Guida Rapida VINEO
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VINEO ™ Kit per l’estrazione del DNA 354-8100 Guida Rapida Per le istruzioni complete e dettagliate, leggere il relativo manuale. • Diluire W1 100X (cf. Allegati 1 e 2 delle istruzioni) • Accendere la centrifuga e impostarla a 4°C • Accendere il blocco riscaldante e impostarlo a 95°C • Omogeneizzare la R1 • Preparare il numero richiesto di colonne di purificazione (= numero di campioni + controllo) Preparazione dell’attrezzatura • Provetta + campione di 1,8 ml Protocollo per “Analisi su vino carico durante il processo di vinificazione” • Provetta + campione di 45 ml Protocollo per “Analisi su vino pronto per l’imbottigliamento” Concentrazione/Lavaggio delle cellule W1 100X W1 1X H2O 1,8 ml 45 ml • Aggiungere 1,8 ml di W1 diluito a 1X • Aggiungere 45 ml di W1 diluito a 1X 1,8 ml W1 1X 45 ml W1 1X • Aggiungere 1 ml di W1 diluito a 1X 1 ml W1 1X 6 000 g 4°C 20 sec * * • Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C • Eliminare il surnatante • Agitare con il vortex per 20 sec poi agitare capovolgendo la provetta • Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C • Eliminare il surnatante • Agitare con il vortex per 20 sec • Trasferire in una provetta da 2 ml con tappo a vite • Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C • Eliminare il surnatante 5 min 95°C 4°C Ripetere due volte da * Ripetere una volta da * 6 000 g 4°C 5 min 20 sec 6 000 g 4°C 5 min
Transcript of Guida Rapida VINEO
VINEO™ Kit per l’estrazione del DNA354-8100
Guida Rapida
Per le istruzioni complete e dettagliate, leggere il relativo manuale.
• Diluire W1 100X (cf. Allegati 1 e 2 delle istruzioni)
• Accendere la centrifuga e impostarla a 4°C
• Accendere il blocco riscaldante e impostarlo a 95°C
• Omogeneizzare la R1
• Preparare il numero richiesto di colonne di purificazione(= numero di campioni + controllo)
Preparazione dell’attrezzatura
• Provetta + campione di 1,8 ml
Protocollo per “Analisi su vinocarico durante il processo
di vinificazione”
• Provetta + campione di 45 ml
Protocollo per “Analisi su vinopronto per l’imbottigliamento”
Concentrazione/Lavaggio dellecellule
W1100X
W11X
H2O
1,8 ml 45 ml
• Aggiungere 1,8 ml di W1 diluito a 1X • Aggiungere 45 ml di W1 diluito a 1X
1,8 mlW11X
45 mlW11X
• Aggiungere 1 ml di W1 diluito a 1X
1 mlW11X
6 000 g
4°C
20 sec
* *
• Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C
• Eliminare il surnatante
• Agitare con il vortex per 20 sec poi agitarecapovolgendo la provetta
• Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C
• Eliminare il surnatante
• Agitare con il vortex per 20 sec
• Trasferire in una provetta da 2 ml contappo a vite
• Centrifugare per 5 min, a 6 000 g, a 4°C
• Eliminare il surnatante
5 min
95°C4°C
Ripetere due volte da * Ripetere una volta da *
6 000 g
4°C
5 min
20 sec
6 000 g
4°C
5 min
100 μlR2
Nuova provetta di raccolta
Lisi delle cellule
Per le istruzioni complete e dettagliate, leggere il relativo manuale.
A partire da questa fase, lavorare con guanti non talcati• Aggiungere 800 μl di R1
• Agitare con il vortex per 20 sec
• Incubare in un blocco riscaldante per 15 min a 95°C
• Far raffreddare per 5 min
• Aggiungere 500 μl di surnatante della reazione di lisi alla colonna dipurificazioneNon rimuovere la resina
• Centrifugare per 10 min, a 6 000 g, a 20°C
• Svuotare la provetta di recupero del suo contenuto
• Aggiungere 100 μl di R2 nella colonna di purificazione
• Coprire la parte superiore della colonna con una nuova provetta direcupero
• Capovolgere il tutto (colonna di purificazione e provetta di recupero)
• Centrifugare per 3 min, a 1 000 g, a 20°C
I campioni di DNA purificati possono essere congelati a -20°C,conservati per 24 ore a 4°C o analizzati direttamente mediante ilmetodo di PCR
500 μl surnatante
• Aggiungere 100 μl di W2 freddo
• Agitare con il vortex per 5 sec
• Refrigerare per 15 min a 4°C
• Centrifugare per 15 min, a 12 000 g, a 4°C
100 μlW2
4°C
15 min
20°C
10 min
4°C
15 min
95°C
15 min800 μlR1
12 000 g
6 000 g
• Aggiungere 250 μl di surnatante della reazione di lisi alla colonna dipurificazione
• Centrifugare per 10 min, a 6 000 g, a 20°C
• Gettare la provetta di recupero
250 μl surnatante
20°C
10 min
6 000 g
20°C
3 min
Purificazione del DNA
1 000 g
20 sec
Web site www.bio-rad.com USA 800 4BIORAD Australia 61 02 9914 2800 Austria 43 (0) 1 877 89 01 Belgium 09 385 55 11 Brazil 55 21 3237 9400Canada 1 800 268 0213 China 86 21 6305 2255 Czech Republic 420 241 430 532 Denmark 44 52 10 00 Finland 09 804 22 00 France 33 1 47 95 62 59Germany 49 (0) 89 318 84 0 Greece 30 210 777 4396 Hong Kong 852 2789 3300 Hungary 36 1 455 8800 India 1-800-180-1224Israel 03 951 4127 Italy 39 02 216 091 Japan 03 5811 6270 Korea 82 2 3473 4460 Latin America 305 894 5960 Mexico 52 555 488 7670The Netherlands 31 318 540 666 New Zealand 64 9 415 2280 Norway 23 38 41 30 Poland 48 22 331 99 99 Portugal 351 21 472 7700Romania 4021 210 1703 Russia 7 095 721 1404 Singapore 65 6415 3188 South Africa 27 11 442 8508 Spain 34 91 590 5200 Sweden 46 8 555 12700Switzerland 41 (0) 61 717 95 55 Taiwan 886 2 2578 7189 Thailand 662 651 8311 United Kingdom 44 20 8328 2000 Vietnam 848 823 6757
Bio-RadLaboratories, Inc.
Life ScienceGroup
© Bio-Rad PF125 Rev A 11/2010
Bio
-Rad
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.N.C
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