ISTRUZIONI PER LUSO DEGLI OLIGONUCLEOTIDI ANTISENSO Utilizzare controlli appropriati Verificare...
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ISTRUZIONI PER L’USO DEGLI OLIGONUCLEOTIDI ANTISENSO
Utilizzare controlli appropriatiVerificare l’inibizione dell’espressione del bersaglioUtilizzare le minime concentrazioni necessarie a inibire il bersaglioNon utilizzare oligonucleotidi contenenti 4 residui di guanina contiguiNon utilizzare oligonucleotidi contenenti un motivo CpG non modificato (negli esperimenti con gli animali)
PROBLEMI LEGATI ALL’USO DEGLI OLIGONUCLEOTIDI ANTISENSO
Stabilità biologicaTargeting cellulareUptake cellulareEfflusso dagli endosomi
APTAMERI
• Sequenze oligonucleotidiche (ssDNA o ssRNA) o peptidiche relativamente brevi (12-30 nucleotidi o aminoacidi)
• In vivo assumono strutture tridimensionali specifiche in grado di legarsi con elevata affinità (range nM/pM) alle proteine bersaglio
SELEX systematic evolution of ligands by exponential enrichment
APTAMERI vs. ANTICORPI
• Maggiore stabilità• Non immunogenici• Ridotta variabilità da un lotto all’altro• Piccole dimensioni migliore penetrazione clearance più rapida• possibilità di modificarne la struttura, p.e.
per migliorare la stabilità o alterarne le proprietà PK
MACUGEN® (pegaptanib sodio)
• Primo aptamero approvato, nel dicembre 2004, per l’uso clinico nella degenerazione maculare senile (AMD)
• ssRNA costituito da 28 nucleotidi, specifico per una delle 6 isoforme di VEGF
• Modificato a livello dello zucchero per aumentare la resistenza alle nucleasi
• aggiunta covalente di due molecole di PEG (20 kD ca.) per aumentare t½
MACUGEN® (pegaptanib sodio)
APTAMERI nella terapia dei tumori
• GB10: DNA aptamero che si lega alla tenascina C
• aptameri peptidici diretti vs. le regioni di dimerizzazione e di legame al DNA di STAT3
• AS1411: ssDNA 26-mero ricco di guanosina, forma un complesso con la nucleolina e il fattore modulatore essenziale di NFκB (NEMO)
Copyright ©2006 American Association for Cancer Research
Effetto in vitro di AS1411
IC50
~1.1
Effetto in vivo di AS1411
AS1411
• Studi tossicologici pre-clinici:nessuna tossicità nel ratto e nel cane
• Studi clinici (fase I) in NSCLC e carcinomi renali