Vittorio Vellani

Effetti antiinfiammatori della alimentazione

con “pane funzionale eubiotico” in un

modello animale

Robert Tohm – “Ippocrate nel visitare un bambino” (1959)

“Fa che il cibo sia la tua medicina e la medicina sia il tuo cibo“

Ippocrate di Coo, 460-375 AC

I SHOKU DO GEN

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“pane funzionale eubiotico”

Ingredienti del “pane funzionale eubiotico”:

Semola integrale di grano duro antico (Timilia e Cappelli), acqua, farina integrale di segale, lievito naturale, farina integrale di: farro,

grano antico Virgo, orzo, miglio, lino, avena, proteine isolate di legumi misti e cereali (soia, grano tenero, piselli, lupino, avena), crusca di avena, farina integrale di soia tostata, germe di grano

tenero, farina di psillio, sale di Cervia (0,9%)

Per lo studio sono stati utilizzati 24 topi maschi C57BL6J, un ceppo

di topi inincrociati particolarmente versatili adatti a studi su

metabolismo, risposta immunitaria, abilita’ motorie, sensibilita’ al

dolore etc. etc.

Grazie alla sua versatilita’ il ceppo C57BL6J viene utilizzato per la

produzione di animali transgenici

Tutti gli animali avevano la stessa eta’ (9 settimane) all’inizio dell’esperimento

tempo (min)

-20 0 20 40 60 80 100 120 140

Glicem

ia

80

100

120

140

glucosio 20g

PRIMUS glucidi 20g Pane funzionale

20g glucidi

Glic

em

ia

tempo

Glucosio 20g

La somministrazione parenterale di basse dosi di

Streptozotocina (80mg/kg, 1 volta al giorno per 3 giorni

consecutivi) è in grado di provocare la necrosi selettiva

delle cellule β delle isole di Langerhans.

Questo innesca un’attivazione del sistema immunitario con

attivazione dei linfociti T e richiamo dei macrofagi infiltranti che

aggrediscono le cellule β, mimando quello che accade nel diabete

autoimmune umano.

Inoltre come conseguenza, essendo le cellule β responsabili della

produzione di insulina, questa si riduce fino ad azzerarsi

completamente.

Gli animali trattati con streptozotocina diventano “diabetici” (tipo I)

Nel topo un soggetto viene ritenuto iperglicemico quando i livelli di glucosio nel

sangue sono >250mg/dl. Altra caratteristica del diabete è la perdita di peso.

Tali parametri, iperglicemia e andamento del peso corporeo, sono stati monitorati

nel corso dell’intero esperimento.

Per valutare la curva glicemica, dopo una notte di digiuno, agli animali è stato dato accesso

per 3h al pellet ad libitum e successivamente è stata monitorata la glicemia ogni 30 minuti.

FIGURA 1 - CURVA GLICEMICA: PELLET

0

200

400

600

CTR STZ

0GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

DIGIUNO

GLICEMIA 

DOPO 3h CIBO

30 min 60 min 90 min 120 min

*** ***

250

glu

co

sio

(m

g/d

L)

FIGURA 1 - CURVA GLICEMICA: PELLET

0

200

400

600

CTR STZ

0GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

DIGIUNO

GLICEMIA 

DOPO 3h CIBO

30 min 60 min 90 min 120 min

*** ***

250

glu

co

sio

(m

g/d

L)

Questo è stato fatto per avere un riscontro basale e verificare l’induzione del diabete:

il normale pellet innalza la glicemia senza che gli animali STZ riescano a controllarla,

mentre negli animali di controllo i livelli di glucosio nel sangue sono ben controllati.

Al T21, gli animali in un evidente stato di iperglicemia e

riduzione del peso corporeo, sono stati suddivisi in 4 gruppi

(3 animali per gruppo):

Pane di controllo: pane integrale con lievitazione con Saccaromyces

Pane FUNZIONALE: pane multi-ingrediente fermentato con lievito madre

FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO

0

200

400

600

CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

A DIGIUNO

GLICEMIA 

DOPO 3h PANE

30 min 60 min 90 min 120 min

***

******

***

250

glu

co

sio

(m

g/d

L)FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO

0

200

400

600

CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

A DIGIUNO

GLICEMIA 

DOPO 3h PANE

30 min 60 min 90 min 120 min

***

******

***

250

glu

co

sio

(m

g/d

L)

topi di controllo

pane di controllo

topi di controllo

pane FUNZIONALE

topi diabetici

pane di controllotopi diabetici

pane FUNZIONALE

CTR-pF

STZ-pF

Animali a digiuno: dopo il digiuno e’ stato consentito agli animali di alimentarsi per

3h con pane di controllo o Funzionale. Alla fine delle 3 ore gli animali sono stati

rimessi a digiuno e la glicemia è stata monitorata ogni 30 minuti.

Non sono state osservate differenze significative tra i due tipi di pane, nè negli STZ

nè nei CTR. Inoltre non abbiamo riscontrato differenze neanche rispetto ai valori di

riferimento basali, cioè la curva glicemica valutata dopo il solo pellet.

FIGURA 2 - CURVA GLICEMICA: PANE ACUTO

0

200

400

600

CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

A DIGIUNO

GLICEMIA 

DOPO 3h PANE

30 min 60 min 90 min 120 min

***

******

***

250

glu

co

sio

(m

g/d

L)

CURVA GLICEMICA: 10gg DI PANE

0

200

400

600CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

GLICEMIA 

BASALE

GLICEMIA 

DOPO 6h PANE

***

**

*

***°

250

Ag

luco

sio

(m

g/d

L)

Dopo 10 giorni di alimentazione con solo pane (T31 da STZ), gli animali sono

stati messi a digiuno overnight. Il mattino seguente sono stati alimentati con pane

per circa 6h. Il pane Funzionale tende a non dare picco glicemico negli animali

diabetici a differenza del pCTR.

PANE CONSUMATO IN 6h

CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP0

2

4B

pan

e (

gra

mm

i)

CTR-pF STZ-pF

La minor glicemia nel gruppo STZ-pF non e’ dovuta a

minor consumo di alimento

Figura 5: Cinetica Glicemia

0

200

400

600CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

0 10 25

250

***

****

**

******

giorni dopo alimentazione con solo pane

glu

co

sio

(m

g/d

L)

Dopo 25 giorni di alimentazione con solo pane (T46 da STZ), negli

animali alimentati con pane Funzionale si osservava una significativa

riduzione della glicemia sia rispetto ai valori misurati negli stessi topi prima

del pane Funzionale, sia rispetto agli animali alimentati con pC

CURVA GLICEMICA: 25gg DI PANE

0

200

400

600

800CTR-pC CTR-pP

STZ-pC STZ-pP

GLICEMIA 

BASALE

2h 4h 6h

***

250 ****** ** *

***°°°°

A

glu

co

sio

(m

g/d

L)

La glicemia in animali tenuti a digiuno e’ stata monitorata durante il periodo di alimentazione post-

digiuno overnight a 2, 4 e 6h. Lo scopo era di verificare se negli animali alimentati con pF il picco

glicemico si verificasse prima delle 6h. Si osserva invece che tutti gli animali hanno un aumento

glicemico a 2h che (negli animali diabetici) continua a salire con il pane di controllo, mentre e’ piu’ basso

e tende a diminuire fino ai valori basali negli animali alimentati col pane Funzionale.

PANE CONSUMATO IN 6h

CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP0

1

2

3

4B

pan

e (

gra

mm

i)

Anche in questi caso tutti gli animali hanno

mangiato circa la stessa quantità di pane

Durante l'intero esperimento (28 gg) è stata valutata la quantità di pane

mangiato dai vari gruppi.

Le differenze tra gruppi non sono significative:

CTR-pC --> hanno consumato in media 160,8 g di pane

CTR-pF --> hanno consumato in media 155,4 g di pane

STZ-pC --> hanno consumato in media 174,4 g di pane

STZ-pF --> hanno consumato in media 178,8 g di pane

(peso secco)

FIGURA 7: PESI

T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T54 T0 T15 T31 T42 T5420

25

30 CTR-pC CTR-pP STZ-pC STZ-pP

***

***

*** ***

peso

(g

ram

mi)

Il peso degli animali è stato monitorato al T0, T15, T31, T42 e T54 dall'induzione della

patologia.

Gli animali CTR alimentati con i due diversi tipi di pane aumentano di peso normalmente.

Negli animali STZ nessuno dei due tipi di pane è in grado di contrastare la perdita di peso

CTR-pF STZ-pF

Figura 8: IL-10

CTR-pC STZ-pC CTR-pP STZ-pP0

1000

2000

3000

4000

5000

***°°

**

pg

/mL

Abbiamo valutato la produzione di una citochina largamente coinvolta nei processi

infiammatori dal diabete: la interleuchina-10 (IL-10, anti-infiammatoria), nei macrofagi estratti

dagli animali dei vari gruppi e coltivati in vitro.

Si osserva che il rilascio di IL-10 viene significativamente ridotto dalla patologia in entrambi i

gruppi diabetici, ma negli STZ-pF il decremento è significativamente inferiore agli STZ-pC.

Effetti del pane Funzionale su una citochina anti-infiammatoria in una

popolazione di cellule immuni

CTR-pFSTZ-pF

Studio su effetti della alimentazione in un

modello di infiammazione sistemica

Modello: infiammazione sistemica da LPS

Specie: Mus musculus (C57BL/6)

Test: quantificazione fattori pro/antiinfiammatori in colture di cellule immuni da espianti e nel siero

4 gruppi sperimentali:

PelletNo LPS

PaneNo LPS

PaneLPS

PelletLPS

Alimentazione di controllo / pane funzionale

Nessun effetto in colture di cellule immuni prelevate da animali dei 4 gruppi

CTRL or LPS

Immune cells

Effetti su 31 fattori misurati nel siero

Citochine infiammatorie

Chemochine

Citochine antiinfiammatorie

Citochine emopoietiche

Gli effetti osservati sono significativinel modello utilizzato e coerenti con un

effetto antiinfiammatorio del trattamento alimentare nei soli animali trattati con LPS

Nessun effetto in colture di cellule immuni prelevate da animali dei 4 gruppi

CTRL or LPS

Immune cells

Ingredienti del “pane funzionale eubiotico”:

Semola integrale di grano duro antico (Timilia e Cappelli), acqua, farina integrale di segale, lievito naturale, farina integrale di: farro,

grano antico Virgo, orzo, miglio, lino, avena, proteine isolate di legumi misti e cereali (soia, grano tenero, piselli, lupino, avena), crusca di avena, farina integrale di soia tostata, germe di grano

tenero, farina di psillio, sale di Cervia (0,9%)

A cosa sono dovuti questi effetti?

Grazie per l’attenzione

Ezechiele 4:9

“Prendi anche frumento, orzo, fave, lenticchie, miglio, spelta, mettili in un

vaso, fattene del pane...”