Biologia Molecolare CDLM in CTF 2010-2011 – La trascrizione negli eucarioti (II Parte)

  I meccanismi della trascrizione

  Organizzazione generale delle sequenze regolative

  Il macchinario generale della trascrizione

  Il Macchinario generale della trascrizione

  I fattori di trascrizione

  I coattivatori e corepressori trascrizionali

  RNA Polimerasi II (12 subunità)

  5 fattori generali di trascrizione (TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH)

  Mediatore (grosso complesso di 20 subunità)

Le subuinità si chiamano Rpb. 10 subunità costituiscono il nucleo catalitico Rpb4/7 non sono cataliticamente attive ma sono richieste. Il dominio C-terminale (CTD) contiene ripetizioni Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser ripetute e può essere fosforilato e defosforilato. Defosfo->Inizio Fosf->Allungamento

Set minimo di proteine per un promotore TATA TFIID -> TBP e 14 TAF TBP è conservata Il legame di TFIIB orienta il complesso sul promotore Il dominio N-terminale a nastro di zinco di TFIIB (ricca di cisterine) recluta la RNA Pol II, la orienta con la corretta spaziatura. TFIIF viene caricato insieme alla RNA Pol II (complesso forte) Legame di TFIIE e TFIIH TFIIH -> chinasi (CTD) e elicasi

Senza mediatore si ha una trascrzione basale a bassa efficienza e non si ha risposta agli attivatori Fattore generale o coattivatore? Stimola l’attività chinasica di TFIIH

•  Gli Enhancer sono specifiche sequenze di DNA in grado di legare fattori proteici capaci di aumentare l'efficacia dei promotori nell'attivazione della trascrizione • Al contrario, i Silencer sono specifiche sequenze di DNA che legano inibitori proteici della trascrizione

Sono entrambi elementi distali e per interagire con la regione del promotore è

necessario che il DNA si ripieghi a formare un’ansa.