Un Test Cutaneo negativo può essere : Realmente negativo; Falsamente negativo per cause: * inerenti all’individuo :

- cute atrofica o poco irrorata o edematosa,      - iporesponsività da recente reazione allergica,       - somministrazione di farmaci interferenti (anti-h1, ecc),       - iporesponsività da pregresse prove cutanee, - alterazione del circolo, * inerenti all’allergene: - mancato impiego dell’allergene specifico, - estratto troppo diluito o inattivo,

Da sindrome clinica non immunologica: - alimenti, farmaci e prodotti del loro metabolismo,

Da allergia recente : * sensibilizzazione temporaneamente limitata alle mucose delle vie respiratorie, ecc.,Da allergia localizzata : * sensibilizzazione esclusiva delle vie respiratorie, ecc.

Un Test Cutaneo positivo può :

Avere significato etiologico in rapporto alla manifestazioni cliniche del paziente;

Non avere significato etiologico rispetto alla sindrome in atto ;

Essere falsamente positivo.

PRICK TEST

• Un test cutaneo positivo non implica necessariamente una allergia clinicamente manifesta verso un allergene

• La negatività del test in presenza di una anamnesi sospetta per una rinite o asma allergica, impone un ulteriore approfondimento diagnostico

• Determinazione IgE totali e specifiche

• Determinazione di anticorpi non-IgE verso allergeni

• Dosaggio di mediatori chimici flogogeni

• Dosaggio di immunocomplessi

• Dosaggio di frazioni complementari

•Eosinofili su secreto nasale

TEST IN VITRO

Ricerca delle IgERicerca delle IgE

IgE TotaliIgE Totali

IgE Specifiche

Le IgE totali costituiscono lo 0,004% di tutte Le IgE totali costituiscono lo 0,004% di tutte le immunoglobuline. le immunoglobuline.

Concentrazione siericaConcentrazione sierica:: Adulti non atopiciAdulti non atopici: 10 - 100 KU/l: 10 - 100 KU/l Neonati:Neonati: alcune KU/l (aumenta alcune KU/l (aumenta con gli anni fino a raggiungere con gli anni fino a raggiungere i valori dell'adulto verso i 10 anni i valori dell'adulto verso i 10 anni di età). di età).

Dosaggio delle IgE Totali Dosaggio delle IgE Totali

Tecnica Immunoenzimatica: analogo principio, unica differenza consiste nel marcatore che in questo caso è un enzima e non un isotopo radioattivo.

Tecnica Radioimmunologica (es. PRIST= Paper Radio Immuno Sorbent Test):

Il Dosaggio delle IgE Totali va Il Dosaggio delle IgE Totali va attentamente e criticamente attentamente e criticamente

valutato valutato

Valori aumentati di IgE totaliValori aumentati di IgE totali si possono riscontrare: nelle sindromi allergiche IgE-mediate, senza distinguere: - le diverse malattie allergiche, - il tipo di allergene, - il numero di allergeni coinvolti, - la presenza o meno nell’ ambiente dell'allergene, -l'aver praticato o meno immunoterapia specifica, in condizioni morbose non allergiche quali:

- Plasmocitoma-IgE, - Connettiviti; - Sindromi da deficienza immunologica congenita (S. da Iper-IgE, Deficit di IgA,S. di Wiskott-Aldrich, S. di Di Gorge, S. di Nezelof);

- AIDS, - Parassitosi intestinali,

in condizioni fisiologiche (es. fumatori)

Valori normali di IgE totaliValori normali di IgE totali tuttavia non permettono di escludere la diagnosi di allergopatia.

Il dosaggio delle IgE totali Il dosaggio delle IgE totali non consentenon consente di di formulare una diagnosi patogenetica di formulare una diagnosi patogenetica di sindrome allergicasindrome allergica

Il dosaggio delle IgE totali Il dosaggio delle IgE totali può risultare utilepuò risultare utile in in studi familiari di tipo prospettico, in quanto nei studi familiari di tipo prospettico, in quanto nei primi anni di vita fornisce informazioni circaprimi anni di vita fornisce informazioni circa la predizione di atopia la predizione di atopia

Quindi:Quindi:

Ricerca delle IgEsRicerca delle IgEs

IgE Specifiche

DDosaggio delle IgE specifiche

Tecnica basata sulla marcatura delle IgE( es.RAST; ELISA)

Tecnica basata sulla marcatura dell’allergene ( es.Metodica a Cattura)

Il dosaggio delle IgE specifiche é riservato a reazioni allergiche IgE mediate:

Si può eseguire, dopo aver effettuato le cutireazioni, per ottenere conferma diagnostica

Possono essere eseguite, al posto dei test cutanei, quando questi risultino poco affidabili per:

   iporeattività cutanea legata a: - età (primi anni di vita, età avanzata) - farmaci (anti h-1, steroidi, ecc.) - precedenti reazioni cutanee intensamente positive - recenti reazioni allergiche

alterata reattività cutanea (ipo o iperreattività) legata a: - malattia allergica o extraallergica in fase acuta e grave    -   affezioni cutanee estese

Il Dosaggio delle IgE Specifiche va Il Dosaggio delle IgE Specifiche va attentamente e criticamente attentamente e criticamente

valutato valutato

Il Il livello di IgE specifichelivello di IgE specifiche non è sempre non è sempre correlatocorrelato con la gravità della sindrome clinica con la gravità della sindrome clinica

la la positività delle IgE specifiche può non rivestire positività delle IgE specifiche può non rivestire significato eziologicosignificato eziologico nei confronti della malattia in atto (es. nei confronti della malattia in atto (es. Cross-reattività con alimenti vegetali, che si riscontra spesso nei Cross-reattività con alimenti vegetali, che si riscontra spesso nei pollinosici, senza che vi sia alcuna manifestazione clinica dopo pollinosici, senza che vi sia alcuna manifestazione clinica dopo ingestione di quegli alimenti).ingestione di quegli alimenti).

Il Il dosaggio di IgE specifichedosaggio di IgE specifiche ha sensibilità e ha sensibilità e specificità inferiori rispetto ai test cutaneispecificità inferiori rispetto ai test cutanei

Le tecniche di dosaggio delle IgE specificheLe tecniche di dosaggio delle IgE specifiche misuranomisurano il legame tra le IgE e l’allergene, che è condizionato il legame tra le IgE e l’allergene, che è condizionato da:da:

quantità di allergene disponibile quantità di allergene disponibile quantità e avidità degli anticorpi specifici (anche non-IgE) quantità e avidità degli anticorpi specifici (anche non-IgE) presenti presenti

Ciò comporta alcuni problemiCiò comporta alcuni problemi:: Legame aspecifico tra IgE e allergene in fase solidaLegame aspecifico tra IgE e allergene in fase solida:: - impiego di allergeni scarsamente purificati (es. alimentari),- impiego di allergeni scarsamente purificati (es. alimentari), - sieri con alti livelli di IgE totali;- sieri con alti livelli di IgE totali; con valori delle IgE specifiche più elevati del reale o con false con valori delle IgE specifiche più elevati del reale o con false positività; positività;

Interferenza di anticorpi specifici non-IgEInterferenza di anticorpi specifici non-IgE (es. IgG- (es. IgG- specifici ) che competono con le IgE nei confronti dell’allergene specifici ) che competono con le IgE nei confronti dell’allergene in fase solida (es. soggetti in immunoterapia), con valori delle IgE in fase solida (es. soggetti in immunoterapia), con valori delle IgE specifiche meno elevati del reale o con false negatività .specifiche meno elevati del reale o con false negatività .

Nel complesso i Test Sierologici per laNel complesso i Test Sierologici per la determinazione delle IgE specifiche sonodeterminazione delle IgE specifiche sono affidabiliaffidabili

La La loro concordanza con i test cutanei èloro concordanza con i test cutanei è elevata,elevata, soprattutto per gli allergeni da soprattutto per gli allergeni da inalazione (circa 89,5% per i pollini).inalazione (circa 89,5% per i pollini). I I casi discordanti con negatività dei testcasi discordanti con negatività dei test cutanei e positività dei test sierologicicutanei e positività dei test sierologici sono sono rari, ciò accade per:rari, ciò accade per:

errori di esecuzione o di valutazione (false positività), errori di esecuzione o di valutazione (false positività), ruolo delle IgG-STS.ruolo delle IgG-STS.

Ricerca delle IgEsRicerca delle IgEs

IgE Specifiche verso singole molecole

PRODUZIONE DI MOLECOLE ALLERGENICHE RICOMBINANTI

PRODUZIONE DI MOLECOLE ALLERGENICHE RICOMBINANTI

NOMENCLATURA

Fel d 1Genere Specie Cronologia Isoallergeni

IDENTICHE FUNZIONI BIOLOGICHE

PESO MOLECOLARE SIMILE

>67% IDENTITA’ DELLA SEQUENZA AA.

.01varianti

02

ALLERGENI RICOMBINANTI NELLA DIAGNOSTICA

• Discrepanza tra reattività IgE sieriche e attività biologica

• Capacità di legame con IgE sieriche• Attività allergenica• Espressione degli epitopi

• E. lineari (continui)• E. conformazionali (discontinui)