ISTRUZIONI PER L’USO DEGLI OLIGONUCLEOTIDI ANTISENSO

Utilizzare controlli appropriatiVerificare l’inibizione dell’espressione del bersaglioUtilizzare le minime concentrazioni necessarie a inibire il bersaglioNon utilizzare oligonucleotidi contenenti 4 residui di guanina contiguiNon utilizzare oligonucleotidi contenenti un motivo CpG non modificato (negli esperimenti con gli animali)

PROBLEMI LEGATI ALL’USO DEGLI OLIGONUCLEOTIDI ANTISENSO

Stabilità biologicaTargeting cellulareUptake cellulareEfflusso dagli endosomi

APTAMERI

• Sequenze oligonucleotidiche (ssDNA o ssRNA) o peptidiche relativamente brevi (12-30 nucleotidi o aminoacidi)

• In vivo assumono strutture tridimensionali specifiche in grado di legarsi con elevata affinità (range nM/pM) alle proteine bersaglio

SELEX systematic evolution of ligands by exponential enrichment

APTAMERI vs. ANTICORPI

• Maggiore stabilità• Non immunogenici• Ridotta variabilità da un lotto all’altro• Piccole dimensioni migliore penetrazione clearance più rapida• possibilità di modificarne la struttura, p.e.

per migliorare la stabilità o alterarne le proprietà PK

MACUGEN® (pegaptanib sodio)

• Primo aptamero approvato, nel dicembre 2004, per l’uso clinico nella degenerazione maculare senile (AMD)

• ssRNA costituito da 28 nucleotidi, specifico per una delle 6 isoforme di VEGF

• Modificato a livello dello zucchero per aumentare la resistenza alle nucleasi

• aggiunta covalente di due molecole di PEG (20 kD ca.) per aumentare t½

MACUGEN® (pegaptanib sodio)

APTAMERI nella terapia dei tumori

• GB10: DNA aptamero che si lega alla tenascina C

• aptameri peptidici diretti vs. le regioni di dimerizzazione e di legame al DNA di STAT3

• AS1411: ssDNA 26-mero ricco di guanosina, forma un complesso con la nucleolina e il fattore modulatore essenziale di NFκB (NEMO)

Copyright ©2006 American Association for Cancer Research

Effetto in vitro di AS1411

IC50

~1.1

Effetto in vivo di AS1411

AS1411

• Studi tossicologici pre-clinici:nessuna tossicità nel ratto e nel cane

• Studi clinici (fase I) in NSCLC e carcinomi renali