun effetto in colture di cellule immuni prelevate da animali dei 4 gruppi
CTRL or LPS
Immune cells
Effetti su 31 fattori misurati nel siero
Citochine infiammatorie
Chemochine
Citochine antiinfiammatorie
Citochine emopoietiche
Gli effetti osservati sono significativinel modello utilizzato e coerenti con un
effetto antiinfiammatorio del trattamento alimentare nei soli animali trattati con LPS
Nessun effetto in colture di cellule immuni prelevate da animali dei 4 gruppi
CTRL or LPS
Immune cells
Ingredienti del “pane funzionale eubiotico”:
Semola integrale di grano duro antico (Timilia e Cappelli), acqua, farina integrale di segale, lievito naturale, farina integrale di: farro,
grano antico Virgo, orzo, miglio, lino, avena, proteine isolate di legumi misti e cereali (soia, grano tenero, piselli, lupino, avena), crusca di avena, farina integrale di soia tostata, germe di grano
tenero, farina di psillio, sale di Cervia (0,9%)
A cosa sono dovuti questi effetti?
Grazie per l’attenzione
Ezechiele 4:9
“Prendi anche frumento, orzo, fave, lenticchie, miglio, spelta, mettili in un
vaso, fattene del pane...”