LSP - marzo 2013 1 1 1 1

Determinazione simultanea di sostanze psicotrope

su XevoTQD tramite metodo rapido

dopo preparazione del campione con reattivo M3

2 2 2 2

SOSTANZE STUPEFACENTI e PSICOTROPE

INDICATORI BIOLOGICI DI ESPOSIZIONE PROFESSIONALE

ELEMENTI IN TRACCIA

FARMACI

Attività di ricerca e dosaggio Attività di ricerca e dosaggio

LSP - marzo 2013

3 3 3 3

COMMITTENTI LSP-TN

•U.O. di MEDICINA LEGALE

•FORZE dell’ORDINE

•NUCLEO MEDICO COMPETENTE e MEDICI del LAVORO

•NUCLEO OPERATIVO ANTIDROGA

•U.O. OSPEDALIERE (PS, reparti, laboratorio, anatomia patologica,…)

•SerT

•CARCERI

•PRIVATI

LSP - marzo 2013

4 4 4 4

FINALITA’ DELLE INDAGINI TOSSICOLOGICHE

SOSTANZE STUPEFACENTI

ESPOSIZIONE PROFESSIONALE

ELEMENTI IN TRACCIA

FARMACI

VERIFICA

MONITORAGGIO

CONTROLLO CLINICO

FORENSE

MEDICO-LEGALE

SOSTANZE STUPEFACENTI

ELEMENTI IN TRACCIA

FARMACI

ALTRE SOSTANZE

LSP - marzo 2013

5 5 5 5

INDAGINI TOSSICOLOGICHE

per ricerca SOSTANZE STUPEFACENTI

VALORE MEDICO-LEGALE o FORENSE

•accertamenti medico/legali

•accertamento di responsabilità in incidenti stradali

•valutazione di inidoneità alla guida

•valutazione di inidoneità lavorativa

•accertamenti in caso di intossicazione acuta

•accertamenti post mortem

•rilascio autorizzazione per il porto d’armi

•affidamento, custodia minori

•discriminazione tra utilizzo e cessione ad altri di droghe

VERIFICA - MONITORAGGIO – CONTROLLO CLINICO

•valutazione dell’uso di sostanze stupefacenti

•valutazione dello stato di dipendenza del soggetto, in termini di cessazione o riduzione di uso

di sostanze d’abuso

•monitoraggio nella sindrome da dipendenza

•verifica della storia d’uso e abuso di sostanze stupefacenti

•controllo della “compliance “ a trattamenti farmacologici

•follow up a lungo termine in pazienti dimessi da Servizi per le Tossicodipendenze

LSP - marzo 2013

6 6 6 6

MATRICI OGGETTO DI INDAGINE

URINA

SANGUE/SIERO

FORMAZIONI

CHERATINICHE

FLUIDO ORALE

CONTENUTO GASTRICO

BILE

ALTRI FLUIDI BIOLOGICI

SOSTANZE STUPEFACENTI

ETANOLO

FARMACI

ALTRE SOSTANZE TOSSICHE (pesticidi,…)

SOSTANZE STUPEFACENTI

SOSTANZE STUPEFACENTI

ETIL-GLUCURONIDE (METABOLITA dell’ Etanolo)

SOSTANZE STUPEFACENTI

ETANOLO – ETIL-GLUCURONIDE

METABOLITI DI FARMACI

MARCATORI di ESPOSIZIONE PROFESSIONALE

ELEMENTI in TRACCIA

SOSTANZE STUPEFACENTI

ETANOLO

FARMACI

ELEMENTI in TRACCIA

LSP - marzo 2013

7 7 7 7

Dopo assunzione ed in funzione delle caratteristiche

farmacocinetiche una droga e i suoi metaboliti possono

essere rilevati:

Sangue ore

Saliva ore

Urina giorni

Capelli mesi

TEMPO DI RILEVAMENTO DELLE DROGHE

NELLE VARIE MATRICI BIOLOGICHE

LSP - marzo 2013

8 8 8 8

SCELTA DEL CAMPIONE DA ANALIZZARE

IN FUNZIONE DELLA FINALITA’ DELL’ACCERTAMENTO

ATTUALITA’ D’USO SANGUE

SALIVA

ASSUNZIONE ABITUALE URINA

E/O CRONICA CAPELLO

ABUSO PREGRESSO CAPELLI

LSP - marzo 2013

9 9 9 9

CARATTERISTICHE URINA SANGUE CAPELLO

prelievo disagevole invasivo comodo/non invasivo

appartenenza al

soggetto

non sempre certa certa certa

adulterazione possibile impossibile difficile

contaminazione passiva difficile impossibile possibile

ripetibilità prelievo impossibile impossibile possibile

conservazione 4°C/-20°C 4°C/-20°C temp. ambiente

trasporto temp. controllata temp. controllata temp. ambiente

tecnica analitica * immunoch./cromatogr. immunoch./cromatogr. immunoch./cromatogr.

tempo di risposta +/+++ +/+++ +/+++

concentrazione in

matrice

elevata bassa bassa

tipo di misura incremento incremento cumulativo

finestra di rilevazione 2/3 giorni ore mesi/anni

CARATTERISTICHE

DELLE TRE MATRICI BIOLOGICHE IN ESAME

LSP - marzo 2013

10 10 10 10

CLASSE di

SOSTANZA/SOSTANZa

URINA

ng/mL

SANGUE

ng/mL

CAPELLO

ng/mg

OPPICEI

6-O-MAM 10 10 0.2

Morfina, Codeina 100 10 0.2

COCAINA

Cocaina, Benzoilecgonina 100 10 0.2 - 0.05

CANNABINOIDI

THC 2 0.05

11-OH-THC 2

THC-COOH 15 0.001

AMFETAMINE e analoghi

Amfetamine, Metamf. 200 20 0.2

MDMA, MDA, MDEA 200 20 0.2

METADONE 100 10 0.2

BUPRENORFINA 5 5 0.01

CONCENTRAZIONI SOGLIA (CUT-OFF)

PER LA POSITIVITA’ - ANALISI DI CONFERMA

LSP - marzo 2013

11 11 11 11

ATTUALE OFFERTA ANALITICA LSP-TN

SOSTANZA ANALISI DI CONFERMA

URINA CAPELLO SANGUE INTERO

Morfina, 6-MAM, Codeina X X X

Cocaina, Benzoilecgonina,

Cocaetilene

X X X

D9-THC X X

11-OH-THC X

CBN, CBD X

THC-COOH X X

Amfetamine, Metamf., X X X

MDMA, MDA, MDEA X X X

Benzodiazepine X

Metadone X X X

EDDP X X X

Buprenorfina X X X

LSP - marzo 2013

12

URINE

Ev.le Idrolisi SPE Iniezione

LC/MS QUANTITATIVA

Derivatizz.- Iniezione

GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA SANGUE

ALTRE

DROGHE

CANNAB. EXT

Liq-Liq

SPE

Evap.

a secch.

Evap.

a secchezza

Iniezione

LC/MS QUANTITATI

VA

Evap.

a secch.

Derivatizz.-

Iniezione GC/MS

QUANTITATIVA

DOTAZIONE STRUMENTALE Alliance Micromass-ZQ Waters

GC/MS-MS 4000 Varian

Derivatizz.-

Iniezione GC/MS

QUANTITATIVA

LSP - marzo 2013

13

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

CAPELLI

DROGHE ACIDE DROGHE BASICHE

Capello SMINUZ.

EXT KOH

30’ a 90°C

ALTRE DROGHE OPPIACEI CANNAB.

Capello POLVERIZ.

EXT TAMP

1 notte a 50°C

EXT Liq-Liq SPE

Evap.a secch.

EXT HCL

1 notte a 50°C

Evap.a secch. Evap.a secch.

SPE

Iniezione LC/MS QUANTITATIVA

Iniezione LC/MS QUANTITATIVA

Capello SMINUZ.

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

LSP - marzo 2013

14 14

MANAGEMENT SANITARIO

efficacia ed efficienza obiettivi

servizi efficienti ed affidabili

gestione razionale di risorse

controllo dei processi produttivi

innovazione organizzativa e operativa

realizzazione di

configurazione dell’offerta in relazione al bisogno

LSP - marzo 2013

15 15 15

AZIONI

PREPARAZIONE DEL CAMPIONE (M3)

Semplicità

Velocità

Simultaneità di estrazione

Solubilizzazione analiti

Stabilizzazione analiti

XEVO TQD

Metodi cromatografici più veloci

Valenza legale del risultato

LSP - marzo 2013

16 16 16

XEVO-TQD

Metodi base screening

“MIRATO”e “INCOGNITO”

Colonna cromatografica: UPLC HSS C18

Fase mobile: Tampone Ammonio formiato – Acetonitrile

LSP - marzo 2013

17 17 17

Reattivo M3 COMEDICAL

•Estrazione simultanea di tutti gli analiti (compreso ETG)

•Estrazione veloce e semplice (1 ora a 100 °C) da capello sminuzzato

•Nessuna trasformazione degli analiti

•Solubilizzazione

•Stabilizzazione

•Compatibile con iniezioni dirette LC/MS/MS (solubile in acqua…..su

base acquosa)

•Velocizzazione nella preparazione

della matrice

•Migliore recupero

LSP - marzo 2013

18 18 18

CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3)

LSP - marzo 2013

19 19 19

CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE THC-COOH Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3)

LSP - marzo 2013

20

NUOVO APPROCCIO OPERATIVO CAPELLI M3 + XEVO TQD

EXT Reattivo M3 1 ora 100°C

TUTTE LE DROGHE VENGONO ESTRATTE

CONTEMPORANEAMENTE

Opia, Coca, Meth, Amf, Ecs, Ket, Cannabinoidi, Bupren, Benzod, ETG, ecc….

Capello SMINUZZATO

Diluizione con acqua

Iniezione LC/MS/MS

QUALI-QUANTITATIVA

LSP - marzo 2013

21 21 21

6-o-MAM

REATTIVO M3

Tamp pH5 camp PLV

0,08 0,08

0,23 0,22

1,52 1,48

0,35 0,38

0,61 0,40

0,38 0,41

3,52 3,63

0,83 0,73

0,33 0,26

1,12 1,30

0,09 0,08

0,37 0,30

3,80 2,90

4,00 3,05

CONFRONTO RECUPERO 6-O-MAM nel capello

dopo estrazione con M3/Tampone pH5

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00

3,50

4,00

ng/m

g

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

campioni

REATTIVO M3

Tamp pH5 camp PLV

LSP - marzo 2013

22 22 22

CONFRONTO RECUPERO BEG nel capello

dopo estrazione con M3/HCl 0.1 M

BEG

REATTIVO M3 HCL 0,1 M

0,04 0,03

0,09 0,10

0,14 0,15

0,43 0,35

0,12 0,13

0,24 0,25

0,38 0,32

0,80 0,69

0,10 0,11

3,21 2,62

0,05 0,04

0,15 0,12

0,08 0,07

0,17 0,15

0,03 0,03

0,12 0,11

0,29 0,21

0,10 0,18

1,15 1,40

0,09 0,09

0,03 0,04

0,06 0,06

1,18 1,11

0,09 0,10

0,40 0,42

0,19 0,18

1,28 1,40

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00

3,50

ng/m

g

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27

campioni

REATTIVO M3

HCL 0,1 M

LSP - marzo 2013

23 23 23

CONFRONTO RECUPERO THC nel capello

dopo estrazione con M3/KOH1 M

THC

REATTIVO M3

KOH 1 M

0,12 0,08

0,55 0,47

0,60 0,56

1,70 1,20

0,23 0,22

0,80 0,61

0,54 0,57

0,04 0,05

0,44 0,49

0,09 0,10

0,10 0,14

2,08 1,38

0,64 0,53

0,25 0,20

0,66 0,38

0,58 0,66

0,38 0,42

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

ng/m

g

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

campioni

REATTIVO M3

KOH 1 M

LSP - marzo 2013

24 24 24

CAPELLO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS NEGATIVO / POSITIVO

LSP - marzo 2013

25 25 25

KETAMINA in MATRICE CHERATINICA

calibrazione e quantificazione al cut-off

LSP - marzo 2013

26 26 26

THC in MATRICE CHERATINICA

calibrazione e quantificazione 2 cut-off

LSP - marzo 2013

27 27 27

THC-COOH in MATRICE CHERATINICA

sperimentale

LSP - marzo 2013

ESTENSIONE

DEL METODO

A NUOVE MOLECOLE

29 29 29

ETG in MATRICE CHERATINICA

calibrazione e quantificazione al cut-off

LSP - marzo 2013

30

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

CAPELLI

DROGHE ACIDE DROGHE BASICHE

Capello SMINUZ.

EXT KOH

30’ a 90°C

ALTRE DROGHE OPPIACEI CANNAB.

Capello POLVERIZ.

EXT TAMP

1 notte a 50°C

EXT Liq-Liq SPE

Evap.a secch.

EXT HCL

1 notte a 50°C

Evap.a secch. Evap.a secch.

SPE

Iniezione LC/MS QUANTITATIVA

Iniezione LC/MS QUANTITATIVA

Capello SMINUZ.

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

Derivatizzazione

Iniezione GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA

Capello SMINUZ.

Diluizione con acqua

Iniezione LC/MS/MS

XEVO TQD

QUALI-QUANTITATIVA

EXT Reattivo M3

1 ora 100°C

TUTTE LE DROGHE

CAPELLI

M3 +XEVO TQD

LSP - marzo 2013

31 31 31

SANGUE INTERO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS NEGATIVO / POSITIVO

LSP - marzo 2013

32 32 32

BENZOILECONINA NEL SANGUE INTERO

LSP - marzo 2013

33 33 33

6-O-MAM NEL SANGUE INTERO

LSP - marzo 2013

34 34 34

MDMA NEL SANGUE INTERO

LSP - marzo 2013

35

URINE

Ev.le Idrolisi SPE

Iniezione

LC/MS QUANTITATIVA

Derivatizz.- Iniezione

GC/MS

QUALI-QUANTITATIVA SANGUE

ALTRE

DROGHE

CANNAB. EXT

Liq-Liq

SPE

Evap.

a secch.

Evap.

a secchezza

Iniezione

LC/MS QUANTITATIVA

Evap.

a secch.

Derivatizz.-

Iniezione GC/MS

QUANTITATIVA

URINE

Ev.le Idrolisi

Iniezione

LC/MS QUANTITATIVA

SANGUE

Diluizione con

acqua/M3.

Precipitazione +

(M3)

Iniezione

LC/MS QUANTITATIVA

LSP - marzo 2013 35

• Già eseguite VEQ con questi nuovi metodi con esito

favorevole

• Notevole riduzione della manualità e della

manipolazione della matrice con conseguente

diminuzione della possibilità di errore e

dell’incertezza di misura

• Estrema semplicità analitica con matrici complesse

• Aumento della produttività

LSP - marzo 2013 36

37 37 37

PROGRAMMAZIONE SEDUTA ANALITICA

LSP - marzo 2013

38 38 38 LSP - marzo 2013

39 39 39

NUOVA OFFERTA ANALITICA LSP-TN

SOSTANZA ANALISI DI CONFERMA

URINA CAPELLO SANGUE INTERO

Morfina, 6-MAM, Codeina, Diidrocod. X X X

Cocaina, Benzoilecgonina, Cocaetilene X X X

D9-THC X X

11-OH-THC X

CBN, CBD X

THC-COOH X X X

Amfetamina, Metamfetamina X X X

MDMA, MDA, MDEA X X X

Benzodiazepine X

Metadone X X X

EDDP X X X

Buprenorfina X X X

KETAMINA X X X

ETILGLUCURONIDE X X X

CATINONI X X X

CANNABINOIDI SINTETICI X X X

LSP - marzo 2013

40 40 40

PROGETTI FUTURI

•Scelta definitiva della colonna cromatografica ottimale

•Validazione dei metodi

•Sperimentare il pretrattamento del campione on-line

tramite cromatografia bidimensionale

•Inserimento delle molecole emergenti nel pannello degli analiti

(catinoni, cannabinoid sintetici,…)

•Adesione al progetto di “Allerta precoce”

LSP - marzo 2013

41 41 41 41

GRAZIE PER L’ATTENZIONE

LSP - marzo 2013