apparato Le infezioni dell respiratorio - sunhope.it · Batteri opportunisti Gram-negativi...

Le infezioni dell‛apparato respiratorio

Prof. Piergiorgio Catalanotti

aprile 2015

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Bacteroides spp.Fusobacterium spp.Peptostreptococcus spp.

anaerobi (105-107/g di secreto)

Streptococcus spp MicrococcusStaphylococcus aureusS. epidermidis (mucosa nasale)LattobacilliMoraxella catarrhalisNeisseria

aerobi (104-105/g di secreto)nasofaringeadulto

Actinomiceti

streptococchialtri batteri

dopo 24 h e nel bambino

sterileentro 24 h dalla nascita

microbiota respiratorio residentesoggetti

Microbiota respiratorio residente (1)

Haemophilus influenzaeStreptococcus pneumoniaeNeisseria meningitidisCorynebacteriumMicoplasmi

residenti di altre nicchiePseudomonasEnterobacteriaceae

patogeni opportunisti

Entamoeba gingivalisTrichomonas tenax

protozoiCandida albicans

micetinasofaringeadultomicrobiota respiratorio residentesoggetti

Microbiota respiratorio residente (2)

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EtàSede anatomicaStagionalitàAmbiente familiarePresenza dell‛agente patogeno nell‛ambienteComorbilità

Fattori predisponenti

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Eziologia

modificazioni negli ultimi anni

rilevanza epidemiologica, clinico-evolutiva e terapeutica

Modificazione degli ecosistemi microbici legati al vasto uso o abuso di chemioantibiotici

Alterazioni dei meccanismi di difesa:

Identificazione di patogeni (ri)emergenti

Miglioramento delle tecniche di isolamento

Immunodeficienza

Impiego di farmaci immunosoppressori

Quadri clinici

Alte vie respiratorieSinusite

Rinite

Faringite

Epiglottidite

Laringite

Basse vie respiratorieTracheite

Bronchiolite

Polmonite ed empiema

Bronchite

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Patogenesi delle URTI

Dasaraju e Liu

infiammazione acuta dei seni paranasali spesso secondaria ad altre URTI

Sinusite

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eziologia virale (20 %)eziologia batterica

Streptococcus pneumoniae (25-30 %)Haemophilus influenzae (15-20 %)Moraxella catarrhalis (5-10 %)Staphylococcus aureus (4-6 %)Streptococcus pyogenes (2 %)batteri gram negativi e anaerobi (12 %)

eziologia batterica mista (s. cronica)batteri aerobi e anaerobi

Sinusite

alterazione dell‛attività ciliare dell‛epitelio

ipersecrezione

essudato mucopurulento

ostruzione delle cavitàostruzione delle cavità

irritazione

Edema, distruzione della mucosa, ostruzione

cronicizzazione

Sinusite

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Sinusite

Protocollo diagnostico

Coltura dell‛essudato nasale (???)

Coltura dell‛aspirato endosinusale

Raffreddore comune

coriza comune

infezione virale catarrale

predispone a complicazioni batteriche gravi

guarigione spontanea

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eziologia viraleRhinovirus (autunno)Coronavirus (inverno e primavera)RSV (neonati e bambini)Virus parainfluenzaliAdenovirusEnterovirus

Raffreddore comune

Faringotonsillite

angina

infiammazione acuta della mucosafaringea e delle tonsille

rare negli adulti

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Faringotonsillite

eziologia virale (70 %)RhinovirusCoronavirusAdenovirusHerpes simplexVirus parainfluenzaliCoxsackie virusEBVCytomegalovirus

eziologia batterica (30 %)Streptococcus pyogenesAltri streptococchi β emoliticiCorynebacterium diphtheriaeC. ulceransArcanobacterium haemolyticumFusobacteriumNeisseriaChlamydia trachomatisChlamydophila pneumoniaeMycoplasma hominis

eziologia micoticaCandida albicans

suppurative:- ascesso tonsillare e peritonsillare- otite media- meningite

• cocco Gram-positivo di formasferica-ovoidale

• principale patogeno causadi faringite batterica

• sequele post-streptococciche:

Streptococcus pyogenes

non suppurative: - glomerulonefrite e febbre

reumatica

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capsulaparete cellulare

antigeni proteici

mucopeptidem. citoplasmatica

citoplasma

pili

Carboidrato C

StreptococchiClassificazione su base antigenica

Polmonite, meningite,otite media, endocardite

GolaAlfanon tipizzabili

S. pneumoniae

Carie dentale, batteriemia, endocardite,

ascessi

Bocca, gola, colon,

apparato genitale

femminile

AlfaNessuna

non tipizzabili

Streptococchiviridanti

Ascessi addominali,infezioni urinarie,

endocarditi

ColonNessuna Alfa

D Enterococcusfaecalis

Sepsi neonatale emeningiti

Apparato genitale

femminile

BetaB S. agalactiae

Faringiti, impetigine,febbre reumatica,glomerulonefrite

Gola, cuteBetaA S. pyogenes

MalattieHabitatEmolisiClassific.

diLancefield

specie

Streptococchi e malattie associate

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S. pyogenesCaratteristiche colturali

• β emolitico di gruppo A

• sensibile alla bacitracina

Proteina M Adesine(colonizzazione)

Invasine(diffusione nei

tessuti)

Ialuronidasi idrolizza l‛acido ialuronico

S. pyogenesFattori di virulenza

Acido lipoteicoico (LTA) Proteine F and Sfb

proteine leganti la fibronectina)

Proteasi

Streptochinasilisa i coaguli del sangue

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Figure 2 - Detection of prtF1 among strains of group-A streptococci (representative gel). PCR products in various sizescorrespond to four (lanes 1, 2), three (lane 4), and two (lane 3) RD2 repeats.

Catalanotti P. et al. 2005

Impedine (evasione della

fagocitosi)

Capsulacomposta di acido ialuronico

Proteina Mla sua estremità distale presentacarica negativa che interferisce con la fagocitosi; essa blocca anche la deposizione del complemento sullasuperficie cellulare.

C5a peptidasidegrada la componente C5a del complementoche recluta e attiva i fagociti


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Aggressine (danneggiano direttamente

l‛ospite)

Leucocidinelisano leucociti e piastrine

Streptolisina O immunogenalisa gli eritrociti

Esotossine pirogeniche A,B e C tossina eritrogenica scarlattina

Streptolisina Snon immunogena


S. pyogenesFarmacoterapia

Terapia con β-lattamici• per non meno di 10 gg• sempre efficace in vitro

Farmacoresistenze emergenti• macrolidi• produzione di metilasi• pompa di efflusso

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U Z1,Z2,Z3 none 33,41,49,85,91,98 5

W P,Q,R,S,V, Z1,Z2 44,53,55,69,83,88,95

none 2,23,27,72,86

T K,L,M,M none 26,28,32,43,66 none

Y M,O 89 none 34

X A,H,I,J,L,Z1,Z3 61,81,97 68 none

others D,E,H,G,L,F 90 48 none

T serotyping PFGE patternErythromycin

sensitiveinvasive strains

Erythromycin resistant

not invasive strains invasive strains

not agglutinated A,B,C,L,V,Z1 25 15 93

Catalanotti P. et al. 2005

S. pyogenesFarmacoterapia

• bacillo Gram positivo, ramificato• corpuscoli di Babes Ernst• forma di clava (κκορυνη) • disposizione a lettere cinesi • aerobio e anaerobio facoltativo• esotossina difterica

The Diphtheria Toxin (DT) MonomerA (red) is the catalytic domain; B (yellow) is the binding domain which displays the receptor for cell attachment; T (blue) is the hydrophobic domain responsible for insertion into the endosome membrane to secure the release of A.

Corynebacterium diphtheriae

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Tossina intatta 62 SI NO

Dipeptide 62 SI NO

Frammento A 21,5 NO

Frammento B 40,5 NO

descrizione p.m.(kDa) Tossicità Attività

enzimatica

SINO

Corynebacterium diphtheriaeEsotossina: proprietà

Corynebacterium diphtheriaeEsotossina: meccanismo d‛azione

NAD + EF-2 = ADPR-EF-2 (inattivo) + nicotinamide + H2

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Corynebacterium diphtheriaeEsotossina: titolazione

Dose Minima Letale (DML)Minima quantità di tossina in grado di uccidere

una cavia del peso di 250 g in 4 gg.

Dose Letale 50 (DL50)Minima quantità di tossina in grado di uccidere il 50 % delle cavie del peso di 250 g in 4 gg.

• bacillo Gram positivo, ramificato• corpuscoli di Babes Ernst• forma di clava (κκορυνη) • disposizione a lettere cinesi • aerobio e anaerobio facoltativo• esotossina difterica

Microfotografia del corinebatteriofago ß, portatore del gene tox. I ceppi non tossinogenici di C . diphtheriae divengonotossinogenici per conversionefagica.

• gene tox


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Tossinogenesi in vitro di Corynebacterium diphteriae

Test di Elek

C. diphteriae tipo colturale gravis

• bacillo Gram positivo, ramificato• corpuscoli di Babes Ernst• forma di clava (κορυνη) • disposizione a lettere cinesi • aerobio e anaerobio facoltativo• esotossina difterica• gene tox• gravis, intermedius, mitis• diffusione per via aerea

• URTI con effetti a distanza (cuore e nervi periferici

• formazione di pseudomembrane


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• Trasmissione per via aerea• Malattia dell‛infanzia in soggetti non vaccinati• Negli USA 30-60% di soggetti a rischio

(< 0,01 UI/mL)• Clinicamente scomparsa• Episodica in alcoolisti e tossicodipendenti• Focolai epidemici in Russia

(80.000 casi, di cui 2.000 mortali, dal 1994)

• Casi sporadici anche in Europa e America (viaggiatori provenienti dalla Russia)

• Non vi sono predisposizioni razziali

Difterite: epidemiologia

• Test di Schick (saggio dell‛immunità antitossica)• Ricerca di anticorpi antitossici• Vaccinazione con anatossina

esotossina del ceppo PW80 trattata per 30 gg, a 37°C con formalina 4 °/°°

• Sieroprofilassi e/o sieroterapia con antitossina

siero immune da animali di grossa taglia

immunoglobuline specifiche purificate da siero p. convalescenti o vaccinati

Difterite: immunità

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Sieri antitossici: titolazione

Unità Immunizzante (UI)Quantità di siero immune in grado di neutralizzare

100 DML

Dose Limite Morte (L+)Minima quantità di tossina che, miscelata a 1 UI provoca

la morte di una cavia del peso di 250 g in 4 gg.

Dose Limite zero (L0)Massima quantità di tossina che, miscelata a 1 UI non

provoca nessuna reazione in una cavia del peso di 250 g in 4 gg.

Moderna titolazione della tossina

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C. pseudotuberculosisC. ulceransC. minutissimumC. pyogenes (haemolyticum)

Corinebatteri pseudodiftericiC. xerosisC. pseudodiphteriticum (hoffmanni)

Corynebacterium spp.

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• bacilli Gram positivi

• forma simile alla difterite

• alcuni ceppi sono tossino-produttori

Corynebacterium ulcerans

• Corynebacterium haemolyticum• bacillo pleiomorfo Gram positivo• immobile• asporigeno • aerobio e anaerobio facoltativo• frequentemente associato a faringite• diagnosi differenziale con faringite

streptococcica o virale• rash cutaneo• sepsi e osteomielite

Coltura su agar sangue

CAMP test

Arcanobacterium haemolyticum

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• bacillo Gram negativo anaerobio• fusiforme, 5-10 μm, appaiato

all‛estremità• asporigeno• costituisce la placca gengivale• angina di Plaut Vincent

F. nucleatum coaggregato conPorphiromonas gingivalis (coccobacilli)

Fusobacterium nucleatum


Faringotonsillite

Tampone faringeo con premitura rapidamente inviato in laboratorio (2-4 h)

Es. colturale

Ricerca indiretta

T. Amies

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Faringotonsillite

Es. colturale

ColumbiaCNA35°C 18 h

Tinsdale35°C

24-48 h

Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg


SGAnon SGA

S. pyogenesIdentificazione

A


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Faringotonsillite

Ricerca indiretta

Titolo anti O streptolisinicoStrepto M testAnticorpi anti DNAasiStreptozyme

anti O streptolisinaanti DNAasianti jaluronidasianti Nicotinamide-Adenine-Dinucleotidase (NADasi)anti streptochinasi

Faringotonsillite

Es. colturale


Tinsdale35°C

24-48 h

Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg


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Tinsdale35°C

24-48 h

C. diphtheriae, C. ulcerans , H2S +

C. pseudodiphteriticum(hofmannii), H2S -

C. diphtheriae

C. hofmannii

Corynebacterium diphtheriaeIdentificazione


Faringotonsillite

Tinsdale35°C

24-48 h

Test di ElekTossinogenesi in vitro di C.diphtheriae

Carta bibula imbibita di antitossina difterica

Area di insemenzamento del ceppo da saggiare

Bande di precipitazione

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Faringotonsillite

Es. colturale


Tinsdale35°C

24-48 h

Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg


Tioglicollato37°C

48-72 gg

FusobacteriumIdentificazione

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Epiglottidite

infiammazione acuta dell‛epiglottide

comune negli adulti

eziologia batterica

Laringite

infiammazione acuta del laringe

eziologia viraleVirus parainfluenzaliInfluenza virusRSVAdenovirus

eziologia battericaStreptococcus pyogenesHaemophilus influenzae tipo bMoraxella catarrhalisCorynebacterium diphtheriae

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Quadri clinici

Alte vie respiratorieSinusite

Rinite

Faringite

Epiglottidite

Laringite

Basse vie respiratorieTracheite

Bronchiolite

Polmonite ed empiema

Bronchite

Barriere anatomiche e fisiche

Secrezioni tracheobronchiali

Clearance meccanica

•Turbinati nasali •Epiglottide •Laringe •Filtrazione •Angolazione delle vie aeree •Integrità dell‛epitelio

•Muco, surfattante •Lisozima, lattoferrina, fibronectina

•Tosse •Clearance muco - ciliare

Meccanismi di difesa delle basse vie respiratorie

Epitelio pseudo-stratificato ciliato dell‛albero bronchiale

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Difese immunitarie innate

Difese immunitarie acquisite

•Macrofagi alveolari •Leucociti polimorfonucleati •Proteine del complemento

•Immunità umorale •Immunità cellulo-mediata

Meccanismi di difesa delle basse vie respiratorie

infiammazione acuta dei bronchi

Bronchite e bronchiolite

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infiammazione acuta dei bronchi

secondaria a flogosi

virale

RhinovirusAdenovirusVirus parainfluenzaliCoronavirusCoxsackievirus

o a infezioni batteriche omicotiche

StreptococchiStafilococchiPneumococchiBordetella pertussisSpirocheteMiceti


frequente nella stagione fredda

interessamento bronchiolare

cronicizzazione frequente per tabagismo

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Patogeni associati alla riacutizzazione della Bronchite Cronica

Influenzavirus

CoronavirusRhinovirusVirus respiratorio sincizialeVirus parainfluenzali Per il 30% di tutte le

riacutizzazioni

VIRUSMycoplasma pneumoniaeBatteri opportunisti Gram-negativiPseudomonas aeruginosaStaphylococcus aureusMoraxella catarrhalisStreptococcus pneumoniaeHaemophilus influenzae

Per il 70% di tutte le riacutizzazioni

Batteri


Es. colturale dell‛espettorato

Broncoaspirato

BAL


Omogeneizzazione del campione

Semina con ansa calibrata

Ricerca e quantizzazione di patogeni

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Polmonite

infiammazione del parenchima polmonare

Patogenesi della polmonite batterica

Polmonite


•Alterazione dello stato di coscienza•Difetti congeniti della clearance muco-ciliare •Edema polmonare •Età avanzata •Etilismo •Fibrosi cistica •Intubazione endotracheale •Respirazione meccanica •Tabagismo

1) Compromissione e superamento dei mecca-nismi di difesa locali

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Polmonite


3) Patologie infettive locali predisponenti asovrapposizione batteriche

2) Compromissione generale delle difeseantinfettive

• Asplenia, deficit immunologici • Diabete • Età avanzata • Infezione da HIV • Neoplasia

• Influenza• Morbillo

3-9.5%60 -75%Streptococcus pneumoniae>90%70-80%BATTERI TIPICI

2-8%Altri virus8%Influenza virus

Raramente10-20%VIRUS10%C. pneumoniae2-3%Chlamydia psittaci5-18%Mycoplasma pneumoniae

0-25%2-5%Legionella spp.Raramente10-20%BATTERI ATIPICI

10%RaramenteAnaerobi>50%RaramenteBacilli Gram-negativi

10-20%2 -10%Staphylococcus aureus?1-5%Moraxella catarrhalis?10 -15%Haemophilus influenzae

Polmonite nosocomialeCAPAGENTE PATOGENO

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• diplococco Gram positivo

• CAP (∼∼ 50% dei casi) • Sinusite acuta (>30% dei casi)

• crescente resistenzaagli antibiotici β-lattamici e ai macrolidi

Streptococcus pneumoniae

Polmonite, meningite,otite media, endocardite

GolaAlfanon tipizzabili

S. pneumoniae

Carie dentale, batteriemia, endocardite,

ascessi

Bocca, gola, colon,

apparato genitale

femminile

AlfaNessuna

non tipizzabili

Streptococchiviridanti

Ascessi addominali,infezioni urinarie,

endocarditi

ColonNessuna Alfa

D Enterococcusfaecalis

Sepsi neonatale emeningiti

Apparato genitale

femminile

BetaB S. agalactiae

Faringiti, impetigine,febbre reumatica,glomerulonefrite

Gola, cuteBetaA S. pyogenes

MalattieHabitatEmolisiClassific.

diLancefield

specie

Streptococchi e malattie associate

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diplococchi Gram positivi lanceolati

asporigeni

S. pneumoniaeCaratteristiche morfologiche

immobilicapsulati

90 tipi sierologici (antigene capsulare) 23 tipi patogeni per l‛uomotest di Neufeld (rigonfiamento capsulare, quelling reaction)

S. pneumoniaeCaratteristiche antigeniche

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antigene C si trova a livello della parete, èantigenicamente distinto da quello degli streptococchi beta emolitici, in presenza di calcioprecipita con una globulina sierica chiamata proteina-C-reattiva

S. pneumoniaeCaratteristiche antigeniche

Proteina M si trova a livello dellaparete, è simile ma antigenicamente

distinta da quella degli altri streptococchi.

batteri esigentialfa emolitici in aerobiosi e beta emolitici inanaerobiosi per la produzione di pneumolisina, emolisina ossigeno labilenelle vecchie colture aspetto a pedina di damala crescita è inibita dall‛optochina

S. pneumoniaeCaratteristiche colturali

S. pneumoniae s. viridanti

è lisato dai sali biliariS. mitis non è lisato dalla bile

S. pneumoniae è lisato dalla

bile

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Adesina N-acetilesosammina-galattosio

Adesine(colonizzazione)

S. pneumoniaeFattori di virulenza


Impedine (evasione della fagocitosi)

PspA (Pneumococcal Surface Protein A)

attività antifagocitaria

immunità protettiva

sIgA proteasilimita l‛intrappolamento nel muco, impe-

dendo l‛esplusione dalle vie respiratorie

Capsulaattività antifagocitaria

Proteina Msuperantigene

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Neuraminidasi attacca le glicoproteine e i glicolipidi delle membrane


Invasine (invasione dei tessuti)

Pneumolisinaproteina 52,8 kDacitotossinaomologia con streptolisina e listeriolisinabatterioliticaimmunità parzialmente protettiva


l‛ospite)

Peptidoglicano attivazione del complementoliberazione di IL-1 e di TNFα


Moduline (danneggiano indi-rettamente l‛ospite)

Acidi teicoiciattivazione del complementoliberazione di IL-1 e di TNFα

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S. pneumoniaeFarmacoresistenze

Emergenza di resistenza a: • penicilline• cefalosporine• macrolidi• cloramfenicolo• tetracicine• rifampicina• cotrimazolo

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S. pneumoniaeFarmacoresistenze

S. pneumoniaeFarmacoterapia

beta-lattamici(macrolidi nei soggetti allergici)

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• bacillo Gram-negativo• patogeno del trattorespiratorio (∼∼15% deicasi di CAP)

• sempre maggioreresistenza agliantibiotici β-lattamici

Haemophilus influenzae

• bacillo Gram-negativo• colonizza il 10–25% deibambini

• sintomi clinici, in genere, simili a quelli daH. influenzae

• la produzione di ββ-lattamasi è in continuo aumento

Haemophilus parainfluenzae

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• diplococco Gram-negativo

• ∼ 1-5% dei casi di CAP

• 100% dei ceppiproduce β-lattamasi

• presenta una sempremaggiore resistenza aimacrolidi

Moraxella catarrhalis

Moraxella

Caratteristiche morfologiche

bacilli o coccobacilli Gram negativi

reniformi

immobli, asporigeni

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Caratteristiche metabolichecatalasi positiviossidasi positiviindolo negativialcuni ceppi posseggono attività fenilalanin-deaminasicaalcuni ceppi posseggono attività proteoliticanon producono esoenzimi idroliticiaerobi e anaerobi facoltativi

Caratteristiche colturalibatteri notevolmente esigentiprediligono terreni al sangue ev. riscaldato

Moraxella

Bronchiti e polmoniti (adulti)Otiti medie, sinusiti e laringitiMeningite in S. immunocompromessiSepsi, endocarditi, artriti settiche.CheratitiOphtalmia neonatorum

M. catarrhalis

Congiuntivite (popolazioni a basso livello socio-economico)

M. lacunata

Di dubbio significato patogenetico; si riscontra nei sedimenti urinari.

M. nonliquefaciens

Di dubbio significato patogenetico; si isola in alcuni materiali patologici.

M. osloensis

patologie umanespecie

Moraxelle di interesse medico

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tra i più frequenti patogeni umani

residente della cute e del cavo orofaringeo

frequente lo stato di portatore

M. catarrhalisCaratteristiche

trasmissione per via aerea

nei bambini colonizzazione delle basse vie respiratorie dal 28 al 100%

negli adulti colonizzazione dal 1 al 10,4 %


fagocitosi)

M. catarrhalisFattori di virulenza

Adesine (colonizzazione) Pili tipo IV

Antigene di superficie UspAUspA1

adesina attiva in vitro sucellule della congiuntiva

UspA2adesina ???

Antigene di superficie UspAUspA1

conferisce resistenza al killing da siero???UspA2

conferisce resistenza all’azione battericidadel siero umano normale

Proteine specifiche per il ferroWWW.SUNHOPE.IT

Moduline (danno indiretto)

M. catarrhalisFattori di virulenza

attiva il complemento, causanecrosi endoteliale e infiammazione disseminata

LPS

Terreno agar cioccolata

M. catarrhalisCaratteristiche colturali

A 35°C, in atmosfera di CO2 5 %colonie piccole grigio-biancastre, di aspetto mucoide

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M. catarrhalisFarmacoterapia

Tutti i ceppi sono produttori di β–lattamasi

• Penicilline + ac. clavulanico• Cefalosporine di III generazione• Macrolidi (nei S. allergici alle penicilline)• Fluorochinoloni (nell‛adulto)

• cocco Gram-positivo• la sua incidenza puòaumentare in seguitoad epidemie influenzali

• causa del 2–10% deicasi acuti di CAP

• la maggior parte deiceppi produce β-lattamasi

• 20% dei ceppiresistente ai macrolidi

Staphylococcus aureus

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Stafilococchi

Caratteristiche morfologiche

cocchi Gram positivi, 0,8-1 μμm

disposti a grappolo

immobili, asporigeni

capsulati

capsula

Caratteristiche metabolichecatalasi positiviossidasi negativiaerobi e anaerobi facoltativi

Caratteristiche colturalibatteri poco esigentialofili

Stafilococchi

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tra i più frequenti patogeni umani

residente della cute e del cavo orofaringeo

frequente lo stato di portatore

S. aureusCaratteristiche

Antigene capsulare (ac. glucosaminuronico)

Antigene parietale proteico A

Antigeni parietali polisaccaridici A e 263 (complesso peptidoglicani-acidi teicoici)

S. aureusCaratteristiche antigeniche

capsulaantigeni proteici

parete cellularemucopeptide

m. citoplasmatica

citoplasma

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fagocitosi)

Capsula

Coagulasi

S. aureusFattori di virulenza

Proteasi

Enzimi lipoliticiDNAsi

Ialuronidasi

Stafilochinasi

Invasine(diffusione nei

tessuti)Leucocidina

Leucocidina


l‛ospite)

Stafilolisineα emolisinaβ emolisinaγ emolisinaδ emolisina


Enterotossine

Tossina epidermolitica

Tossina pirogena

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catalasi, superossidodismutasiproteina A

peptidoglicano

S. aureusCaratteristiche colturali

Terreno di Chapman (agar sale mannite)

35°C, 36 h

colonie giallo oro, fermentanti lamannite, con viraggio del rosso fenolo al giallo

Terreno cromogenico

Terreno al sanguecolonie β emolitiche (completa)

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S. aureusIdentificazione

Mannitolo +colonie giallo oro, fermentanti

la mannite, con viraggio del rosso fenolo al giallo

Coagulasi +

Test coagulasi

Catalasi + catalasi2H2O2 2H2O + O2

HA

S. aureusIdentificazione

DNAsi +

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• bacillo Gram-negativo• colpisce, di solito, i pazienti anziani o i pazienti con compromissione del sistema immunitario

• presenta una sempremaggiore resistenzamultipla ai farmaci

Klebsiella pneumoniae

• polmonite in etàscolare e nei giovani(5–35 a)

• elevata incidenza nellecomunità “chiuse”(studenti universitari, reclute militari, detenuti)

• casi autolimitanti• cicli ogni 4 anni

Mycoplasma pneumoniae

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Kauppinen e Saikku. Clin. Infect. Dis. 1995;21(Suppl. 3):244–52

• patogeno intracellulare gram-negativo, obbligato

• sempre più frequente causa di CAP • responsabile per ~10% di tutti i casi di

polmonite• può agire come cofattore nelle infezioni

respiratorie• ~50% degli adulti presenta sieropositività

Chlamydophila (Chlamydia) pneumoniae

• bacillo Gram-negativo• colpisce fumatorianziani, nefro-pazientie trapiantati

• casi sporadici, limitatialle comunità e ai mesiestivi

Legionella pneumophila

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• bacillo acido alcoolresistente

• la tubercolosipolmonare è in regressione nei paesiindustrializzati

• polmonite riemergente

Mycobacterium tuberculosis

I miceti sono responsabili di infezioni nosocomiali

I miceti sono tipici opportunisti e trovano nell‛ambiente ospedaliero condizioni che

favoriscono l‛estrinsecarsi del loro potenziale potere patogeno.

La fonte di infezione è spesso endogena, se esogena è di provenienza ambientale

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I miceti sono responsabili di infezioni nosocomiali

Le micosi polmonari sono profonde, gravi e disseminate

Candida spp Aspergillus fumigatusAspergillus flavusCryptococcus neoformans


Es. dell‛espettorato

Broncoaspirato

BAL

Polmonite

Al mattino, al risveglio

Gargarismi

2 mL

Trasporto rapido al laboratorio

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Es. dell‛espettorato

Broncoaspirato

BALValidazione del campione

Omogeneizzazione del campione

Semina con ansa calibrata

Ricerca e quantizzazione di patogeni

Polmonite

Indice di Bartlett

-1Cellule epiteliali 10-25-2> 25

+1Presenza di muco+2> 25+110-250Neutrofili < 10

punteggiotipo cellulare e numero cellule /c.m.

> 0 campione accettabileBartlett et al., 1978; Murray et al., 1995

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forma, dimensioni, disposizione eaffinità tintoriali

• colorazione di Gram


Polmonite

Es. microscopico

Polmonite da pneumococchi




Polmonite

Es. microscopico

Bronchite cronica

Polmonite da pneumococchi e stafilococchi

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Polmonite

Es. microscopico

Espettorato da p. con tubercolosi polmonare

• colorazione di Ziehl Neelsen


Polmonite

Es. microscopico


• colorazione di Gram• colorazione di Ziehl Neelsen

forme ifali

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Agar cioccolata

37°C 24 h

Mac Conkey35°C 24 h

Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg

test della optochina

Streptococchi viridantiS. pneumoniae


AgarCioccolata

35°C 24 h

S. pneumoniae Identificazione

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Es. colturale


Agar cioccolata

37°C 24 h


Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg

Polmonite

Fattore V +

Fattore X

Fattore V(NAD)

Fattore X

(emina)

Sangue di cavallo

H. Influenzae + + -

H. parainfluenzae - + -

H. ducrey + - +

H. haemolyticus + + +

H. parahaemolyticus - + +

Fattore X Fattore V Emolisi

AgarCioccolata

35°C 24 h

Haemophilus spp. Identificazione

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Es. colturale


Agar cioccolata

37°C 24 h


Sabouraud22°C

7-10 gg

Tioglicollato37°C

48-72 gg

Polmonite


Es. colturale

Polmonite


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Ricerca bacilli tubercolari

Polmonite

Ricerca tradizionale (L. Jensen)

Terreno cromogenico MB redoxSamra et al. Journal of Clinical Microbiology, 1999

Metodo radiometrico

Metodo fluorescenza

PCR


Polmonite

Il test è basato sulla misurazione dall‛IFN-γ rilasciato dai linfociti T sensibilizzati del sangue intero incubato per una notte con con le proteine ESAT-6, CFP-10 e TB7.7 e con mitogeniaspecifici (controllo).

Ricerca indiretta di tbc

Quantiferon

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Polmonite

Il test è positivo negli individui affetti da M. tuberculosis o da tubercolosi latente (LTBI), ma non di soggetti non infetti, o vaccinati con BCG, o che non sono a rischio di LTBI.

Ricerca indiretta

Quantiferon


Ricerca Legionella

Polmonite

Antigenuria in cromatografia (BINAX)

in alternativa

Antigenuria in EIA (Biotest)

TEST DI SCREENING

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Ricerca Legionella

Polmonite

TEST COLTURALE (di secondo livello)Materiale idoneo

SangueTessuto polmonare (biopsia)Broncoaspirato

Preparazione del campioneEventuale omogeneizzazione (q.b.) in PBS sterile

Terreni da insemenzareBCYE + BMPA

Incubazione37°C in camera umida per 2-3 gg. (fino a 14 gg)

Colonie sospettebianche, lucenti, circolari lisce, bombate conmargine intero (L. pneumophila e altre specie, esclusa L. gormanii)

biancastre o crema, legg. bombate, mucoidi(L. gormanii)1-2 mm (la dimensione aumenta con il tempo) Gram (utilizzare carbolfucsina al posto della fucsina basica): bacilli Gram negativi, pleio-morfi 1-4 μμm di lunghezza e 1 μm di

larghezzaColonie fluorescenti

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Ricerca Legionella

Polmonite

TEST DI CONFERMAsubcoltura in BCYE, in CYE e in TSA al sangue

assenza di crescitaCYEassenza di crescitaTSA al sangue

sviluppoBCYE


Ricerca Legionella

Polmonite

TEST DI BIOLOGIA MOLECOLAREPCR

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