Presentazione standard di PowerPoint · Nikon A1R inverted confocal microscope for fast live...

DIVISIONE SERVIZI PER LA RICERCA -

UFFICIO AUDIT

NOLIMITSi


UFFICIO AUDIT

NOvel LIve bioImaging MIlano c tTà Studi


UFFICIO AUDIT

NOvel LIve bioImaging MIlano citTà Studi

Subscribers departments @ NOLIMITS:

1. Dip. di Bioscienze (DBS) (capofila). Alex Costa

2. Dip. di Scienze Farmacologiche e Biomolecolari (DiSFeB). Fabrizio Gardoni

3. Dip. di Scienze Biomediche per la Salute (SCIBIS). Elena Donetti

4. Dip. di Scienze Agrarie e Ambientali (DISAA). Piero Attilio Bianco

5. Dip. di Biotecnologie Mediche e Medicina Traslazionale (BIOMETRA). Roberto Cerbino

6. Dip. di Scienze per gli Alimenti, la Nutrizione e l'Ambiente (DeFENS). Luisa Pellegrino

7. Dip. di Scienze della Salute (DISS). Daniele Bottai

8. Dip. di Chimica. Luca Chiarello

9. Dip. di Oncologia (DIPO). Niccolo’ Bolli

10. Dip. Dipartimento di Scienze e Politiche Ambientali (ESP): Michela Sugni

11. Dip. di Fisica: Cristina Lenardi

Facility manager and technicians @ NOLIMITS:

1. Nadia Santo; D2-Area Tecnica, Tecnico-Scientifica ed Elaborazione Dati. Facility manager

2. Miriam Ascagni; D1-Area Tecnica, Tecnico-Scientifica ed Elaborazione Dati.

3. Laura Madaschi; D3-Area Tecnica, Tecnico-Scientifica ed Elaborazione Dati

4. Norma Lattuada; C4- Area Tecnica, Tecnico-Scientifica ed Elaborazione Dati


UFFICIO AUDIT

Single photon confocal microscopes

Inverted Nikon A1R+ with FLIM, FRET-FLIM and FCS

Inverted Nikon A1R with SIM (Super Resolution,115 nm X,Y;

270 nm Z)

Inverted Zeiss 510

Multi photon confocal microscope

Upright Nikon A1 with MP Dual Red pulsed laser

Digital slide scanner

Scanning Electron Microscope (SEM)

Transmission Electron Microscope (TEM)

Magnetic Resonance Imaging (MRI).

Workstation and software for imaging analysis

Equipment


UFFICIO AUDIT

Locations

Other locations:

Anin, Via G. Celoria 26

Locali Ex-Cima, Via G. Celoria 26

BIOMETRA, Via Vanvitelli, 32

DISAA, DeFENS, Via G. Celoria 2

DiSFeB, Via Balzaretti, 9

Main location:

Ex aula G08, Via C. Golgi 19


UFFICIO AUDIT

Which tools can we use for single cell analyses?

Confocal Microscopes @ the

UNITECH NOLIMITS (bio-imaging facility)i

Nikon A1R Nikon A1 3D-SIM

Miriam

Ascagni

Confocal microscope high end for fast live imaging (cell cultures, animals, microorganisms, plants and food...)


➢ Lasers: 405 nm, 445 nm, 488 nm, 561 nm,

633 nm

➢ Control of temperature and CO2

➢ Hybrid Scanner for ultrahigh speed imaging

and simultaneous photo-activation

➢ 3 PMTs, 2 GaAsP

➢ Perfect Focus

➢ Deconvolution software

Nikon A1R


➢ Lasers: 405 nm, 445 nm, 488 nm, 561

nm, 633 nm




➢ 3 PMTs, 2 GaAsP

➢ Perfect Focus


Miriam

Ascagni


Nikon A1R

Sensor for in vivo Calcium detection: Cameleon (YC3.6)

Features:

• Ratiometric (FRET based): correct for unequal dye loading,

illumination intensity, optical path

length, less sensitive to bleaching etc.

• Genetically encoded

• Strong signal to noise ratio

• High Ca2+ specificity

• Low pH sensitivity

• Targetable to different cellular

compartments

Ratio=cpVenusEm530/CFPEm480

Nagai et al., 2004

HIGH

[Ca2+]

CFP

cpVenus

440 nmCaM

M13

480 nm

LOW

[Ca2+]

Abs Em Abs Em

400 500 600

Wavelength (nm)

Ab

san

d E

mS

pe

ctr

a

FRET

530 nm440 nm

CFP cpVenus

CaM

M13

Ca2+Ca2+

Ca2+Ca2+

Nikon A1R inverted confocal microscope

for fast live imaging of single cells

Single cell FRET analysis: in vivo caclium imaging at plant vacuolar membrane

➢ Lasers: 405 nm, 445 nm, 488 nm, 561 nm, 633 nm


➢ Hybrid Scanner for ultrahigh speed imaging and

simultaneous photo-activation

➢ 3 PMTs, 2 high sensitive GaAsP

➢ Perfect Focus


CFP cpVenus FRET

…ongoing generation of a tonoplast localized YC3.6 Cameleon…

Doccula and Costa, unpublished

Arabidopsis stable plants transformed with nTP-YC3.6

ECFP cpVenusYC3.6

Kd=250 nMN-tag-fusion

-0,2

-0,1

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0 100 200 300 400 500 600

ROI 1ROI 2ROI 3ROI 4ROI 5

Time (sec)

DR

/R0

ATP

Doccula and Costa, unpublished

Ratio cpVenus/CFP

[Ca2+]

ε-subunit of Bacillus subtilis ATP synthase

ATeam1.03-nD/nA

The effect of CCCP on the ATeam response in different

Arabidopsis seedling tissues

FLIM and FRET-FLIM for

in vivo protein-protein interaction analysis


➢ Lasers: 405 nm, 445 nm, 488 nm, 561 nm,

633 nm




➢ 3 PMTs, 2 GaAsP

➢ Perfect Focus➢ Pulsed lasers: 440 nm, 485 nm

➢ Hybird Sensors for photon counting

Miriam

Ascagni


Nikon A1R

9 months seasoned cheese

10 µm

Fat

Proteins


➢ Lasers: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 633 nm

➢ Spectral GaAsP detector for l scan

➢ 3 PMTs, 2 GaAsP


➢ Piezo stage

➢ Perfect Focus


Miriam Ascagni


Nikon A1


Nikon A1

Deconvolution for high

resolution live cell

imaging

Confocal microscope high end for fast live imaging (cellcultures, animals, microorganisms, plants and food...)

Nikon A1

Deconvolution for high

resolution live cell

imaging

Courtesy of Dr. M. Paroni

Bacteria Zebrafish ear

Courtesy of Prof. A. Binelli

Microplastics in zebrafish

Courtesy of Prof. L. Del Giacco

Samples from users working at the Department of Biosciences


➢ Lasers: 405 nm, 488 nm, 561 nm,

633 nm

➢ Spectral GaAsP detector for l scan

➢ 3 PMTs, 2 GaAsP


➢ Piezo stage

➢ Perfect Focus


3D-SIM in vivo Super

Resolution imaging

(115 nm x,y; 270 nm Z)

Laser per SR: 488 nm, 561 nm, 633 nm

Miriam Ascagni


Nikon A1 with 3D SIM

Nikon A1 inverted confocal microscope

with 3D-SIM for in vivo Super resolution

Courtesy of Prof. G. Cappelletti

Arabidopsis stomata expressing PM-localised GFP

Which tool can we use for single cell analyses in entire

organisms?

Nikon A1 MP

Multiphoton microscope @ the


Red light penetrates tissue more deeply than light of shorter wavelengths

Upright Multiphoton Confocalfor imaging in vivo on animal, plants and ticktissues, organoids, brain slices…

Multiphoron

Confocal Stops

Here

Nikon MP A1R

Stabulario, Via G. Celoria 26

➢ Multiphoton Laser 820-1300 nm + 1040 nm



➢ Four GaAsP detectors


➢ CFI75 Apochromat 25XC W 1300 (N.A. 1.10)

Laura Madaschi

Upright Multiphoton Confocalfor imaging in vivo on animal, plants and ticktissues, organoids, brain slices…

Nikon MP A1R

Fish from Prof. L. Del Giacco

Nikon MP A1RZebrafish tail vasculature

Arabidopsis thaliana ovules

Nikon MP A1R

Which tool can we use for single cell analyses for histopathology

analyses?

Digital Slide Scanner @ the


Hamamatsu NanoZoomer S60 Digital slide scanner

Digital slide scanner

➢ Automatic slides acquisitions (auto focus, z-stack

for thick samples…)

➢ Bright field and fluorescence (DAPI/FITC/TRIC)

➢ Remote data acquisition

➢ 20 x and 40 x magnification

Laura Madaschi


Courtesy of Prof. L. Del GiaccoCourtesy of Prof. M. Muzi Falconi

Courtesy of Prof. K. Petroni Courtesy of Dr. A. Amadeo

Cryo-Ultramicrotomes for electron microscopy specimens preparation

Norma Lattuada

Cryo CR-X system


Nadia Santo

SEM and TEM

electron microscopySEM-EDS TEM-EELS

Norma Lattuada

Zeolin accumulationTMV 30000

Locali Ex-Cima, G. Celoria 26; DISAA, DeFENS, G. Celoria 2; BIOMETRA, Vanvitelli 32

Nadia Santo

HeLa cell

Alle macchine possono accedere indipendente: borsisti, dottorandi, assegnisti,

ricecatori etc..

L’uso indipendente delle macchine è possibile previo corso teorico/pratico.

Un sistema di gestione delle prenotazioni permette di controllare la disponibilità delle

macchine oppure richiedere prestazioni fornite dai tecnici. L’accesso sarà consentito a

utenti UNIMI utilizzando credenziali di Ateneo.

Si possono organizzare corsi per dottorati o altri workshop…

….some info….

Per motivi di prevenzione, sicurezza e tutela della salute delle persone, nonché per preservare i beni

dell’Ateneo, devono essere osservate le seguenti disposizioni:

1) la frequenza al di fuori dell'orario ufficiale è riservata al personale docente e tecnico amministrativo;

2) nei laboratori o comunque nei locali ove sussistono rischi di varia natura non è consentito operare in

solitudine;

3) studenti, dottorandi, specializzandi, tirocinanti, borsisti, volontari frequentatori, così come individuati

dal "Regolamento per l’accesso dei laureati frequentatori alle strutture dell’Università", possono

accedere al di fuori dell'orario ufficiale solo previa autorizzazione del personale tecnico e se è

assicurata la concomitante presenza di personale universitario che professionalmente sia in grado di

svolgere una funzione attiva di sorveglianza e controllo sulle attività svolte e sul corretto impiego delle

apparecchiature;

4) il possesso delle chiavi della struttura deve essere autorizzato dal Coordinatore del CS o dal

Responsabile Tecnico che a tal fine predispone un apposito elenco delle persone consegnatarie. In

alcun modo le chiavi possono essere consegnate a personale non strutturato;

5) gli utenti autorizzati che accedono a NOLIMITS sono tenuti a verificare lo stato in cui lasciano il

laboratorio e a provvedere al ripristino delle condizioni in cui i locali e gli strumenti sono stati

consegnati.

Al fine di garantire la sicurezza e la tutela della salute di tutti i soggetti che debbano accedere alle

strutture universitarie al di fuori dell'orario ufficiale di apertura dell'Ateneo, si riportano di seguito l'orario

ufficiale di apertura dell'Ateneo:

dalle ore 7,30 alle ore 20,00 (dal lunedì al venerdì);dalle ore 8,00 alle ore 12,00 (il sabato).

Tariffario

CODICE

PRESTAZIONE

DESCRIZIONE

PRESTAZIONE

DESCRIZIONE

AGGIUNTIVAUNITA' TARIFFA IMPORTO (Euro) IMPOSTE

TIPOLOGIA PIANO

DI UTILIZZO

1

Utilizzo

Microscopio

Confocale FRET-

FLIM senza

assistenza di

personale tecnico

Per gli utenti

delle strutture:

abbonate

1 ora 17.00 ESENTE

2

Per gli utenti

delle strutture:

dell'Università

degli Studi di

Milano

1 ora 25.00 ESENTE

3

Per le altre

strutture

universitarie,

enti e

istituzioni di

ricerca

pubblica

1 ora 37.50 22% IVA 25%

4

Per enti e

strutture:

private o

assimilabili

1 ora - 22% IVA 25%

Contacts:

[email protected]

Scientific Coordinator

Alex Costa [email protected]

Facility Manager

Nadia Santo [email protected]

Confocal Microscopes

Miriam Ascagni [email protected]

Multiphoton and Slide Scanner

Laura Madaschi [email protected]

Electron Microscopes

Norma Lattuada [email protected]

Administration

Andrea Iula [email protected]

More info about tariff and rules @

http://www.unimi.it/ricerca/finanziamenti_ateneo/90200.htm

Presentazione standard di PowerPoint · Nikon A1R inverted confocal microscope for fast live...

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