ESTUDIO ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE LCR MICROBIOLOGICO DE LCR EN MBAEN MBA

Dra Paola Pidal MDra Paola Pidal MHospital Padre HurtadoHospital Padre Hurtado

CLASIFICACICLASIFICACIÓÓN DE INFECCIONES DEL N DE INFECCIONES DEL SNC: SEGSNC: SEGÚÚN LOCALIZACIN LOCALIZACIÓÓNN

ENCEFALITIS: Infecciones del ENCEFALITIS: Infecciones del parparéénquima cerebralnquima cerebralMIELITIS: Infecciones de la mMIELITIS: Infecciones de la méédula espinaldula espinalMENINGITISMENINGITIS: Infecci: Infeccióón de las meningesn de las meninges

ANATOMANATOMÍÍA DEL SNCA DEL SNC

ANATOMANATOMÍÍA DEL SNCA DEL SNC

MENINGITISMENINGITIS

InflamaciInflamacióón de las leptomeninges (piamadre y n de las leptomeninges (piamadre y aracnoides) con efecto sobre LCR que ocupa el aracnoides) con efecto sobre LCR que ocupa el espacio subaracnoideo.espacio subaracnoideo.LCR y leptomeninges se extiende por el cerebro y LCR y leptomeninges se extiende por el cerebro y canal medular, por lo que implica una patologcanal medular, por lo que implica una patologíía a cerebro espinalcerebro espinalConcentraciConcentracióón de bacterias en LCR de MBA 10n de bacterias en LCR de MBA 1033 --10109 9 UFCUFC/ml/mlVolumen de LCR adulto 100Volumen de LCR adulto 100--160 ml160 ml

MENINGITISMENINGITIS

Bacteriana Bacteriana –– Aguda : Aguda :

Relacionada o no a derivaciones de LCRRelacionada o no a derivaciones de LCR–– CR o SubagudaCR o Subaguda

Nocardia Nocardia BrucellaBrucellaLeptospira interrogansLeptospira interrogansMycobacterium tuberculosisMycobacterium tuberculosisTreponema pallidumTreponema pallidum

HongosHongosParParáásitossitosVirusVirus

EtiologEtiologíía de MBAa de MBANEONATOSNEONATOS

–– E coliE coli–– S agalactiaeS agalactiae–– Listeria monocytogenesListeria monocytogenes

1 a 3 MESES1 a 3 MESES–– E coliE coli–– S agalactiaeS agalactiae–– Listeria monocytogenesListeria monocytogenes

–– N meningitidisN meningitidis–– S pneumoniaeS pneumoniae–– H influenzaeH influenzae

EtiologEtiologíía de MBAa de MBA

> 3 MESES> 3 MESES-- 5 A5 AÑÑOSOS–– N meningitidisN meningitidis–– S pneumoniaeS pneumoniae–– H influenzaeH influenzae

> 5 A> 5 AÑÑOS < 60 AOS < 60 AÑÑOSOS–– N meningitidisN meningitidis–– S pneumoniaeS pneumoniae

> 60 a> 60 añños e inmunodeprimidosos e inmunodeprimidos–– S pneumoniaeS pneumoniae–– N meningitidisN meningitidis–– BGNBGN–– Listeria monocytogenesListeria monocytogenes

Estudio de casos de sospecha de Estudio de casos de sospecha de Enfermedad Meningococica adquirida en Enfermedad Meningococica adquirida en laboratoriolaboratorioDesde 1985Desde 1985--2006 en EEUU2006 en EEUUPersonal de laboratorio con EM con Personal de laboratorio con EM con exposiciexposicióón a n a N meningitidisN meningitidis con mismo con mismo serogrupo hasta 14 dserogrupo hasta 14 díías previo a as previo a enfermedadenfermedad

16 casos16 casos–– 56% serogrupo B56% serogrupo B–– 44% serogrupo C44% serogrupo C

50% letalidad50% letalidad100% en personal de Microbiolog100% en personal de Microbiologííaa94% manipulaci94% manipulacióón sin proteccin sin proteccióónnTasa de ataque Tasa de ataque –– MicrobiologMicrobiologíía: 13/100.000 a: 13/100.000 –– PoblaciPoblacióón General de EEUU: 0.2/ 100000n General de EEUU: 0.2/ 100000

RecolecciRecoleccióón de la muestran de la muestra

Antisepsia de pielAntisepsia de pielTubo estTubo estééril con tapa roscaril con tapa roscaEnviar a MicrobiologEnviar a Microbiologíía: el ma: el máás turbio o el 2s turbio o el 2ººtubo.tubo.Idealmente min 2 mlIdealmente min 2 ml

TRANSPORTE MUESTRATRANSPORTE MUESTRA

Lo antes posible, antes deLo antes posible, antes de15 minutos15 minutos

T ambienteT ambienteNo refrigerar No refrigerar

CRITERIOS DE RECHAZOCRITERIOS DE RECHAZO

RelativosRelativosMuestra en recipientes Muestra en recipientes rotos, procesar y con alerta rotos, procesar y con alerta a ma méédico tratante de posible dico tratante de posible contaminacicontaminacióónn

PROCESAMIENTO DE MUESTRA PARA PROCESAMIENTO DE MUESTRA PARA GRAM Y CULTIVO SEGGRAM Y CULTIVO SEGÚÚN CANTIDAD DE N CANTIDAD DE MUESTRAMUESTRA

<< 0.5 ml Gram y cultivo directo0.5 ml Gram y cultivo directo>> 1 ml1 ml–– CentrifugaciCentrifugacióón convencionaln convencional–– Gram y cultivo de sedimentoGram y cultivo de sedimento

>> 1 ml1 mlCitocentrifugaciCitocentrifugacióón n GramGramSi resta > 1ml CentrifugaciSi resta > 1ml Centrifugacióón convencional n convencional Si resta < de 1ml Cultivo directoSi resta < de 1ml Cultivo directo

Gram con centrifugado Gram con centrifugado convencionalconvencional

CentrifugaciCentrifugacióón a 3000 rpm / 10n a 3000 rpm / 10--15 min15 minSensibilidad: 60% Sensibilidad: 60% Especificidad: 97%Especificidad: 97%Posibilidad de visualizar bacteria se correlaciona Posibilidad de visualizar bacteria se correlaciona concentraciconcentracióón en LCRn en LCR

101033 ufc/mlufc/ml 25% de positividad25% de positividad101033-- 101055 ufc/mlufc/ml 60% de positividad60% de positividad>10>1055 ufc/mlufc/ml 97% de positividad97% de positividad

Gram con centrifugado Gram con centrifugado convencionalconvencional

Tipo especTipo especíífico de bacteria: fico de bacteria: S pneumoniae S pneumoniae

H influenzae H influenzae N meningitidis N meningitidis BGNBGNL monocytogenesL monocytogenes

MMéétodo rtodo ráápido barato y especpido barato y especííficofico

Procesamiento de la muestra: Procesamiento de la muestra: Gram CitocentrifugaciGram Citocentrifugacióónn

MMéétodo recomendado todo recomendado ConcentraciConcentracióón a travn a travéés de citocentrifugacis de citocentrifugacióón ( 2000 n ( 2000

rpm 10 min)rpm 10 min)Genera preparaciones uniformemente concentradas en Genera preparaciones uniformemente concentradas en

un un áárea de 6rea de 6--7 7 mmmm de dide diáámetrometroSe obtiene una Se obtiene una monocapamonocapa celular concentradacelular concentradaMejora la visualizaciMejora la visualizacióón bacteriana y celularn bacteriana y celularAumenta la sensibilidad de la tAumenta la sensibilidad de la téécnicacnicaDesventajas: CostoDesventajas: Costo

Se comparSe comparóó Gram LCR inoculados con Gram LCR inoculados con bacterias:bacterias:

No concentrado CentrifugaciónConvencional

Citocentrifugación

103 bacterias 0% 0% 72%

104 Bacterias 39% 78% 100%

105 Bacterias 100% 100% 100%

Utilidad de la citocentrifugación en el diagnóstico bacteriológico microscópico de fluidos corporales

Rev. chil. infectol., 2002, vol.19, no.3, p.167-173.

Procesamiento de la muestra: Procesamiento de la muestra: CultivoCultivo

Sensibilidad de hasta 90% Sensibilidad de hasta 90% Medios de cultivoMedios de cultivo–– Agar sangre cordero al 5%Agar sangre cordero al 5%–– Agar chocolateAgar chocolate–– Medios lMedios lííquidos : Cuestionadosquidos : Cuestionados

Thioglicolato no recomendadoThioglicolato no recomendadoBHI anaerobiosBHI anaerobiosTSB sangre cordero al 5%TSB sangre cordero al 5%Viales de hemocultivo: No existe recomendaciViales de hemocultivo: No existe recomendacióónn

–– IncubaciIncubacióón 3n 3--4 d4 díías en CO2as en CO2

DetecciDeteccióón de Antn de Antíígenos genos bacterianosbacterianos

Costo/beneficio bajoCosto/beneficio bajoMMáás utilizados:s utilizados:–– CoaglutinaciCoaglutinacióón: Suspensin: Suspensióón n S aureusS aureus que que

contiene protecontiene proteíína A en superficie celular unidos na A en superficie celular unidos a Ac especa Ac especííficos por fragmento Fcficos por fragmento Fc

–– AglutinaciAglutinacióón de ln de láátex: Parttex: Partíículas de lculas de láátex tex sensibilizadas con Ac especsensibilizadas con Ac especííficos ficos

–– Detectan Ag especDetectan Ag especííficos polisacficos polisacááridos de ridos de superficiesuperficie

DetecciDeteccióón de Antn de Antíígenos genos sensibilidad lsensibilidad láátextex

H influenzaeH influenzae: 78: 78--100%100%S pneumoniaeS pneumoniae: 50 : 50 ––100%100%N meningitidisN meningitidis: 33: 33--93%93%SGB: SGB: 69 69 –– 100%100%

Es mejor para Es mejor para H influenzaeH influenzae

DetecciDeteccióón de Antn de Antíígenos genos especificidadespecificidad

En general sobre 96%En general sobre 96%Reacciones cruzadasReacciones cruzadas

Los positivos en el 100% fueron visualizados al Gram

COMPARACION RESPECTO AL GRAM UTILIDAD

En orina:Mayoría de los niños vacunados presenta AL positivo los primeros cuatro días Post Vacunación41% fue positivo a los 30 días

RECOMENDACIONES DE USO PARA RECOMENDACIONES DE USO PARA MEJORAR COSTOMEJORAR COSTO--BENEFICIOBENEFICIO

Recuento celular anormalRecuento celular anormalPreviamente tratados por 48 horas o mPreviamente tratados por 48 horas o máássGram y cultivos negativos luego de 48 horasGram y cultivos negativos luego de 48 horasNo realizar en pacientes vacunados No realizar en pacientes vacunados HbHbrecientementerecientemente

Nunca se debe sustituir Gram o cultivo Nunca se debe sustituir Gram o cultivo cuando se envcuando se envíían muestras pequean muestras pequeññasas

DetecciDeteccióón de antn de antíígenosgenos

InmunocromatografInmunocromatografííaaBinaxBinax NowNow: Detecci: Deteccióón de Ag urinario para n de Ag urinario para S pneumoniae S pneumoniae Realizado en LCR de pacientes adultos con Realizado en LCR de pacientes adultos con sospecha de MBAsospecha de MBA

PCRPCR

Numerosos estudios en la literatura en LCRNumerosos estudios en la literatura en LCRAlgunas permiten la detecciAlgunas permiten la deteccióón simultn simultáánea de nea de varios bacteriasvarios bacteriasExisten PCR para detecciExisten PCR para deteccióón de MB que n de MB que utiliza partidor utiliza partidor ““universaluniversal””Excelente sensibilidad y especificidadExcelente sensibilidad y especificidadDesventaja: CostoDesventaja: Costo-- laboriosolaborioso

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

MBA: Enfermedad relativamente poco MBA: Enfermedad relativamente poco frecuente, pero con letalidad y secuelas frecuente, pero con letalidad y secuelas importantesimportantesGram: mGram: méétodo rtodo ráápido, barato y especpido, barato y especíífico. fico. Generar esfuerzos locales por mejorar Generar esfuerzos locales por mejorar sensibilidadsensibilidadCultivo: Buena Sensibilidad en pacientes no Cultivo: Buena Sensibilidad en pacientes no tratados tratados

ConclusionesConclusiones

DetecciDeteccióón de antn de antíígenos por Tgenos por Téécnicas cnicas habituales en LCRhabituales en LCR–– Prueba rPrueba ráápida, especpida, especíífica fica –– No ha demostrado mejor sensibilidad que No ha demostrado mejor sensibilidad que

Gram ( por citocentrifugaciGram ( por citocentrifugacióón)n)–– Dudoso costo beneficioDudoso costo beneficio–– Utilizarla racionalmenteUtilizarla racionalmente