DIAGNOSTICO DE LINFOGRANULOMA VENÉREO EN CÉLULAS Vero y A-549

Introducción: El linfogranuloma venéreo (LGV) ha emergido en los países occidentales como proctitis en hombres que tienen sexo con hombres (HSH). En el diagnóstico de proctitis debe incluirse el estudio del Virus del Herpes simplex (VHS), Neisseria gonorrhoeae (NG), lúes y Chlamydia trachomatis (CT). Recientemente se ha descrito el crecimiento de genotipos invasivos L de CT en cultivo celulares (CC) rutinarios para el diagnóstico de VHS, Vero y LLC-MK2, diferentes de las clásicamente utilizadas con técnicas de shell-vial (SV) en McCoy, Hela 229 y BGMK.

Material y métodos: Las muestras rectales fueron enviadas en Universal Transport Medium (Copan). El cultivo se llevó a cabo inoculando 200 uL de muestra al menos en uno de los siguientes tubos: MRC-5, Vero y A-549 y/o en un SV de Vero (Vircell). Los CC se visualizaron en microscopio invertido diariamente durante tres semanas. La imagen del efecto citopático de CT genotipo L consistió en la aparición inicial de focos de grandes cuerpos de inclusión circulares y elípticos ligeramente refringentes que progresivamente aumentaban en número y tamaño generalizándose a toda la monocapa lisándola en dos semanas. El diagnóstico por PCR de CT se realizó en la plataforma de BDMAX Becton Dickinson). La extracción de ADN se obtuvo con el kit ExkDNA1BDMAX y la PCR fue hecha con sondas y primers Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae Real Time PCR (Diagenode) que detectan una región específica del plásmido críptico. Para la caracterización de CT genotipo L se realizó la PCR RealCycler CHSL (Progenie) que detecta una secuencia específica del gen pmpH. Para la diferenciación de los genotipos L se realizó una PCR del gen ompA con secuenciación posterior del producto amplificado.

Resultados: Desde septiembre de 2012 hasta diciembre de 2015 se aislaron cepas de CT genotipo L en un total de 12 muestras, ocho frotis rectales, dos biopsias rectales y dos lesiones perianales pertenecientes a ocho HSH. Se observó ECP en 9/10 muestras inoculadas en TC de Vero con un tiempo medio de crecimiento de 9,5 días (6-14) y en 4/7 muestras en A-549 con un tiempo medio de crecimiento de 11,7 días (6-15). Se visualizaron cuerpos de inclusión en 9/10 en SV de células Vero inoculados. Todos los sobrenadantes de los cultivos positivos se confirmaron con la PCR específica de LGV. Se genotiparon muestras de 6/8 pacientes siendo cinco genotipo L2 y uno L2b

Conclusiones: Los genotipos L2 pueden crecer en CC de células Vero y de A-549 utilizadas en el diagnóstico de VHS lo cual amplía las posibilidades diagnósticas en aquellos pacientes en los que inicialmente no se consideró el diagnóstico de LGV. Adicionalmente el cultivo permite la obtención de cepas vivas en grandes volúmenes y con altísimas concentraciones de DNA, condiciones óptimas para la realización de estudios genéticos y de sensibilidad antibiótica.

*Busson L. Observation of a cytopathogenic effect on cell lines used for routine viral cultures led to the diagnosis of lymphogranuloma venereum. Sex Transm Infect 2013 Aug;89(5):395-7.

M. Imaz1, S. Hernáez 1, J.A. Álava1, L. Hernández1, V. Esteban, J. López de Munain2, M.M. Cámara2, M.J. Sada Calderón1, M. Macho1, J.L. Díaz de Tuesta1, M. Domínguez3, J.C. Galán3, J. Muñoz2, R. Cisterna1

1Servicio de Microbiología y Control de Infección; 2Servicio de Infecciosas. Hospital Universitario Basurto. 3Sevicio de Microbiología. Hospital Ramón y Cajal. Madrid

Shell-vial: cuerpos de inclusión (X40)

Células vero: cuerpos de inclusión (X10) Células vero: cuerpos de inclusión (X40)

Células vero: cuerpos de inclusión (x10)