Post on 03-May-2015
Estrazione del DNA del kiwi e della bananaTortando scientifico
La ricetta
100 g di polpa di kiwi o banana
3 g di sale fino
10 ml detersivo liquido
Succo di ananas q.b.
Acqua q.b.
Alcool freddo q.b.
Ghiaccio q.b.
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GLI INGREDIENTI
La ricetta
Termometro
Pentola per il bagnomaria
Colino
Beuta da 250 ml
Bacchetta agitatrice
Cilindri graduati
Siringhe senza ago ( 10 e 5 ml)
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GLI STRUMENTI
I PARTECIPANTI
La continuità: i diversi approcci
Per le prime classi si tratta di preparare una “pozione magica”.
Per gli alunni della secondaria si tratta di verificare la riuscita dell’esperienza.
Il procedimento
Il DNA è contenuto nel nucleo delle cellule del kiwi e della banana. Per liberarlo, è necessario demolire le membrane cellulari e quelle del nucleo. Poichè queste membrane sono costituite da molecole ricche di grassi, basterà scioglierle usando del detersivo liquido. Useremo anche un po' di sale che ha la funzione di facilitare l'eliminazione delle proteine su cui è avvolto il DNA (gli istoni)
Pesiamo il sale
3 g
Pesiamo l’acqua
80 g
Versiamo l’acqua nel sale
Mescoliamo con cura per far sciogliere il sale
Versiamo il detersivo nella soluzione salina
Cerchiamo di non produrre schiuma
Prepariamo il detersivo per demolire le membrane cellulari e nucleiche
10 ml 10 ml
Aggiungiamo ancora acqua fino a raggiungere i 100 cc
Preparazione della poltiglia per separare le cellule le une dalle altre ed
esporle direttamente all'azione della soluzione di estrazione.
• Sbucciamo il kiwi e ne schiacciamo la polpa con la forchetta
Pesiamo la polpa schiacciata
100 g
Prepariamoci ad estrarre il DNA
Ora è necessario demolire le membrane cellulari e quelle del loro nucleo per liberare il DNA.
La poltiglia, immersa nella soluzione di estrazione, verrà portata a 60°C per accelerare e favorire il processo, oltre che per disattivare certi enzimi che potrebbero degradare il DNA.
Dopo 15 minuti dobbiamo però togliere la beuta dal bagnomaria a 60° (mantenuti costanti) perché il DNA comincia a degradarsi frammentandosi. Questa è la ragione per cui bisogna raffreddare immediatamente la poltiglia nel ghiaccio.
Versiamo la soluzione d’estrazione nella poltiglia……
..oppure la poltiglia nella soluzione
Immergiamo la beuta nell’acqua a 60°C per 15 minuti
KIWI BANANA
Controlliamo costantemente la temperatura dell’acqua
60° C ! 60° C !
Trascorsi i 15 minuti immergiamo la beuta nel ghiaccio.
5 minuti
Filtriamo con attenzione e raccogliamo un liquido ricco di DNA, separato dai residui cellulari e dagli altri tessuti del frutto che rimangono nel colino.
KIWI BANANA
RESIDUI DEL KIWI RESIDUI DELLA BANANA
Filtrato del kiwiFiltrato della banana
RIMOZIONE DELLE PROTEINE
Ora cercheremo di ottenere un DNA più puro, allontanando gli istoni
che sono le proteine intorno alle quali è avvolto il DNA.
Per allontanarle, si possono usare enzimi proteolitici, quale per esempio
la “proteasi“, che però non sono facili da reperire.
Visto che il nostro desiderio è quello di far ripetere questo esperimento
anche a casa, abbiamo sostituito la proteasi con il succo di ananas che
contiene la bromelina, una sostanza capace di demolire le proteine negli
amminoacidi di cui sono composte facilitandone quindi l'eliminazione.
A tutto succo!!!!
Preleviamo 3 cc di succo di ananas e li uniamo a 15 cc di soluzione filtrata
Finalmente evidenziamo il DNA
ll DNA è molto solubile nell’acqua, dove non si vede, ma è insolubile nell’alcool, nel quale precipita diventando quindi visibile.
Quindi aggiungiamo alcool gelato alla soluzione presente nella provetta, per vedere il DNA.
Versiamo lentamente nella provetta l’alcool freddo e cerchiamo di evitare che si mescoli con il filtrato. La quantità dell’alcool deve essere pari alla quantità di filtrato.
KIWI BANANA
Aspettiamo 5 minuti per consentire al DNA di precipitare e raccogliersi tra l’alcool e il filtrato sottostante
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FINALMENTE!!!
Ora possiamo vedere una sostanza bianchiccia, la cui quantità tende ad aumentare.
Si tratta del DNA della frutta.
All'interno di questa massa ci sono numerose bollicine d'aria. Ciò è dovuto al fatto che l'alcool ha assorbito gas mentre era nel congelatore ed ora, riscaldandosi, lo espelle.