I RETICOLOCITI

M. BUTTARELLO ULSS 19 ADRIA (RO)

RETICOLOCITI: DEFINIZIONE (CLSI H44-A2)

- CELLULE ERITROIDI DI TRANSIZIONE FRA IL PRECURSORE

NUCLEATO E L’ERITROCITA MATURO

- DEFINIZIONE MICROSCOPICA: CELLULE CHE CONTENGONO

ALMENO 2 GRANULI COLORABILI CON NMB, VISIBILI SENZA

AGGIUSTAMENTO DEL FUOCO E LONTANI DAL MARGINE

CELLULARE

RETICOLOCITI: COLORAZIONE NMB

MATURAZIONE E

CARATTERISTICHE

MORFOLOGICO-STRUTTURALI

L’ILOT ERYTHROBLASTIQUE (M. Bessis 1958)

(unitè functionelle de la moelle osseuse)

ISOLOTTO ERITROBLASTICO: IMMAGINE

TRIDIMENSIONALE

MATURAZIONE DEI PRECURSORI

ERITROIDI

VARIAZIONI STRUTTURALI DURANTE LA

MATURAZIONE RETICOLOCITARIA

Chasis et al,

Blood 1989

“NASCITA” DELL’ERITROCITA

Lee et al. 2014 Griffiths et al. Blood 2012

ENDOCITOSI ED ESOCITOSI SUI

RETICOLOCITI IN MATURAZIONE

Griffiths et al. Blood 2012

FORMAZIONE DI UN VACUOLO INTRARETICOLOCITARIO

Koury et al, Blood 2005

DIMOSTRAZIONE IN VITRO DELLA RIELABORAZIONE

STRUTTURALE DELLA MEMBRANA CITOPLASMATICA

RETICOLOCITARIA

Chasis et al,

Blood 1989

RETICOLOCITI ED RNA

RNA RETICOLOCITARIO E STABILITÀ

DI MEMBRANA

Lee et al. 2014

VARIAZIONI STRUTTURALI NEL PASSAGGIO DA

RETICOLOCITA AD ERITROCITA MATURO

(soggetti normali)

- RIDUZIONE DEL VOLUME (~ 19%)

- PERDITA DEL CONTENUTO EMOGLOBINICO (~ 3%)

- AUMENTO DELLA CONCENTRAZIONE

EMOGLOBINICA (~ 14%)

RETICOLOCITI: CONTEGGIO

Finch, Blood 1982

RETICOLOCITI: TEMPO DI MATURAZIONE

EMATOCRITO

45

35

25

15

NORMOBLASTI E

RETICOLOCITI

RETICOLOCITI

CIRCOLANTI

1.5

2.5

3.0

3.5

CORRELAZIONE FRA EMATOCRITO E TEMPI

DI MATURAZIONE MIDOLLARI ED EMATICI

MISURA DEL TURNOVER ERITROCITARIO PER

MEZZO DEL CONTEGGIO RETICOLOCITARIO

- UTILIZZARE IL CONTEGGIO ASSOLUTO (x 10 9 /L)

- CORREGGERE PER IL TEMPO DI MATURAZIONE

(RETICOLOCITI DA SHIFT)

- IN ALTERNATIVA AL PRECEDENTE UTILIZZARE L’IRF

TEMPO DI MATURAZIONE DEI RETICOLOCITI IN VARIE

CONDIZIONI PATOLOGICHE

From Baldini and Pannaciulli 1960

Conteggio reticolocitario con

Sysmex XE 2100/5000

ABX VEGA / PENTRA: MODULO PER IL CONTEGGIO

RETICOLOCITARIO INSERITO NELL’ANALIZZATORE

Conteggio reticolocitario con Coulter

UniCel DxH 800

CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON CELL-DYN SAPPHIRE

Conteggio reticolocitario con

Sysmex XN

CONTEGGIO RETICOLOCITARIO CON MINDRAY BC6800

HEALTHY HEMOLITIC ANEMIA/MDS

IRON

DEFICIENCY

Advia 120: mappa RBC/RET

Advia 120: mappa RBC/RET dopo

terapia

0 70 140

LHASS

0 70 140

ADASS

0 70 140

CDASS

Advia

33 -104

CD 4000

28 -119

LH 750

18 - 114

0 70 140

PENASS

0 70 140

XEASS

0 70 140

REFASS

Pentra

30 - 105

XE 2100

27 - 99

Riferimento

29 -129

RETICOLOCITI:

INTERVALLI DI RIFERIMENTO x109/L

PARAMETRI MATURATIVI

IRF: FRAZIONE IMMATURA DEI RETICOLOCITI

- CORRISPONDE AI RETICOLOCITI AD

ELEVATO CONTENUTO IN RNA

- VARIABILE DA 0.0 A 1.0

- ESPRIME L’ATTIVITA’ ERITROPOIETICA

MIDOLLARE “PRECOCE”

APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE

(Reticolociti: IRF)

1) Controllo precoce della ripresa eritropoietica dopo

trapianto di midollo o aplasia comunque indotta

2) Classificazione delle anemie ( ret, IRF: emolitiche o

da perdita; ret, IRF: ridotta attività midollare; ret,

IRF: infezione o MDS)

3) Controllo dell’efficacia della terapia (forme carenziali, EPO)

4) Diagnosi di anemia aplastica

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1 IR

F

0 50 100 150 200 250 300

Reticolociti (x109/L)

IRF: INTERVALLI DI RIFERIMENTO

0.00 0.12 0.24 0.36

PENIRF2

0.00 0.06 0.12 0.18

XEIRF2

0.00 0.12 0.24 0.36

IRFAD2

0.0 0.3 0.6 0.9

CDIRF

0.0 0.3 0.6 0.9

LHIRFAdvia

0.06 – 0.20

CD 4000

0.20 – 0.40

LH 750

0.22 – 0.40

XE 2100

0.02 – 0.11

Pentra

0.09 – 0.17

Simel- emat

Bulian, Doretto 2004

INDICI RETICOLOCITARI

INDICI RETICOLOCITARI

-ABBOTT SAPPHIRE MCVr, MCHr

-ABX HORIBA PENTRA 120 Retic MCVr

- SIEMENS ADVIA 2120 MCVr, CHr

- BECKMAN COULTER LH 750 MSRV

- SYSMEX XE 5000 RET-He

MCVr: volume reticolocitario medio; CHr: contenuto emoglobinico

reticolocitario medio; MRSV: volume cellulare medio dei reticolociti

sfericizzati; RET-He: equivalente emoglobinico espresso in pg

APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE

(reticolociti: CHr/Ret He)

1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente

2) Diagnosi di deficit funzionale di ferro (dializzati o altre

condizioni di trattamento con EPO)

3) Controllo della risposta alla somministrazione di ferro

(ev o os)

1) Diagnosi di eritropoiesi ferrocarente

2) Verifica precoce della risposta alla somministrazione di

ferro

3) Controllo precoce della risposta alla somministrazione di

acido folico e cianocobalamina

4) Controllo dell’abuso di eritropoietina nello sport (Ht-ret)

APPLICAZIONI CLINICHE CONSOLIDATE

(reticolociti: MCVr)

CHret/Ret He/MCHr: INTERVALLI DI

RIFERIMENTO NELLA POPOLAZIONE

ADULTA

Parametro mediana 2.5° 97.5°

CHret (pg) 32.2 30.1 34.6

Ret He (pg) 32.9 30.7 35.3

MCHr (pg) 29.9 28.5 34.5

Buttarello 2009/Hoffmann 2012

Parametro mediana 2.5° 97.5°

MCVr (fL) 102 91 111

Pentra

MCVr (fL) 106 100 114

ADVIA 120

MSRV (fL) 108 98 120

LH 750

SAPPHIRE (fL) - 92 116

MCVr: INTERVALLI DI

RIFERIMENTO NELLA

POPOLAZIONE ADULTA

VALUTAZIONE DELLA RISPOSTA

TERAPEUTICA CON I MODERNI INDICI

RETICOLOCITARI

0

1

2

3

4

5

RE

TIC

OL

OC

ITI

(%)

90

100

110

120

130

140

150

MC

Vr

(fL

)

-5 0 5 10 15

GIORNI

RET %

MCVr

20

25

30

35

40

CH

r (p

g)

CHr

INIZIO TERAPIA

CON B12

INIZIO TERAPIA

CON FERRO

50

100

150

200

250

RE

TIC

OL

OC

ITI

(x 1

09/L

)

80

90

100

110

120

130 M

CV

r (f

l)

0 5 10 15

GIORNI

RET

MCVr

20

25

30

35

CH

r (p

g)

CHr

INIZIO TERAPIA

CON FERRO M.Buttarello

50

100

150

200

250

300

RE

TIC

OL

OC

ITI

(x 1

0

9 /L

)

70

80

90

100

110

120

130

MC

Vr

(fl)

0 5 10 15

GIORNI

RET

MCVr

20

25

30

35

CH

r (p

g)

CHr

INIZIO TERAPIA

CON FERRO M.Buttarello