Fase stazionaria in HPLC

Lab. Chimica Analitica II _ HPLC


Cromatogramma di eluizione LSC


Reazioni di silanizzazione per la produzione di fasi legate

Possibili gruppi funzionali sulla superficie della silice


Effetto della lunghezza di catena sulle prestazioni di una colonna di silossano in fase inversa riempita con particelle di 5 m.

MeOH: H2O = 50%, 1ml/min


Forza del solvente (su silice) di alcune miscele di solventi.


Forza del solvente (0) come funzione della composizione. Il solvente A è eptano

Confronto dei cromato-grammi dell’acrilamide ottenuti con quattro fasi mobili, ognuna con polarità 0.53


Effetti della variazione della composizione sul fattore di capacità k’ (a,b) e sul fattore di selettività (c,d,e). Composti: 1) prednisone, 2) cortisone, 3) idrocortisone, 4) dexametasone, 5) corticosterone, 6) cortoexolone

Effetti della variazione della composizione della miscela eluente

Eluente:

MeOH : H2O (H3PO4 0.5 %)

1 ml/min


Effetti della variazione del pH su di una separazione in fase inversa

Colonna C18 5 m, 150 x 4.6 mm

Eluente: KH2PO4 20 mM: CH3CN = 95 : 5

1 ml/min, 40°C, UV 270 nm

1) Acido solfanilico

2) Solfamerazina

3) Solfisossazolo

4) Solfopiridina


a) Additivi per bibite analcoliche

Colonna 250 x 4.6mm, 1 ml/min, AcOH : H2O = 6 :

94

b) Insetticidi organofosforati

Colonna C8 250 x 4.5 mm, 5 m, 2 ml/min,

gradiente MeOH : H2O da 67 : 33 a 80 : 20

Tipiche applicazioni della cromatografia in fase legata


Cromatogramma di 30 amminoacidi derivatizzati con o-ftalaldeide.

Colonna RP-C18

, 5 m

Solvente A: MeOH : THF : H2O (Na

2HPO

4 0.05 M, pH 7.4) = 96 : 2 : 2

Solvente B: MeOH : H2O = 65 : 35


Cu(II)

Mix enantiomeri

Scambiatore di legame (D) – penicillamina, accettore di

elettroni per la separazione di:

• - aminoacidi e derivati

• - idrossiacidi, alcoli amminici


Proprietà degli eluenti, modificabili per ottenere l’eluizione a gradiente:• Forza ionica• pH• Capacità di formare ponti idrogeno• Forza della serie eluotropica• Costante dielettrica• Concentrazione dei reagenti

in competizione sui siti della fase stazionaria

Differenze di separazione in funzione del tipo di gradiente applicato: a) gradiente lineare, b) a

gradini


Variazioni nella separazione indotte dal

cambiamento della pendenza del

gradiente, ottenuta variando la forza

ionica del NaCl

Colonna: DEAE-Sephadex A-50

Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl

8 ml/cm2h


Variazioni nella separazione indotte dal

cambiamento del gradiente da lineare a

non lineare

Colonna: DEAE-Sephadex A-50

Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl

8 ml/cm2h

ura

cile

teofilli

na

caff

ein

a

Ac.

benzo

ico

trip

tofa

no

meti

lpara

ben

bu

tiro

fen

one

pro

pilp

ara

ben

eti

lPA

BA

pro

pio

fen

one

esa

nofe

non

e

epta

nofe

non

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ott

anofe

none


Effetto della temperatura in HPLC

Fase stazionaria in HPLC

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