SPERMIOGRAMMASPERMIOGRAMMA

Dr. Fulvio CesaroniDr. Fulvio Cesaroni

Anamnesi personale e familiareAnamnesi personale e familiare

anamnesi clinica del paziente: malattie anamnesi clinica del paziente: malattie sessualmente trasmesse (MST), prostatiti, sessualmente trasmesse (MST), prostatiti, epididimiti, traumi scotali ed interventi incluso il epididimiti, traumi scotali ed interventi incluso il varicocele, vasectomie, erniorrafie inguinali, varicocele, vasectomie, erniorrafie inguinali, vasectomiavasectomia

Storia riproduttiva ed eventuali precedenti Storia riproduttiva ed eventuali precedenti paternità con la stessa o altra partnerpaternità con la stessa o altra partner

Interazioni sessuali della coppia: frequenza dei Interazioni sessuali della coppia: frequenza dei rapporti sessualirapporti sessuali

Assunzione di farmaci, droghe, tossine da Assunzione di farmaci, droghe, tossine da lavorazionelavorazione

Indagine preliminare Indagine preliminare epidemiologicaepidemiologica

Malattie sessualmente trasmesse:Malattie sessualmente trasmesse: HIVHIV LueLue GonorreaGonorrea TrichomonasTrichomonas MycoplasmaMycoplasma Chlamydia TracomatisChlamydia Tracomatis Herpes virus I e IIHerpes virus I e II HPVHPV

Esami non anteriori a 30 giorni

•HCV e HBVHCV e HBV

RACCOLTA DEL LIQUIDO SEMINALE: RACCOLTA DEL LIQUIDO SEMINALE: modalitàmodalità

Fornire istruzioni scritte per la raccoltaFornire istruzioni scritte per la raccolta Astinenza di 2-6 gAstinenza di 2-6 g Eventuale seconda raccolta per evitare la tensione della Eventuale seconda raccolta per evitare la tensione della

raccolta e per determinare l’esatto periodo di astinenza per raccolta e per determinare l’esatto periodo di astinenza per quel determinato pazientequel determinato paziente

La masturbazione è consigliataLa masturbazione è consigliata In casi particolari è consigliato l’uso di condom non medicatiIn casi particolari è consigliato l’uso di condom non medicati Coito interrotto: sconsigliatoCoito interrotto: sconsigliato

• accurata igiene dei genitali e delle maniaccurata igiene dei genitali e delle mani• astinenza 3-5 ggastinenza 3-5 gg• raccolta in laboratorio (preferibile)raccolta in laboratorio (preferibile)• raccolta domiciliare raccolta domiciliare (esibire entro 60’ evitando (esibire entro 60’ evitando shock termici)shock termici) • contenitore sterile non tossicocontenitore sterile non tossico• rintracciabilità del campione: uso di una rintracciabilità del campione: uso di una etichettaetichetta• accertamento dell’identità personaleaccertamento dell’identità personale• data, ora e luogo di raccoltadata, ora e luogo di raccolta

Modalità di raccolta del liquido seminaleModalità di raccolta del liquido seminale

Cura del campioneCura del campione

Conservazione e valutazione a temperatura Conservazione e valutazione a temperatura ambiente (20-25°C)ambiente (20-25°C)

Non porre il contenitore in termostato prima della Non porre il contenitore in termostato prima della valutazione valutazione (>25°C attiva i movimenti riducendo la (>25°C attiva i movimenti riducendo la durata) durata)

Valutazione al m.o. a contrasto di faseValutazione al m.o. a contrasto di fase

Prima valutazione rapida su vetrino Prima valutazione rapida su vetrino Determinazione precisa con camera Determinazione precisa con camera

di Makler (non c’è bisogno di diluire)di Makler (non c’è bisogno di diluire) Camera di NeubauerCamera di Neubauer KovaKova

Camera di NeubauerCamera di Neubauer

Per il conteggio più preciso degli spz. Per il conteggio più preciso degli spz. in caso di criptozoospermiain caso di criptozoospermia

centrifugacentrifuga

A braccio fisso: per le procedure di A braccio fisso: per le procedure di lavaggio degli spermatozoi.lavaggio degli spermatozoi.

Valori normali del liquido Valori normali del liquido seminale secondo W.H.Oseminale secondo W.H.O

Liquefazione: completa in 60’ a temperatura ambienteLiquefazione: completa in 60’ a temperatura ambiente Aspetto: omogeneo, grigio opalescenteAspetto: omogeneo, grigio opalescente Viscosità: assente dopo liquefazioneViscosità: assente dopo liquefazione Volume ≥ 2 ml Volume ≥ 2 ml pH ≥ 7,2pH ≥ 7,2 Concentrazione nemaspermica ≥20 milioni /ml Concentrazione nemaspermica ≥20 milioni /ml N° totale spz/eiaculato ≥ 40 milioni/eiaculatoN° totale spz/eiaculato ≥ 40 milioni/eiaculato Motilità alla 1h:Motilità alla 1h:

≥ ≥50% con progressione lineare o 50% con progressione lineare o ≥ ≥ 25% con progressione rapida rettilinea25% con progressione rapida rettilinea

Morfologia ≥ 30% forme normli (≥14% sec Kruger)Morfologia ≥ 30% forme normli (≥14% sec Kruger) Vitalità ≥ 50% Vitalità ≥ 50% Leucociti < 1 milione /mlLeucociti < 1 milione /ml MAR test < 10% di spz con particelle aderentiMAR test < 10% di spz con particelle aderenti

VolumeVolume

valori normali: 1,5 - 5 ml valori normali: 1,5 - 5 ml < 0,5 ml ipospermia (ridotta funzione < 0,5 ml ipospermia (ridotta funzione

secretoria delle ghiandole accessorie secretoria delle ghiandole accessorie su base flogistica)su base flogistica)

> 6 ml: iperspermia o poliposia.> 6 ml: iperspermia o poliposia. Aspermia: assenza di liquido Aspermia: assenza di liquido

seminaleseminale

pHpH

Valori normali: 7,2 - 8,4 Valori normali: 7,2 - 8,4 < 7: ostruzione dei dotti eiaculatori < 7: ostruzione dei dotti eiaculatori

con prevalenza del solo secreto con prevalenza del solo secreto prostatico (fosfatasi acida)prostatico (fosfatasi acida)

> 8,5: flogosi delle ghiandole > 8,5: flogosi delle ghiandole accessorieaccessorie

Colore Colore

Il liquido seminale è Il liquido seminale è normalmente translucente o normalmente translucente o grigiastro. La presenza di grigiastro. La presenza di sangue nel seme sangue nel seme (ematospermia) può dare al (ematospermia) può dare al seme un colore rosso scuro. seme un colore rosso scuro. La presenza di sangue nel La presenza di sangue nel seme è un’anomalia che dovrà seme è un’anomalia che dovrà sempre essere evidenziata sempre essere evidenziata nella relazione. nella relazione.

Conta nemaspermicaConta nemaspermica

Valori normali: 20-200 milioni/mlValori normali: 20-200 milioni/ml < 20 milioni/ml: oligozoospermia lieve < 20 milioni/ml: oligozoospermia lieve

/media/media < 5 milioni/ml oligozoospermia severa< 5 milioni/ml oligozoospermia severa < 1 milione/ml criptozoospermia< 1 milione/ml criptozoospermia 0 spz.: azoospermia0 spz.: azoospermia > 350 milioni/ml polizoospermia> 350 milioni/ml polizoospermia

Numero normale e potere fecondanteNumero normale e potere fecondante

Anche < 20 milioni/ml: fecondanteAnche < 20 milioni/ml: fecondante Concetto di total motily count (TMC)Concetto di total motily count (TMC)

Valutazione del numero con sistemi Valutazione del numero con sistemi automatizzati e computerizzatiautomatizzati e computerizzati

Analizzatori seminali automatici: CASA Analizzatori seminali automatici: CASA (computer-aieded sperm analysis)(computer-aieded sperm analysis)

Analizzatori che utilizzano la stroboscopia Analizzatori che utilizzano la stroboscopia applicata alla fotografia o MEP-Metod applicata alla fotografia o MEP-Metod (multi exposure photography)(multi exposure photography)

MotilitàMotilità

differenza tra motilità e vitalitàdifferenza tra motilità e vitalità v.n. > 50% di elementi mobili a 2 hv.n. > 50% di elementi mobili a 2 h Valori < 40% : ipocinesia (lieve, media Valori < 40% : ipocinesia (lieve, media

severa)severa) v.n. alla 24h > 20-30%v.n. alla 24h > 20-30% motilità normale: progressiva e rettilineamotilità normale: progressiva e rettilinea Motilità discinetica o agitatoria in loco: se Motilità discinetica o agitatoria in loco: se

non progressiva rettilineanon progressiva rettilinea acinesia: assenza di movimentiacinesia: assenza di movimenti

motilità e mobilità motilità e mobilità

Valutazione oggettiva: Valutazione oggettiva: Metodiche fotografiche: scie degli spz.Metodiche fotografiche: scie degli spz. Videoregistrazione della cinetica spermatica con Videoregistrazione della cinetica spermatica con

sistema CASA: valutazione della % di motilità e sistema CASA: valutazione della % di motilità e velocità media computerizzatavelocità media computerizzata

Metodiche spettrofotometricheMetodiche spettrofotometriche Laser light scatteringLaser light scattering

motilità e mobilitàmotilità e mobilità

Valutazione soggettiva della % di motilità e del tipo Valutazione soggettiva della % di motilità e del tipo di movimento al m.o. a contrasto di fase:di movimento al m.o. a contrasto di fase: Su vetrino oppure in camera di MaklerSu vetrino oppure in camera di Makler Valori normali: motilità rettilinea progressiva (> 25u/sec) Valori normali: motilità rettilinea progressiva (> 25u/sec)

presente in ≥40% degli spz presente in ≥40% degli spz Osservare 5 – 10 hpfOsservare 5 – 10 hpf

Definizione dei tipi di motilità:Definizione dei tipi di motilità: Tipo a : spz. rapidi progressivi retilineiTipo a : spz. rapidi progressivi retilinei Tipo b : spz. lenti progressivi rettilineiTipo b : spz. lenti progressivi rettilinei Tipo c : spz. con movimento in situTipo c : spz. con movimento in situ Tipo d: spz. immobiliTipo d: spz. immobili

dizionario seminologicodizionario seminologico PolizoospermiaPolizoospermia

Numero di spermatozoi >350 milioni/mlNumero di spermatozoi >350 milioni/ml OligozoospermiaOligozoospermia

Numero di spz totale <20 milioni/ml Numero di spz totale <20 milioni/ml IpospermiaIpospermia

volume < 1.5 ml volume < 1.5 ml IperspermiaIperspermia

volume >5.5 ml volume >5.5 ml AspermiaAspermia

Assenza di liquido seminale Assenza di liquido seminale PiospermiaPiospermia

Leucociti >2 milioni/ml Leucociti >2 milioni/ml EmatospermiaEmatospermia

Prenza di globuli rossi nel seme Prenza di globuli rossi nel seme AstenozoospermiaAstenozoospermia

Motilità degli spz. < 40% Motilità degli spz. < 40% TeratozoospermiaTeratozoospermia

> 40% del seme presenta forme anomali > 40% del seme presenta forme anomali NecrozoospermiaNecrozoospermia

Elevata percentuale di spz. mortiElevata percentuale di spz. morti OligoastenozoospermiaOligoastenozoospermia

spz. mobili <8 million/ml spz. mobili <8 million/ml

Definizione di normale Definizione di normale “motilità“ “motilità“

La motilità spermatica è molto variabile in La motilità spermatica è molto variabile in ragione del tempo trascorso dalla raccolta, ragione del tempo trascorso dalla raccolta, della temperatura e delle manipolazioni della temperatura e delle manipolazioni tecniche.tecniche.

Gli spz. non sopravvivono bene per molto Gli spz. non sopravvivono bene per molto tempo nel liquido seminale tempo nel liquido seminale

In natura gli spz. lasciano rapidamente il In natura gli spz. lasciano rapidamente il liquido seminale per entrare nel muco liquido seminale per entrare nel muco cervicale.cervicale.

astenozoospermiaastenozoospermia

Etiologia: anomala spermatogenesi Problemi di maturazione epididimale Patologie del trasporto varicocele.

Necrozoospermia work-up

Occorre innanzitutto sottoporre Occorre innanzitutto sottoporre questi spz con motilità assente a test questi spz con motilità assente a test dinamici per valutarne la vitalitàdinamici per valutarne la vitalità

In caso positivo, gli spz, immobili ma In caso positivo, gli spz, immobili ma vitali, possono essere utilizzati per vitali, possono essere utilizzati per ICSI con buone percentuali di ICSI con buone percentuali di successo.successo.

morfologiamorfologia

Spermatozoo normale Spermatozoo normale (WHO 3° edizione) (WHO 3° edizione) : :

testa ovale testa ovale (3-5 um x 2-3um)(3-5 um x 2-3um)

area acrosomiale area acrosomiale (= 30% della (= 30% della testa)testa)

pezzo intermedio pezzo intermedio (7-8 um x 1 um)(7-8 um x 1 um)

coda coda (4 – 5 um)(4 – 5 um)

caratteristica individuale, non cambia nel tempocaratteristica individuale, non cambia nel tempo

acrosomaacrosoma

Alterazioni morfologicheAlterazioni morfologiche

metodi di osservazione : metodi di osservazione : • striscio e colorazione sec. May Grumwald-striscio e colorazione sec. May Grumwald-Giemsa, WrightGiemsa, Wright

• ematossilina eosina se spz > 10 milioniematossilina eosina se spz > 10 milioni

• striscio da centrifugato se spz < 10 milioni striscio da centrifugato se spz < 10 milioni

Anomalie della testaAnomalie della testa A) spz a testa larga ed ovale (A) spz a testa larga ed ovale (macrocefalomacrocefalo) con tratto ) con tratto

intermedio e coda normaliintermedio e coda normali B) spz a testa piccola (B) spz a testa piccola (microcefalimicrocefali)) C) spz a testa allungata (C) spz a testa allungata (taperingtapering) ) C) senza acrosoma (C) senza acrosoma (globozoospermaglobozoosperma)) E) spz. E) spz. con testa piriforme con testa piriforme che termina nel tratto che termina nel tratto

intermedio intermedio F) spz. F) spz. con doppia testa con doppia testa o più teste ma con una sola coda e o più teste ma con una sola coda e

tratto intermedio normaletratto intermedio normale Forme amorfe: Forme amorfe: teste iperpigmentate senza acrosoma teste iperpigmentate senza acrosoma con con

tratto intermedio e coda normalitratto intermedio e coda normali

Classificazione sec. Kruger:Classificazione sec. Kruger:a) debolmente amorfe, con diametro inferiore alla norma ma con a) debolmente amorfe, con diametro inferiore alla norma ma con acrosoma normaleacrosoma normaleb) marcatamente amorfe: se manca l’acrosoma o se questo è <30% o b) marcatamente amorfe: se manca l’acrosoma o se questo è <30% o >70% della testa>70% della testa

globozoospermiaglobozoospermia

anomalie del pezzo intermedioanomalie del pezzo intermedio

presenza di un’appendice presenza di un’appendice citoplasmatica che normalmente si citoplasmatica che normalmente si osserva ma che è >50% della osserva ma che è >50% della grandezza della testa. Può essere grandezza della testa. Può essere unita alla testa al pezzo intermedio o unita alla testa al pezzo intermedio o alla coda.alla coda.

Anomalie della codaAnomalie della coda

a)a) coda duplice coda duplice

b)b) coda angolata coda angolata

c)c) coda corta coda corta

d)d) coda arrotolata coda arrotolata

e)e) coda assente coda assente

altri elementi figurati dell’eiaculatoaltri elementi figurati dell’eiaculato

spermatogoni: (tipo A o indifferenziati e/o tipo B o spermatogoni: (tipo A o indifferenziati e/o tipo B o differenziati) Presentano un caratteristico alone differenziati) Presentano un caratteristico alone perinucleare. perinucleare. ØØ nucleare 6-7 u nucleare 6-7 u

spermatociti primari (spermatociti primari (ØØ nucleo 8-9u) nucleo 8-9u) cellule rotonde , cellule rotonde , ØØ 17-19u, nucleo abbastanza 17-19u, nucleo abbastanza

grosso: 8-18u frequentemente rotondo con grosso: 8-18u frequentemente rotondo con cromatina a forma di gomitolo, che occupa cromatina a forma di gomitolo, che occupa talvolta l’intera cellulatalvolta l’intera cellula

spermatociti secondari ( spermatociti secondari ( Ø Ø nucleare 6-7 u) hanno nucleare 6-7 u) hanno aspetto simile alle cellule rotonde, con nucleo aspetto simile alle cellule rotonde, con nucleo rotondo la cui grandezza varia tra i 6 -8urotondo la cui grandezza varia tra i 6 -8u

spermatidi rotondi: spermatidi rotondi: ØØ 9,5 – 12 u, citoplasma 9,5 – 12 u, citoplasma omogeneo eosinofilo, nucleo omogeneo, omogeneo eosinofilo, nucleo omogeneo, ØØ l.6-7u l.6-7u

spermatidispermatidi

cellule rotondecellule rotonde

altri elementi figurati altri elementi figurati dell’eiaculatodell’eiaculato

cellule germinali in caso di azoospermia:cellule germinali in caso di azoospermia:

presenti: blocco maturativo parziale presenti: blocco maturativo parziale dell’epitelio germinativo testicolaredell’epitelio germinativo testicolare

assenti: ostruzione bilaterale delle vie assenti: ostruzione bilaterale delle vie seminali seminali

cellule epiteliali metaplastiche:cellule epiteliali metaplastiche: presenti nelle flogosi croniche delle vie presenti nelle flogosi croniche delle vie

uro-genitaliuro-genitali

leucocitileucociti

> 1 milione/ml: flogosi moderata> 1 milione/ml: flogosi moderata > 2 milioni/ml: leucospermia> 2 milioni/ml: leucospermia

altri elementi figuratialtri elementi figurati

MacrofagiMacrofagi Cellule cilindriche ed altre cellule Cellule cilindriche ed altre cellule

epitelialiepiteliali EmazieEmazie BatteriBatteri Cristalli di sperminaCristalli di spermina Corpuscoli prostaticiCorpuscoli prostatici

Studio immunologicoStudio immunologico

Anticorpi antisperma (ASA)Anticorpi antisperma (ASA)

Gli ASA si dividono in due classi: IgA and Ig G.Gli ASA si dividono in due classi: IgA and Ig G. Gli anticorpi Ig A sono fonte dei maggiori Gli anticorpi Ig A sono fonte dei maggiori

problemi per lo sperma rispetto alle IG G.problemi per lo sperma rispetto alle IG G.

Gli anticorpi della classe Ig M a causa della loro Gli anticorpi della classe Ig M a causa della loro relativamente maggiore grandezza molecolare relativamente maggiore grandezza molecolare sono raramente presenti nel seme. sono raramente presenti nel seme.

biochimica

Fruttosio (vescicole seminali) \ (v.n. 200-600 mg/dl)Fosfatasi acida (prostata) \ (v.n. 78-600 UI/lt)Acido citrico (prostata) \ (v.n. 200-900 mg/dl)Carnitina (epididimo) \ (0.2-0.4 µmol/ml)Zinco (diminuisce nelle epididimiti) \ (2-40 mg/dl)