Malattie genetiche da espansione di triplette Chiara Zuccato

Università degli Studi di Milano Dipartimento di Bioscienze e

Istituto Nazionale di Genetica Molecolare

Milano, 5 novembre 2015 !

Outline La loro origine Classificazione Tre esempi: X fragile, Distrofia Miotonica, Malattia di Huntington Strategie terapeutiche

Caratterizzate da un aumento eccessivo di ripetizioni di triplette nucleotidiche (CAG, CCG, CGG, GAA , CTG) in geni a funzione nota od ignota Causano in genere disordini neurologici (malattie neurologiche, neurodegenerative e neuromuscolari) Tendenza al rapporto lineare fra numero di numero di ripetizioni e gravità del quadro clinico Spesso associate al fenomeno dell’anticipazione genetica (= esordio più precoce da una generazione alla successiva e aggravamento dei sintomi) spiegato con la “genetica dinamica”

Malattie da triplette

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da perdita di funzione X fragile X-linked CGG FMR1 X 5’UTR 6-60 >200 ritardo mentale

alterazoni del comportamento

FRAXE X-linked CCG AFF2 X 5'UTR 4-39 200-900 ritardo mentale

Atassia di Friedreich

autos. dominant.

GAA Frataxin 9 Intron 6-32 200-1700 disturbi equilibrio, coordinazione, deambulazione, cardiopatia, diabete

Da tossicità da RNA Distrofia miotonica tipo 1

autos. dominant.

CTG DMPK 19 3’UTR 5-37 50-10.000 perdita di massa muscolare, miotonia, cataratta, difetti cardiaci, alterazioni endocrine, deficit cognitivi

Distrofia miotonica tipo 2

autos. dominant.

CCTG ZNF9 3 3’UTR 10-26 75-11.000 rigidità muscolare, miotonia, cardiomiopatia, cataratta, compromissione sistema endocrino, problemi respiratori

FXTAS X-linked CGG

FMR1 X 5’UTR 6-60 60-200 (pre-mut)

atassia, tremore, parkinsonismo, demenza

Espansione di triplette in regioni non codificanti !

Ipotesi sulla loro origine

La presenza di un aumentato numero di ripetizioni provoca, nel DNA, la formazione di strutture a forcina, assenti quando il numero di ripetizioni è nel range di normalità ̀ Queste strutture causano problemi sia nei processi di replicazione (slippage della polimerasi), sia probabilmente nei meccanismi di riparazione del DNA La conseguenza ultima è la tendenza all’incremento numerico delle ripetizioni dopo replicazione (sia mitotica che meiotica!). Per lo stesso principio, sono possibili anche le contrazioni di ripetizioni, ma per la maggior parte delle patologie le espansioni sono favorite

Il fenomeno dell’instabilità

Instabilità mitotica: presenza di espansioni di grandezze differenti all’interno dello stesso tessuto e tra tessuti diversi (mosaicismo tissutale) Instabilità meiotica: trasmissione alle generazioni successive di una espansione di diversa ampiezza. E’ alla base del meccanismo dell’anticipazione genetica.

Il fenomeno dell’instabilità

McMurray, 2011

Slippage

McMurray, 2011

Slippage

McMurray, 2011

Slippage

McMurray, 2011

Slippage

Classificazione

Da espansione di triplette in regioni non codificanti La mutazione causa perdita di funzione o determina la produzione di un RNA tossico. Da espansione di triplette in regioni codificanti La mutazione porta ad una proteina mutata con guadagno di funzione tossica e/o perdita di funzionalità.

Malattie da triplette

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da perdita di funzione X fragile X-linked CGG FMR1 X 5’UTR 6-60 >200 ritardo mentale

alterazoni del comportamento

FRAXE X-linked CCG AFF2 X 5'UTR 4-39 200-900 ritardo mentale

Atassia di Friedreich

autos. dominant.

GAA Frataxin 9 Intron 6-32 200-1700 disturbi equilibrio, coordinazione, deambulazione, cardiopatia, diabete

Da tossicità da RNA Distrofia miotonica tipo 1

autos. dominant.

CTG DMPK 19 3’UTR 5-37 50-10.000 perdita di massa muscolare, miotonia, cataratta, difetti cardiaci, alterazioni endocrine, deficit cognitivi

Distrofia miotonica tipo 2

autos. dominant.

CCTG ZNF9 3 3’UTR 10-26 75-11.000 rigidità muscolare, miotonia, cardiomiopatia, cataratta, compromissione sistema endocrino, problemi respiratori

FXTAS X-linked CGG

FMR1 X 5’UTR 6-60 60-200 (pre-mut)

atassia, tremore, parkinsonismo, demenza

Espansione di triplette in regioni non codificanti !

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da acquisto di funzione tossica e/o perdita di funzione HD (Huntington)

Autos. Dom.

CAG IT15 4

coding 11-34 40-121 disturbi emotivi, cognitivi, alter. movimento

SBMA (Kennedy’s)

X-linked CAG

Androgen receptor

X

coding 9-36 38-62 atrofia, disartria, disfonia, anomalie mov.

DRPLA Autos. Dom.

CAG

Atrophin-1 12 coding 7-34 49-88 atassia, demenza

SCA1 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-1 6 coding

6-39 40-82

incoordinazione motoria, disturbi dell’equilibrio e del cammino, anomalie dei movimenti oculari, disartria, alterazioni della forza e del tono muscolare

SCA2 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-2 12 coding 15-24 32-200

SCA3 Autos. Dom. CAG

Ataxin-3 14 coding

13-36 61-84

SCA6 Autos. Dom.

CAG

CACNA1A 19 coding

4-20 20-29

SCA7 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-7 3 coding

4-35 37-306

SCA17 Autos. Dom.

CAG

TBP 6 coding

25-42 47-63

Espansione di triplette in regioni codificanti !

Malattie da espansioni di alanina Espansione di triplette (GCN) che codificano per l’aminoacido alanina normalmente in regioni codificanti (esoni) La maggior parte è autosomica dominante. Alcune hanno una trasmissione legata al cromosoma X Possono essere dovute sia ad un’acquisto di funzine tossica da parte della proteina mutata sia da parte di che ad una perdità di funzione della proteina normale

Malattie da espansioni di alanina

Primo esempio: X fragile Perdita di funzione

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da perdita di funzione X fragile X-linked CGG FMR1 X 5’UTR 6-60 >200 ritardo mentale

alterazoni del comportamento

FRAXE X-linked CCG AFF2 X 5'UTR 4-39 200-900 ritardo mentale

Atassia di Friedreich

autos. dominant.

GAA Frataxin 9 Intron 6-32 200-1700 disturbi equilibrio, coordinazione, deambulazione, cardiopatia, diabete

Da tossicità da RNA Distrofia miotonica tipo 1

autos. dominant.

CTG DMPK 19 3’UTR 5-37 50-10.000 perdita di massa muscolare, miotonia, cataratta, difetti cardiaci, alterazioni endocrine, deficit cognitivi

Distrofia miotonica tipo 2

autos. dominant.

CCTG ZNF9 3 3’UTR 10-26 75-11.000 rigidità muscolare, miotonia, cardiomiopatia, cataratta, compromissione sistema endocrino, problemi respiratori

FXTAS X-linked CGG

FMR1 X 5’UTR 6-60 60-200 (pre-mut)

atassia, tremore, parkinsonismo, demenza

Espansione di triplette in regioni non codificanti !

Sindrome dell’X fragile (Sindrome di Martin-Bell o FRAX)

E’ la forma ereditaria più diffusa di ritardo mentale e seconda sindrome ereditaria per frequenza dopo la Sindrome di Down

Malattia causata dalla mutazione del gene FMR1 (Fragile X Mental Retardation-1) situato sul braccio lungo del cromosoma X

Colpisce: 1 maschio su 4000 Portatori sani: 1 su 800

1 femmina su 6000 1 su 256

La mutazione del DNA modifica la struttura del cromosoma X

�Strozzatura� in regione terminale (Xq27.3) dove è situato il gene FMR1

Sintomatologia Sviluppo mentale molto variabile, con capacità cognitive quasi normali oppure grave ritardo. Comportamenti simili all'autismo (iperattività, avversione al contatto fisico, comportamenti stereotipati) e da frequenti crisi epilettiche. Trattamento Attualmente non esiste alcun trattamento specifico Terapia riabilitativa motoria o psicopedagogica

Sindrome dell’X fragile

La mutazione del gene FMR1

Normale la tripletta CGG (esone 1 del gene FMR1) è ripetuta da 6 a 55 volte

Portatori sani (premutazione) la tripletta CGG è ripetuta da 56 a 200 volte il gene FMR1 funziona ancora ! nessun sintomo

Affetti (mutazione) la ripetizione della tripletta CGG supera le 200 copie

metilazione citosine nel promotore

blocco promotore

mancata espressione gene FMR1

Costrizione e fragilità banda Xq27.3

Gene FMR1

La mutazione blocca la produzione della proteina FMRP (fragile X-mental retardation protein) Proteina implicata nello sviluppo delle connessioni neuronali del cervello Lega gli RNA (RNA-binding protein) Espressa soprattutto nei testicoli e nel cervello (i tessuti più colpiti) FMRP si associa a mRNA codificanti importanti proteine neuronali e ne regola

aspetti essenziali: trasporto lungo i dendriti verso le sinapsi e traduzione in proteine.

In assenza di FMRP, molti degli mRNA bersaglio sono deregolati, e

maggiormente tradotti in proteine.

Sindrome dell’X fragile

Trasmissione (per via materna)

portatrice sana

XY XX premutazione

XY XX XY XX normale normale affetto liev. affetto

La tendenza all’espansione si verifica maggiormente quando la premutazione è trasmessa per via materna. Durante la maturazione dell’ovulo la premutazione può espandersi e diventare mutazione completa. !

normali portatrici sane

portatore sano

XY XX

XY XY XX XX

premutazione

premutazione premutazione

Trasmissione (per via paterna)

Quando la premutazione è trasmessa dal padre rimane stabile. Le figlie femmine riceveranno la premutazione senza che avvengano variazioni nel numero delle triplette CGG. I figli maschi ricevono dal padre il cromosoma Y, pertanto non sono a rischio di ereditare la premutazione.

Secondo esempio: distrofia miotonica Tossicità dell’RNA mutato

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da perdita di funzione X fragile X-linked CGC FMR1 X 5’UTR 6-60 >200 ritardo mentale

alterazoni del comportamento

FRAXE X-linked CCG AFF2 X 5'UTR 4-39 200-900 ritardo mentale

Atassia di Friedreich

autos. dominant.

GAA Frataxin 9 Intron 6-32 200-1700 disturbi equilibrio, coordinazione, deambulazione, cardiopatia, diabete

Da tossicità da RNA Distrofia miotonica tipo 1

autos. dominant.

CTG DMPK 19 3’UTR 5-37 50-10.000 perdita di massa muscolare, miotonia, cataratta, difetti cardiaci, alterazioni endocrine, deficit cognitivi

Distrofia miotonica tipo 2

autos. dominant.

CCTG ZNF9 3 3’UTR 10-26 75-11.000 rigidità muscolare, miotonia, cardiomiopatia, cataratta, compromissione sistema endocrino, problemi respiratori

FXTAS X-linked CGG

FMR1 X 5’UTR 6-60 60-200 (pre-mut)

atassia, tremore, parkinsonismo, demenza

Espansione di triplette in regioni non codificanti !

Genetica La mutazione è l’espansione della tripletta nucleotidica CTG presente nella regione non tradotta all’estremita ̀ 3’ del gene DMPK (DM proteina chinasi) localizzato sul braccio lungo del cromosoma 19 (19q13.3). Si produce un RNA messaggero con tratto di triplette espanso che determina tossicità. Sequestra proteine necessarie per il processamento nucleare dell’RNA, sottraendole ad altri trascritti e inibendo così importanti funzioni cellulari. Anticipazione Aumento della lunghezza del tratto di triplette quando la trasmissione è materna piuttosto che paterna.

Distrofia miotonica

Distrofia miotonica

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da acquisto di funzione tossica e/o perdita di funzione HD (Huntington)

Autos. Dom.

CAG IT15 4

coding 11-34 40-121 disturbi emotivi, cognitivi, alter. movimento

SBMA (Kennedy’s)

X-linked CAG

Androgen receptor

X

coding 9-36 38-62 atrofia, disartria, disfonia, anomalie mov.

DRPLA Autos. Dom.

CAG

Atrophin-1 12 coding 7-34 49-88 atassia, demenza

SCA1 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-1 6 coding

6-39 40-82

incoordinazione motoria, disturbi dell’equilibrio e del cammino, anomalie dei movimenti oculari, disartria, alterazioni della forza e del tono muscolare

SCA2 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-2 12 coding 15-24 32-200

SCA3 Autos. Dom. CAG

Ataxin-3 14 coding

13-36 61-84

SCA6 Autos. Dom.

CAG

CACNA1A 19 coding

4-20 20-29

SCA7 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-7 3 coding

4-35 37-306

SCA17 Autos. Dom.

CAG

TBP 6 coding

25-42 47-63

Espansione di triplette in regioni codificanti !

Ross C.A. (1995) Neuron 15:493-496

Nucleo caudato, putamen, globo pallido, corteccia

Cervelletto, globo pallido, putamen, nucleo caudato, talamo, nucleo subtalamico, sostanza nera

Globo pallido, cervelletto, ponte, sostanza nera, corna anteriori del midollo

Cervelletto, nucleo olivare inferiore (midollo allongato), ponte, corna anteriori del midollo, via piramidale

Motoneuroni, gangli dorsali, muscolo scheletrico

Meccanismi di patologia comuni

Gli aggregati

Il sovraccarico del proteosoma Il proteosoma non è in grado di degradare in modo efficiente le proteine con tratti polyQ espansi che quindi si accumulano ed aggregano Aggregati tossici o fenomeno protettivo? Tossici: gli aggregati reclutano proteine sottraendole ai loro pathways fisiologici nella cellula. Protettivi: le proteine mutate e/o i loro frammenti in forma solubile (non aggregata) sono tossici. Gli aggregati sono protettivi perché sottraggono alle cellule frammenti solubili e tossici.

Meccanismi di patologia comuni

Proteolisi della proteina mutata Alterazioni del metabolismo energetico Difetti della trascrizione genica Disfunzioni della sinapsi

Terzo esempio: Malattia di Huntington Da acquisto di funzione tossica e/o Perdita di funzione

Malattia Ered Tripletta Gene Chr Loc$ Ripetiz Norm

Ripetiz Patol

Caratteristiche cliniche

Da acquisto di funzione tossica e/o perdita di funzione HD (Huntington)

Autos. Dom.

CAG IT15 4

coding 11-34 40-121 disturbi emotivi, cognitivi, alter. movimento

SBMA (Kennedy’s)

X-linked CAG

Androgen receptor

X

coding 9-36 38-62 atrofia, disartria, disfonia, anomalie mov.

DRPLA Autos. Dom.

CAG

Atrophin-1 12 coding 7-34 49-88 atassia, demenza

SCA1 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-1 6 coding

6-39 40-82

incoordinazione motoria, disturbi dell’equilibrio e del cammino, anomalie dei movimenti oculari, disartria, alterazioni della forza e del tono muscolare

SCA2 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-2 12 coding 15-24 32-200

SCA3 Autos. Dom. CAG

Ataxin-3 14 coding

13-36 61-84

SCA6 Autos. Dom.

CAG

CACNA1A 19 coding

4-20 20-29

SCA7 Autos. Dom.

CAG

Ataxin-7 3 coding

4-35 37-306

SCA17 Autos. Dom.

CAG

TBP 6 coding

25-42 47-63

Espansione di triplette in regioni codificanti !

Corea di Huntington

Woody Guthrie

La famiglia Wexler

CAG (9-35)

CAG (>36) gene mutato

gene sano

CAG!size!

numbe

r!of!cho

rmosom

ese!

Individui$con$(27.35$CAG):$5.8%$

Allele$intermedio$

Il CAG del gene HD nella popolazione umana

mala?a$

278 soggetti sani: a CAG lunghi nel range sano si associa un aumento di materia grigia nel globo pallido.

Pazienti HD che portano l’allele sano con alto CAG hanno meno difetti cognitivi

Pazienti HD presintomatici ottengono punteggi migliori dei soggetti sani nei test di percezione visiva

2012

2012

2009

embrione

Essenziale per lo sviluppo del SNC

E’ neuroprotettiva ed implicata nell’attività sinaptica

adulto

Funzioni del gene HD

CAG lunghi nel range sano come modulatori positivi della funzione neuronale del gene Huntington?

!

Sequenze ricche in glutammina (Q): - Sono presenti frequentemente negli eucarioti. Si ritrovano nei lieviti e il loro numero aumenta negli invertebrati e nei mammiferi, indicando che gli organismi più complessi necessitano di queste sequenze ripetute. - Si ritrovano in proteine importanti per lo sviluppo e in domini proteici funzionali - Non si conosce ancora il loro significato, vi sono diverse ipotesi:

modulare nuovi domini proteici modulare lo sviluppo e aggiungere nuove diversità nella specie.

The conviction has been growing that much of this extra DNA is ‘junk’, in other words, that it has little specificity and conveys little or no selective advantage to the organism.

Orgel&Crick (1980) Nature

Although SSRs are commonly regarded as ‘junk’, evidence for many molecular and phenotypic effects of CAG repeat-number variation has lent support to the hypothesis that CAG could have a positive role in adaptive evolution.

Kashi et al. (2006) Trends in Genetics

CAG!size!

numbe

r!of!chrom

osom

es!

Individui$con$(27.35$CAG):$5.8%$

Allele$intermedio$

Il CAG del gene HD nella popolazione umana

mala?a$Incidenza: 12,3 su 100.000

Meccanismi patogenetici

Eccitotossicità e attività sinaptica

Proteolisi

Aggregati

Disfunzioni mitocondriali

Alterazioni trascrizione genica

Strategie terapeutiche

La prima via

Farmaci che contrastano meccanismi di patologia

Alterazioni del metabolismo energetico Difetti della trascrizione genica Disfunzioni della sinapsi

ricerca di base pre-clinica fase 1 fase 2 fase 3 disponibile

Riluzolo

memantina

Tetrabenazina

ACR-16 (Huntexil)

Proteolisi

Inibitori di caspasi-6

Aggregati

Trealosio

C2-8

Farmaci che stimolano clearance

Creatina

Coenzima Q10

Eicosapentaenoic acid (EPA)

Cisteamina

Alterazioni trascrizione genica

Sodiofenilbutirrato HDACi 4b

Minociclina

Dalla ricerca alla clinica: nuove molecole

Eccitotossicità e attività sinaptica

Disfunzioni mitocondriali

La seconda via

Nobel per la Medicina o la Fisiologia 2006

Fire et al., Nature 1998

Craig Mello Andrew Fire

Scoperta degli RNA interferenti 1998

mutazione

gene

RNA messaggero

proteina

Bloccare la produzione di proteina mutata: molecole interferenti

mutazione

gene

RNA messaggero

proteina

Bloccare la produzione di proteina mutata: molecole interferenti

mutazione

gene

RNA messaggero

proteina

Bloccare la produzione di proteina mutata: molecole interferenti

degradazione

ASO

Drosha

Exportina-5

Dicer

miRNA/siRNA

pre-mRNA

pre-miRNA

RISC

pri-miRNA

mRNA

splicing

pre-miRNA

membrana cellulare citoplasma

miRNA

shRNA

siRNA

ss-siRNA

blocco traduzione

Totale complementarità Parziale complementarità

degradazione mRNA

mRNA

degradazione

RNAsi H

RNAsi H

Tools Modello MH Somministrazione Specificità

N171-82Q

R6/1

HD190QG

Referenze

Harper 2005

Rodriguez-Lebron 2005

Machida 2006

CAG140

siRNA

Hdh Q150

shRNA virus AAV5

R6/2

Wang 2005

virus AAV1

virus AAV5

virus AAV5

ASO

ss-siRNA

minipompa osmotica

R6/2 adenovirus Huang 2007

McBride 2008

miRNA N171-82Q

CAG140 McBride 2008

Boudreau 2009

R6/2 liposomi

AAV-Htt100Q Di Figlia 2007

Lenti-N171-82Q Lenti-N853-82Q

lentivirus Drouet 2009

Rat AAV-HD70d virus AAV1 Franich 2008

BACHD

minipompa osmotica

colesterolo

YAC128 Stanek 2013

Yu 2012

Kordasiewicz 2012 Carrol 2011

virus AAV1 umana

umana

umana

umana

umana

Don Cleveland Frank Bennett Seng Cheng

UCSD ISIS Genzyme

ASO efficaci in 3 modelli animali MH 2012

ISIS-HTTRX non selettivi per l’huntingtina mutata

Somministrati IT nel CSF. Dopo 21 giorni si osserva: - Robusta diminuzione di HTT nella spina dorsale e in corteccia - 20% di riduzione HTT in caudato - non ci sono dati sul putamen

ASO al Rhesus macaca 2012

ASO, studio clinico per la MH 2015

Sarah Tabrizi, University College London in collaborazione con ISIS Pharmaceutical

ISIS-HTTRX – ASO non selettivo per HTT mutata

Edward Wild

HTT nel CSF 2015

Michael Hayden

I problemi da risolvere Colpire in modo selettivo l’allele mutato preservando quello sano

embrione

Essenziale per lo sviluppo del SNC

E’ neuroprotettiva ed implicata nell’attività sinaptica

adulto

Funzioni del gene HD

CAG (9-35)

Il gene Huntington

gene normale

CAG (>36) gene mutato

Silenziare HTT mutata attraverso 2 approcci:

Colpire il tratto CAG espanso

Colpire SNPs (polimorfismo a singolo nucleotide) specifici per l’allele mutato

2012 David Corey

gene sano gene MH

mRNA sano

mRNA MH

ss-siRNA per HTT mutata

Michael Hayden

ASO che riconoscono SNPs 2014

Introni UTR

Colpire da 3 a 5 degli SNPs offre opportunità terapeutiche a 75-88% dei pazienti MH

Esoni

gene sano gene MH

mRNA sano

mRNA MH

degradazione mRNA MH

SNPs

I problemi da risolvere Somministrazione e biodistribuzione Tempi di trattamento e monitoraggio

Metodo di somministrazione Somministrazione intratecale (IT) (Miller et al., 2013) per ASO ma non per siRNA. Pompe per infondere gli ASO direttamente nel cervello Alnylam Pharmaceuticals (Cambridge, MA, USA) Medtronic (Minneapolis, MN, USA). Sviluppo di sistemi per permettere ad ASO (e siRNA) di superare meglio le barriere biologiche (nucleasi, RES, membrana plasmatica, sistema endosomi/lisosomi). Tempi Molto lunghi visto il decorso MH? decenni? Somministrazioni multiple?

La terza via

Le cellule staminali embrionali

spermatozoo

cellula uovo zigote

morula

blastocisti

trofoblasto

massa cellulare interna

cellule staminali embrionali

cellule dell’intestino cellule del pancreas

cellula muscolare

cellule del sangue

epatociti neurone

trapianto

paziente

Ross C.A. (1995) Neuron 15:493-496

Nucleo caudato, putamen, globo pallido, corteccia

Cervelletto, globo pallido, putamen, nucleo caudato, talamo, nucleo subtalamico, sostanza nera

Globo pallido, cervelletto, ponte, sostanza nera, corna anteriori del midollo

Cervelletto, nucleo olivare inferiore (midollo allongato), ponte, corna anteriori del midollo, via piramidale

Motoneuroni, gangli dorsali, muscolo scheletrico

Danno cerebrale localizzato favorevole al trapianto di nuovi neuroni

0 15 45 giorni 80

Da staminale embrionale a neurone dello striato

Neuroni striatali

Ottimizzare le procedure di differenziamento per ottenere neuroni striatali funzionali

Capire se questi neuroni possono sostituire le cellule che degenerano

I prossimi obiettivi

Grazie per l’attenzione