ANIMAL FACILITY EXPERIMENTAL MODELS · Modello di nefropatia diabetica Modello di infiammazioni...

ANIMAL FACILITY !EXPERIMENTAL MODELS

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Lí AF Ë specializzata nellí implementazione di metodi analitici alternativi basati sullí utilizzo di sofisticati dispositivi per l'imaging in vivo (IVIS spectrum Elmer, Doppler VEVO 2100 Visualsonics and microCT SkyScan 1178 Bruker), rispondendo alla necessit‡ di ridurre il numero degli animali coinvolti nelle procedure sperimentali e lí invasivit‡ dei protocolli in vivo.

Stabulazione e gestione di colonie murine secondo lo standard SPF definito in base alle linee guida FELASA;

Assistenza tecnica e veterinaria nella stesura dei protocolli sperimentali per il controllo e il mantenimento del benessere animale

Modelli tumorali: pi˘ di 70 xenograft tra sottocutanei, metastatici e ortotopici (mesotelioma e glioblastoma)

Modelli di patologie oculari: Glaucoma, cheratocongiuntivite secca (KCS), retinite pigmentosa, Degenerazione maculare legata allí et‡ (AMD), Neuropatia ottica ischemica anteriore non arteritica (NAION), Retinopatia diabetica.

Modelli di malattie infiammatorie croniche intestinali IBD (colite ulcerosa, morbo di Crohn)

Modello di Colite acuta indotta da 2,4,6 trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)

Modello di nefropatia diabetica

Modello di infiammazioni acute come cistite e artrite reumatoide

Modelli di patologie dismetaboliche: diabete di tipo 1 e 2, obesit‡ , ipercolesterolemia.

www.mirbiogem.com [email protected]

L'impianto Ë autorizzato all'uso di roditori per ricerche biomediche dal Ministero della Salute con decreto ministeriale n 100/2006 del 10 luglio 2006 secondo le indicazioni del D.lgs. N ° 26 2014/04/03, sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici. La nostra struttura dispone di un comitato Etico interno ì Organismo Preposto al Benessere Animaleî (OPBA). Attualmente lo stabulario del MIR ospita circa 7000 animali wild type e geneticamente modificati (molti dei quali sono stati generati in house).Le sperimentazioni sono condotte attraverso lí utilizzo di procedure operative standard (SOP), dalla manipolazione degli animali alle tecniche di anestesia ed analgesia. Inoltre lí Animal Facility Ë certificata dallí Organizzazione Internazionale per la Standardizzazione (ISO 9001) per lí assistenza a progetti di ricerca con sperimentazione animale.

Ratto Zebrafish Cavia Coniglio

Attivit‡ sperimentali

Tecnologie di imaging preclinico per la caratterizzazione di modelli patologici negli animali:

a) Tomografia Computerizzata (MicroCT SkyScan 1178)

b) Imaging Ottico (IVIS Spectrum 200)

c) Ecografo (VEVO 2100)

d) Slit Lamp (Carl Zeiss)

Medicinal Investigational Research

ATTIVITAí SPERIMENTALI

Lí Animal Facility (AF) del MIR si estende su una vasta superficie (1000m2) con una struttura Specific Pathogen Free (SPF) in grado di ospitare fino a 30000 animali da laboratorio quali:

FUNCTIONAL GENOMICS

Il laboratorio di Functional Genomics (FG), opera nel campo della genomica, della trascrittomica e della genomica funzionale per consentire la completa esplorazione dellí attivit‡ genica e/o proteica. Il laboratorio di FG Ë dotato di attrezzature allí avanguardia per il Next Generation Sequencing (NGS) e si avvale delle pi˘ recenti tecnologie disponibili per lí esecuzione di studi funzionali di overespressione, di silenziamento e di knock out. La presenza di moderne strumentazioni e lí expertise del personale consentono allí unit‡ di offrire servizi indispensabili ad analizzare lí espressione genica, ad identificare nuove mutazioni/fusioni geniche, o a studiare il ruolo di uno o pi˘ geni in uno specifico contesto.

Questa facility rappresenta un valido supporto per ospedali e laboratori di analisi che effettuano test diagnostici e analisi genetiche/molecolari.

Analisi dellí espressione genica mediante Affymetrix Microarrays, qRTP CR e RNAseq;Sequenziamento del DNA mediante Sanger Sequencing, pyrosequenziamento e tecnologie NGS;Determinazione di Single Nucleotide Polymorphism (SNP) e Copy Number Variation (CNV);Studi funzionali basati su esperimenti di over espressione, silenziamento genico, knock out genico e/o gene editing;




NATURAL PRODUCTS

Il crescente interesse nei confronti dei principi attivi naturali ha portato il MIR ad istituire lí unit‡ Natural Products (NP). Lí innovativo processo di estrazione a freddo, Naviglio EstrattoreÆ , e liofilizzatori con elevate capacit‡ consentono di offrire applicazioni diversificate che vanno dallí estrazione alla liofilizzazione di molteplici matrici vegetali. La rapidit‡ , lí estrazione a bassa temperatura e lí elevata efficienza del processo estrattivo garantiscono il recupero totale dei principi attivi non degradati contenuti nelle piante officinali. Ií estrazione puÚ essere condotta su piccola e media scala.

6 Estrattori Naviglio a diversa capacit‡ (2L, 20L e 40L) Liofilizzatori Stellar Millrock Mini Spray dryer B290 Molino trita piante Albrigi in Herba HPLC/MS

Preparazione di estratti fluidi, tinture madri, macerati, glicerinati, oleoliti.Estrazioni da piante officinali per il settore farmaceutico, omeopatico, erboristico e cosmetico.Estrazione da sostanze vegetali per il settore alimentare, dietetico, nutraceutico.Produzione di liquori da bucce di agrumi e piante aromaticheEstrazione a freddo di analiti termolabili.Liofilizzazione.Analisi qualiqu antitative attraverso tecniche cromatografiche e spettroscopiche. Analisi di attivit‡ biologica.Processi di micronizzazione mediante spray drying

6 Estrattori Naviglio a diversa capacit‡ (2L, 20L e 40L)

Molino trita piante Albrigi in HerbaATTREZZATURE




PK/PD

Lí unit‡ di Pharmacokinetics & Pharmacodynamic (PK/PD) si presenta come centro di eccellenza per studi preclinici mirati alla determinazione di:

AssorbimentoDistribuzioneMetabolismoEliminazioneTossicit‡

Le analisi farmacocinetiche vengono effettuate attraverso sviluppo, convalida e implementazione di metodi bioanalitici quantitativi che utilizzano High Performance Liquid Chromatography (HPLC) e LCM ass Spectrometry (MS). Lí analisi dei dati, la modellistica e lí interpretazione statistica dei risultati sono eseguite utilizzando software standard di farmacocinetica (WinNonlinÆ o Kinetica).

AnalisiStabilit‡ in plasma e tessutiLegame alle proteine plasmaticheCoefficiente di ripartizione Stabilit‡ metabolicaPerfusione dí organo in ratto (fegato, rene, muscolo, cuore)Studi ADME in vivo (topi, ratti)Valutazione biodisponibilit‡ /bioequivalenzaDistribuzione tissutaleEscrezione (urine, bile)


edicinal Investigational ResearchM


PROTEIN FACTORY

Lí unit‡ di Protein Factory (PF) Ë stata creata per supportare gli istituti di ricerca e le aziende farmaceutiche nella produzione, purificazione e caratterizzazione di proteine ricombinanti e anticorpi monoclonali.Grazie allí ampia gamma di vettori di clonaggio e di espressione, alla banca di cellule batteriche ed eucariotiche, alla disponibilit‡ di strumenti allí avanguardia e alla presenza di personale qualificato, la PF puÚ produrre proteine ricombinanti e anticorpi monoclonali in piccola, media e larga scala. Questi possono essere impiegati in:

analisi strutturali e funzionaliscreening di interattori/ligandimessa a punto e validazione di saggi immunologicistudi di profiling in vitro ed in vivoapplicazioni in preclinica

I servizi offerti in Protein Factory vanno dal design della strategia produttiva, alla produzione di proteine e anticorpi su larga scala, passando per clonaggio e high throughput screening (HTS). I metodi di clonaggio basati su HTS consentono di inserire i DNA di interesse in vari vettori con un multiple choice di TAGs.

Design sperimentale e scelta dei costruttiClonaggio ed espressione di proteine e anticorpiProduzione di proteine e anticorpi con bioreattori monousoEstrazione e purificazione di proteine ricombinanti e anticorpi su piccola, media e larga scala (Akta system/GE Healthcare).Messa a punto e validazione di test analitici riguardanti analisi strutturali, studi biochimici e saggi di attivit‡ biologica, in particolare:

saggi funzionali sulle proteine prodotte, ELISA (EnSpire Multimode Plate Reader/PerkinElmer)

saggi di binding (Biacore T200/ GE Healthcare)

analisi strutturali di Dicroismo circolare (J1 500 Circular Dichroism Spectrometer/Jasco)

a

b

c




EXPERIMENTAL PHARMACOLOGY ! ANALYTICAL BIOCHEMISTRY

Questa unit‡ dispone di una vasta Banca cellule con centinaia di linee cellulari stabilizzate, cellule primarie, tumorali esprimenti GFP o Luciferasi. Lí unit‡ conduce studi per definire attivit‡ biologica e profilo tossicologico di molecole e prodotti biologici. In base alle esigenze sperimentali Ë possibile scegliere tra numerosi modelli cellulari disponibili e le condizioni di coltura possono essere adeguate alle esigenze del disegno sperimentale.


Mantenimento e conservazione in azoto liquido

Test per identificazioni di patogeni e tossine

Sistemi di spedizione dei campioni cellulari

Generazione di modelli cellulari specifici esprimenti proteine e/o silenziate per geni dí interesse (SHRNA o CRISPR/Cas9)

Isolamento di nuove linee cellulari primarie

Colture cellulari

FACS

Vitalit‡ cellulare e citotossicit‡

Migrazione e angiogenesi

Saggi di tipo cellulare

Signaling Pathway Analysis

Differenziamento Apoptosi e ciclo cellulare

Live Cell Imaging (Operetta HighC ontent Imaging System)

Valutazione di affinit‡ ligandor ecettore mediante SPR (Biacore T200)

Screening di piccole molecole e agenti biologici

Analisi dellí effetto biologico di molecole di diversa natura utilizzando sistemi di analisi in vitro ELISA

Immunofluorescenza

western blot

Saggi biologici

Studio dei meccanismi di segnalazione intracellulare



TOXICOLOGY ! HISTOPATHOLOGY

Lí unit‡ toxicology ! histopathology (T!H) offre servizi progettati per aiutare i clienti a ridurre i tempi e i costi della fase di sviluppo preclinico attraverso soluzioni efficaci e vantaggiose.I metodi variano dallo Standing con H!E alle procedure immunologiche come lí immunoistochimica e lí immunofluorescenza. La T"H unit supporta la tossicologia preclinica in studi di correlazione morfo funzionale e nella definizione del profilo tossicologico delle sostanze da esaminare. Le attivit‡ sperimentali sono eseguite nel rispetto delle procedure operative standard (SOP).

[email protected]


[email protected]

TossicologiaSomministrazione in roditori di dosi singole e ripetute attraverso diverse vie di somministrazione.

Individuazione dellí intervallo della dose (DRF)

Massima dose tollerata (MTD)

Tossicit‡ subcronica

Tossicit‡ cronica

Biocompatibilit‡

Patologia clinica

Istopatologia

Pannelli completi dei parametri standard applicati a campioni di siero, plasma e urine

Ematologia differenziata; esame al microscopico della morfologia cellulare

Saggi Biochimici

Test di coagulazione

Analisi delle urine; esami al microscopio dei sedimenti.

Realizzazione di pannelli biochimici personalizzati (es. per malattie infiammatorie croniche oculari o sindromi dismetaboliche)

Anatomia e istopatologiaTecniche di dissezione, valutazione macroscopica degli organi e/o tessuti, registrazione del peso degli organi, esame delle sezioni istologiche.

Individuazione di lesioni correlate al trattamento, valutazione dei cambiamenti adattativi.

Caratterizzazione dellí evoluzione o regressione patologica dopo l'interruzione del trattamento.

Definizione delle cause della morte imprevista in relazione al trattamento

Identificazione degli organi bersaglio della tossicit‡

Gross Pathology approfondita con l'osservazione diretta allo stereomicroscopio

Campionamento dei tessuti e istopatologiaConservazione dei tessuti (con fissativi specifici e / o crioconservazione)

Campionamento e taglio degli organi, eseguiti secondo SOP per garantire la riproducibilit‡ del:

Istopatologia: approcci di ricerca speciali

Pannelli personalizzati di biomarcatori in accordo con la richiesta e gli obiettivi dello sponsor

Caratterizzazione di pattern di espressione specifici in diversi modelli patologici.

Espressioni di nuovi biomarcatori in modelli sperimentali di tumore mediante l'uso di pannelli di anticorpialtamente purificati e specifici.

Tecniche di immunoistochimica e immunofluorescenza

Utilizzo di software analitici per l'elaborazione delle immagini (HAMAMATSU NanoZoomer 2.0RS NIKON, LAS X L eica, ImageJ).

sito anatomico di ciascun organo da esaminare

numero di frammenti necessari per avere uní esplorazione esaustiva dei tessuti

piano di sezione


ANTIBODIES

Immunizzazione (Ag proteici, peptidici e cellulari)Screening dei sieriFusioneScreening primario degli ibridomiRiconferma screeningSottoclonaggio (diluizione a limite)Stabilizzazione ibridomiBanche ibridomiPurificazioneCaratterizzazione (sottoclasse mAb, mappatura epitopo, WB, ELISA,HPLC, IEF, SDS PAGE)Produzione e Purificazione in larga scala


POLICLONALI


MONOCLONALI (mAb)

Produzione di anticorpi policlonali in coniglioSPFProtocolli dí immunizzazione dedicati (Ag proteici, peptidici e cellulari)Purificazione degli anticorpiCaratterizzazione degli anticorpi

I requisiti fondamentali per generare con successo mAb sono il design dell'antigene, le strategie di immunizzazione e le tecnologie di screening. Abbiamo grande cura nella progettazione di antigeni; Possiamo sintetizzare il peptide o produrre la proteina totale. Dalla ricerca alla produzione industriale di mAbs, il programma di immunizzazione e di campionamento Ë personalizzato per soddisfare le specifiche dei sponsor.

Le quantit‡ , le caratterizzazioni biochimiche o molecolari, il numero di cloni da generare sono in relazione alle richieste del committente. Lí antigene puÚ essere generato in house dallí unit‡ Protein Factory, a partire dal cDNA

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