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65-9553-0 Kit per 20 test Pagina 1 di 17 10-6916-0 Rev 1 Giugno 2016 Sistema DPP® Zika IgM/IgG PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO AD ESCLUSIVO USO PROFESSIONALE CONSERVAZIONE: conservare a temperatura compresa tra 2 °C e 30 °C (36 °F e 86 °F) Prima di usare il prodotto, leggere per intero il presente foglietto illustrativo. Ai fini dell’accuratezza dei risultati dell’analisi, attenersi rigorosamente alle istruzioni. NOME E USO PREVISTO Il sistema DPP® Zika IgM/IgG di Chembio è un test rapido immunocromatografico monouso per il rilevamento e la differenziazione degli anticorpi immunoglobulina M (IgM) e immunoglobulina G (IgG) diretti contro il virus Zika in campioni di sangue intero prelevati mediante puntura del polpastrello, sangue intero venoso in EDTA, siero o plasma in EDTA. Il sistema DPP Zika IgM/IgG di Chembio è previsto per l’uso in ambiti clinici e per l’analisi decentrata dei pazienti, come ausilio nella diagnosi dell’infezione da virus Zika (ZIKV) solo nei pazienti che esibiscono sintomi clinici coerenti con l’infezione da Zika, che di recente si sono recati in particolari aree geografiche durante un periodo di trasmissione attiva del virus Zika e/o in presenza di altri criteri epidemiologici che rendano indicata l’analisi per il rilevamento del virus Zika nel contesto di un’azione sanitaria pubblica. Questa analisi fornisce un risultato preliminare. I risultati di questa analisi non possono essere usati come base esclusiva per le decisioni riguardanti la gestione del paziente; devono infatti essere abbinati a osservazioni cliniche, anamnesi del paziente, informazioni epidemiologiche e altri reperti di laboratorio. I risultati devono essere confermati in base alle attuali linee guida stabilite dai CDC o vigenti a livello locale in merito alla diagnosi di questa condizione patologica. RIASSUNTO E SPIEGAZIONE Il ZIKV è un virus a RNA facente parte della famiglia delle Flaviviridae, genere Flavivirus. 1 Viene trasmesso all’uomo dalle zanzare appartenenti al genere Aedes. 2 Il ZIKV fu inizialmente isolato nel 1947 nella Foresta Zika dell’Uganda da un esemplare infetto di macaco reso; i primi casi umani segnalati furono riscontrati in Uganda e nella Repubblica Unita di Tanzania nel 1952. 3 Da allora, sporadiche epidemie di ZIKV sono state documentate in molte zone dell’Africa e del sud-est asiatico. Il primo caso di diffusione di ZIKV al di fuori dell’Asia o dell’Africa fu riscontrato nel 2007, quando si manifestò una grande epidemia sull’isola di Yap, nell’oceano Pacifico (Stati Federali di Micronesia). 4 Nel 2013 e 2014, una grave epidemia di ZIKV associata a complicazioni cliniche è stata segnalata nella Polinesia Francese. 5 Nel maggio 2015 sono stati segnalati in Brasile i primi casi di infezione da ZIKV contratti localmente nelle Americhe. 6,7 Nei primi mesi del 2016, il ZIKV si è diffuso in altri Paesi dell’America del Sud, dell’America Centrale, in Messico e nei Caraibi, inclusi i territori statunitensi del Portorico e delle Isole Vergini. 7 Il ZIKV è tipicamente associato a condizioni patologiche umane che variano da infezioni subcliniche a lievi stati simil-influenzali; in tempi più recenti, tuttavia, l’infezione da ZIKV è stata associata a casi gravi, talvolta fatali, di sindrome di Guillain-Barré. 8 Il virus è stato inoltre associato alla microcefalia e ad altri difetti congeniti nella prole di madri infette. 9 Sebbene la via di trasmissione principale del ZIKV sembri essere la puntura di zanzara, sono stati segnalati anche casi di trasmissione per via sessuale 10 e di possibile trasmissione tramite trasfusione. 11 PRINCIPI BIOLOGICI DEL TEST Il sistema DPP Zika IgM/IgG di Chembio è composto dal dispositivo di analisi DPP Zika e dall’unità DPP Micro Reader™. Il dispositivo si avvale della tecnologia brevettata DPP (Dual Path Platform, piattaforma a doppio percorso) di Chembio e consta di un percorso per il campione che prevede la distribuzione del campione secondo due percorsi, che includono aree di rilevamento degli anticorpi TEST (T) e di controllo CONTROL (C) all’interno di ciascuna finestra di lettura del dispositivo stesso. Le strisce di reazione superiore (T1) e inferiore (T2) eseguono, rispettivamente, il rilevamento degli anticorpi IgM e IgG diretti contro il ZIKV. Ai fini dell’analisi, il campione viene diluito con tampone e applicato al pozzetto 1 SAMPLE+BUFFER (CAMPIONE+TAMPONE) del dispositivo di analisi DPP Zika. Il campione fluisce lungo la membrana del rispettivo percorso e raggiunge l’area TEST (T) delle strisce reattive, sulle quali sono immobilizzati antigeni NS1 del virus Zika e proteina A. Se nel campione sono presenti anticorpi anti-Zika, essi si legano istantaneamente agli antigeni NS1 immobilizzati nelle aree TEST (T1) e (T2), mentre gli anticorpi aspecifici si legano alla proteina A nell’area CONTROL (C). L’applicazione corretta del campione è indicata dalla dissoluzione delle linee di colorante solubile nelle aree TEST e CONTROL. Cinque minuti dopo l’aggiunta del campione, si aggiungono al pozzetto 2 BUFFER (TAMPONE) 250 µl di tampone DPP IgM/IgG. Il tampone idrata il coniugato colorato essiccato legante l’anticorpo, che migra alle aree TEST. I risultati dell’analisi vengono interpretati dall’unità DPP Micro Reader
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SistemaDPP®ZikaIgM/IgGPERUSODIAGNOSTICOINVITRO
ADESCLUSIVOUSOPROFESSIONALECONSERVAZIONE:conservareatemperaturacompresatra2°Ce30°C(36°Fe86°F)
Prima di usare il prodotto, leggere per intero il presente foglietto illustrativo. Ai fini dell’accuratezza dei risultati dell’analisi,attenersirigorosamentealleistruzioni.NOMEEUSOPREVISTOIlsistemaDPP®ZikaIgM/IgGdiChembioèuntestrapidoimmunocromatograficomonousoperilrilevamentoeladifferenziazionedeglianticorpiimmunoglobulinaM(IgM)eimmunoglobulinaG(IgG)diretticontroilvirusZikaincampionidisangueinteroprelevatimediantepunturadelpolpastrello,sangueinterovenosoinEDTA,sierooplasmainEDTA.IlsistemaDPPZikaIgM/IgGdiChembioèprevistoperl’usoinambiticlinicieperl’analisidecentratadeipazienti,comeausilionelladiagnosidell’infezionedavirusZika(ZIKV)solo nei pazienti che esibiscono sintomi clinici coerenti con l’infezione da Zika, che di recente si sono recati in particolari areegeografiche durante un periodo di trasmissione attiva del virus Zika e/o in presenza di altri criteri epidemiologici che rendanoindicata l’analisi per il rilevamentodel virus Zikanel contestodi un’azione sanitaria pubblica.Questa analisi fornisceun risultatopreliminare. I risultati di questa analisi nonpossono essere usati comebase esclusiva per le decisioni riguardanti la gestionedelpaziente;devonoinfattiessereabbinatiaosservazionicliniche,anamnesidelpaziente,informazioniepidemiologicheealtrirepertidilaboratorio.IrisultatidevonoessereconfermatiinbasealleattualilineeguidastabilitedaiCDCovigentialivellolocaleinmeritoalladiagnosidiquestacondizionepatologica.RIASSUNTOESPIEGAZIONEIl ZIKVèunvirusaRNA facentepartedella famigliadelleFlaviviridae, genereFlavivirus.1Viene trasmessoall’uomodalle zanzareappartenenti al genereAedes.2 Il ZIKV fu inizialmente isolato nel 1947 nella Foresta Zika dell’Uganda da un esemplare infetto dimacaco reso; i primi casi umani segnalati furono riscontrati inUgandaenellaRepubblicaUnitadi Tanzanianel 1952.3Da allora,sporadicheepidemiediZIKVsonostatedocumentate inmoltezonedell’Africaedelsud-estasiatico. IlprimocasodidiffusionediZIKValdifuoridell’Asiaodell’Africafuriscontratonel2007,quandosimanifestòunagrandeepidemiasull’isoladiYap,nell’oceanoPacifico(StatiFederalidiMicronesia).4Nel 2013 e 2014, una grave epidemia di ZIKV associata a complicazioni cliniche è stata segnalata nella Polinesia Francese.5 Nelmaggio2015sonostatisegnalatiinBrasileiprimicasidiinfezionedaZIKVcontrattilocalmentenelleAmeriche.6,7Neiprimimesidel2016, il ZIKV si è diffuso in altri Paesi dell’America del Sud, dell’America Centrale, in Messico e nei Caraibi, inclusi i territoristatunitensi del Portorico e delle Isole Vergini.7 Il ZIKV è tipicamente associato a condizioni patologiche umane che variano dainfezioni subcliniche a lievi stati simil-influenzali; in tempi più recenti, tuttavia, l’infezione da ZIKV è stata associata a casi gravi,talvoltafatali,disindromediGuillain-Barré.8Ilvirusèstatoinoltreassociatoallamicrocefaliaeadaltridifetticongenitinellaproledimadriinfette.9SebbenelaviaditrasmissioneprincipaledelZIKVsembriesserelapunturadizanzara,sonostatisegnalatianchecasiditrasmissioneperviasessuale10edipossibiletrasmissionetramitetrasfusione.11 PRINCIPIBIOLOGICIDELTESTIlsistemaDPPZikaIgM/IgGdiChembioècompostodaldispositivodianalisiDPPZikaedall’unitàDPPMicroReader™.IldispositivosiavvaledellatecnologiabrevettataDPP(DualPathPlatform,piattaformaadoppiopercorso)diChembioeconstadiunpercorsoperilcampionecheprevedeladistribuzionedelcampionesecondoduepercorsi,cheincludonoareedirilevamentodeglianticorpiTEST(T)edicontrolloCONTROL(C)all’internodiciascunafinestradiletturadeldispositivostesso.Lestriscedireazionesuperiore(T1)einferiore(T2)eseguono,rispettivamente,ilrilevamentodeglianticorpiIgMeIgGdiretticontroilZIKV.Aifinidell’analisi,ilcampionevienediluitocontamponeeapplicatoalpozzetto1SAMPLE+BUFFER(CAMPIONE+TAMPONE)deldispositivodianalisiDPPZika.Ilcampionefluiscelungolamembranadelrispettivopercorsoeraggiungel’areaTEST(T)dellestriscereattive,sullequalisonoimmobilizzatiantigeniNS1del virus Zika e proteina A. Se nel campione sono presenti anticorpi anti-Zika, essi si legano istantaneamente agli antigeni NS1immobilizzatinelleareeTEST(T1)e(T2),mentreglianticorpiaspecificisileganoallaproteinaAnell’areaCONTROL(C).L’applicazionecorrettadelcampioneè indicatadalladissoluzionedelle lineedicolorantesolubilenelleareeTESTeCONTROL.Cinqueminutidopol’aggiuntadelcampione,siaggiungonoalpozzetto2BUFFER(TAMPONE)250µlditamponeDPPIgM/IgG.Iltamponeidratailconiugatocoloratoessiccatolegantel’anticorpo,chemigraalleareeTEST.Irisultatidell’analisivengonointerpretatidall’unitàDPPMicroReader
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10-15minutidopo l’aggiuntadel tamponealpozzetto2BUFFER(TAMPONE).L’unitàDPPMicroReaderdiChembioèunmisuratoredella riflettanza da utilizzare con il sistema DPP Zika IgM/IgG di Chembio. L’unità DPP Micro Reader è uno strumento portatilealimentatoabatteria;essousaalgoritmispecificiperlevarieanalisialloscopodiinterpretareleintensitàdellariflettanzadellelineedianalisiedicontrolloestabilirelapresenzaol’assenzadeglianticorpianti-Zikanelcampione.Ilmisuratoreverificalapresenzadellalineadicontrolloemisural’intensitàdelcoloreincorrispondenzadiciascunaposizionedellelineedianalisi;entro3secondicirca,interpretairisultatiinbaseaunalgoritmocheincludeivaloridicut-offspecificiperl’analisiesegnalaunrisultatopositivo,negativoononvalido,unitamenteaunvalorenumericoperentrambelelineedianalisiIgMeIgG.Irisultativengonovisualizzatisuundisplayacristalliliquidi(LCD)a14segmentisituatonellapartesuperioredell’unità.L’unitàDPPMicroReaderèstataprogettatainmododaridurrealminimol’errore umano imputabile alla soggettività dell’interpretazione; i risultati non possono pertanto essere interpretati visivamentedall’operatore. L’unità DPP Micro Reader non richiede manutenzione, non è configurabile dall’operatore ed è dotata di un unicopulsantemultifunzione. MATERIALI IN DOTAZIONE Ciascun kit contiene l’occorrente per l’esecuzione di 20 test. 20 dispositivi di analisi DPP Zika confezionati singolarmente; ciascuna confezione contiene:
• 1 dispositivo di analisi DPP Zika • 1 bustina igroscopica
20 loop per campione monouso da 10 µl – AZZURRI 20 fiale/provette per campione 20 pipette di trasferimento (100 µl) 1 flacone di tampone DPP IgM/IgG – Tappo azzurro
• 9 ml; contiene fosfato di sodio, cloruro di sodio, EDTA, Tween 20, siero di pollo, urea, gentamicina, streptomicina e azoturo di sodio come conservante
1 foglietto illustrativo per il sistema DPP Zika IgM/IgG ACCESSORI DISPONIBILI E NECESSARI Unità DPP Micro Reader di Chembio per DPP Zika IgM/IgG (n. di cat. 70-1049-0) Ciascun kit include i seguenti articoli.
• 1 unità DPP Micro Reader di Chembio (include 3 batterie) (REF: 70-1001-0) • 15 batterie aggiuntive al litio ECR2031 3 V: CR2032 (3 V / 230 mAh) • 1 supporto da utilizzare con il dispositivo di analisi DPP • 1 adattatore di alimentazione USB (5 V / 1000 mA) • 1 certificato di analisi • 1 scheda RFID da utilizzare con il sistema DPP Zika IgM/IgG
In caso di problemi o per chiarimenti, consultare la guida per l’uso dell’unità DPP MICRO READER o rivolgersi al servizio clienti di Chembio Diagnostic Systems al numero telefonico +1 631 924 1135. MATERIALI NECESSARI MA NON IN DOTAZIONE
• Cronografo, orologio o altro marcatempo • Un pipettatore in grado di erogare 10-100 µl di campione può essere usato al posto dei loop per il campione monouso da
10 µl o delle pipette di trasferimento da 100 µl forniti nel kit (per i campioni di sangue intero venoso, siero o plasma) • Guanti monouso • Garza sterile (per i campioni di sangue intero prelevati mediante puntura del polpastrello) • Salviette antisettiche • Contenitore per lo smaltimento di materiale biologico pericoloso • Dispositivi di prelievo (per i campioni di sangue intero venoso o di siero/plasma)
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AVVERTENZEPerusodiagnosticoINVITRO1. Prima di usare questo saggio, leggere per intero il presente foglietto illustrativo. Ai fini dell’accuratezza dei risultati, è
importanteattenersirigorosamentealleistruzioni.2. L’uso di questo kit di analisi con tipi di campioni diversi da quelli specificamente approvati per l’uso con questo dispositivo
potrebbedarluogoarisultatiinaccurati.3. L’analisideveessereeseguitaaunatemperaturacompresatra18°Ce30°C(tra64°Fe86°F).Seildispositivovieneconservato
refrigerato,assicurarsidiriportarelaconfezioneeitamponiallatemperaturadiesercizioprimadieseguirel’analisi.4. Questaanalisinonèstatavalutataperloscreeningdineonati,dicampionidisanguedacordoneombelicaleodidonatoridi
sangueoplasma. PRECAUZIONIPRECAUZIONIDISICUREZZA1. Icampionipossonoessereinfettivi.Durantel’esecuzionediquestaanalisi,rispettareleprecauzioniuniversali.12,132. Adottareleprecauzionidiroutinedellaboratorio.Evitaredimangiare,bereofumarenell’areaincuisimaneggianocampionie
reagentidelkit.Evitareilcontattoconmani,occhioboccaduranteilprelievoel’analisideicampioni.3. Durantelamanipolazionedeicampionideipazienti,indossareindumentiprotettivicomecamicidalaboratorio,guantimonouso
eprotezioneoculare.Dopoavermanipolatoicampionieireagentidelkit,lavarsibenelemani.4. Smaltiretuttiicampionieimaterialiusatinellaproceduradianalisiinuncontenitoreperrifiutibiologicipericolosi.Lelancette,
primadello smaltimento,devonoessere collocate inun contenitore imperforabile. Imetodidimanipolazionee smaltimentocorrettidevonoessereformulatinelrispettodellenormevigentialivellolocale.14
PRECAUZIONID’USO1. Selabustinaigroscopicaèassente,NONUSAREildispositivodianalisi.Gettarloeusarneunonuovo.2. Nonusareildispositivodianalisiseconfezioneèstataperforata.3. Tuttiidispositividianalisisonoesclusivamentemonouso.4. Non utilizzare l’analisi oltre la data di scadenza indicata sulla confezione. Controllare sempre la data di scadenza prima di
eseguirel’analisi.5. Nonmischiarereagentiprovenientidakitconnumeridilottodiversi.CONSERVAZIONEESTABILITÀI dispositivi di analisiDPP Zikadevonoessere conservati in confezione sigillata a temperatura compresa tra 2°C e 30°C (36°F e86°F). Non congelare. Aprire la confezione solo quando si è pronti a eseguire l’analisi. Se conservati secondo le indicazioni, idispositividianalisisonostabilifinoalladatadiscadenzariportatasullaconfezione.IltamponeDPPIgM/IgGdeveessereconservatonelcontenitoreoriginaleatemperaturacompresatra2°Ce30°C(36°Fe86°F).
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PRELIEVODEICAMPIONIIl sistemaDPP Zika IgM/IgG di Chembio può essere usato su campioni di sangue intero prelevato da polpastrello, sangue interovenosoinEDTA,sierooplasmainEDTA.1. Trasferire5gocce(150µl)ditamponeDPPIgM/IgG(tappo
azzurro)nellaprovettapercampionefornita.
2. SANGUEINTEROPRELEVATODAPOLPASTRELLOPrepararsi a eseguire la procedura di prelievo del sanguemediantepunturadelpolpastrello.Pulireilpolpastrellodelpaziente con una salvietta antisettica. Far asciugare bene ilpolpastrellootamponareconunagarzasterile.
Conunalancettasterile,pungerelapelleincorrispondenzadel centro del polpastrello e asciugare la prima goccia disangueconlagarzasterile.Evitaredipremerelapuntadeldito per accelerare il sanguinamento, perché questaoperazione potrebbe provocare la diluizione del sangueconunaquantitàeccessivadifluidotissutale.
Prelevare il campione dalla seconda goccia, toccando lagocciadisangueconillooppercampioneindotazionefinoariempirlocomemostratoinFigura1.
3. Immergere il loop per campione pieno nel tamponeall’internodellaprovettapercampioneemescolarebene.Eseguire immediatamente l’analisi in base alle istruzionifornitenellasezioneProceduradianalisi.
SANGUEINTEROVENOSOPrelevare il sangue seguendo la procedura di laboratorio relativa al prelievo di sangue venoso. Raccogliere il campione in unaprovettacontenenteEDTA.Primadiprocederealcampionamento,assicurarsichelaprovettadisanguesiabenmescolata.Immergereil looppercampionenelsangueelasciarechesiriempia; inalternativa,usareunapipettadi laboratorioperprelevare10µldisangue.Pipettareilcampioneoinserireillooppercampionepienonellaprovettapercampioneemescolarebene.Eseguireimmediatamentel’analisiinbasealleistruzionifornitenellasezioneProceduradianalisi.Se l’analisi viene effettuata il giorno stesso, il sangue intero venoso può essere conservato a temperatura ambiente. Primadell’analisi, il sangue intero venoso può essere conservato per unmassimo di 3 giorni a temperatura compresa tra 2 °C e 8°C(36°Fe46°F).NON CONGELARE IL SANGUE INTERO. Lasciare che i campioni refrigerati si stabilizzino a temperatura ambiente e mescolarlidelicatamenteprimadieseguirel’analisi.
Tampone di corsa 5x
Figura1
Loop per campione riempito
correttamente
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SIEROOPLASMAPrelevareilsangueseguendolaproceduradilaboratoriorelativaalprelievodicampionidisierooplasma.Raccogliereilcampioneinunaprovettanoncontenentealcunagenteanticoagulante(nelcasodelsiero)oppureinunaprovettacontenenteEDTA(nelcasodelplasma). Raccogliere i campioni in un contenitore pulito secondo le procedure standard di laboratorio. Prima di procedere alcampionamento,assicurarsichelaprovettadiplasmasiabenmescolata.Immergereil looppercampionenelsangueelasciarechesiriempia; inalternativa,usareunapipettadi laboratorioperprelevare10µldisangue.Pipettareilcampioneoinserireillooppercampionepienonellaprovettapercampioneemescolarebene.Eseguireimmediatamentel’analisiinbasealleistruzionifornitenellasezioneProceduradianalisi.Icampionidisieroeplasmapossonoessereanalizzatisubitodopoilprelievo.Seicampioninonvengonoanalizzatiimmediatamentedopoilprelievo,conservarliinfrigoriferoaunatemperaturacompresatra2°Ce8°C(36°Fe46°F).Questicampionidevonoessereanalizzati entro 3 giorni dal prelievo. Se non vengono analizzati entro 3 giorni dal prelievo, i campioni di siero o plasmadevonoesserecongelatiaunatemperaturadi-20°C(-4°F)oinferiore.SPEDIZIONEDEICAMPIONIPer spedire i campioni, sistemarli in confezioni conformi alle norme che regolano il trasporto di agenti eziologici. I campioni disangueinterovenosoeplasmadevonoesserespeditirefrigeratimedianteborsedighiaccio(“siberini”)oghiaccioumido.PROCEDURADIANALISITutti i componenti del sistemaDPP Zika IgM/IgG di Chembio sono forniti pronti per l’uso. Seguire le istruzioni in base a quantoindicato.Se il campionee/o i componentidelkit sonostati refrigerati,estrarlidal frigoriferoe lasciarli stabilizzarea temperaturacompresatra18°Ce30°C(64°Fe86°F)primadell’analisi.
1. EstrarreildispositivodianalisiDPPZikadiChembiodallasuaconfezioneeporlosuunasuperficiepiana(nonènecessarioestrarrelabustinaigroscopicadallaconfezione).Nota–Selabustina igroscopica è assente, NON USARE il dispositivo dianalisi;gettarloeutilizzarneunonuovo.Etichettare il dispositivo di analisi con l’ID o il numeroidentificativodelpaziente.Nota – Il dispositivo di analisi DPP presenta 2 finestre dianalisi.Incorrispondenzadellafinestrasuperiorehaluogoilrilevamento degli anticorpi IgM anti-Zika, mentre incorrispondenza della finestra inferiore ha luogo ilrilevamentodeglianticorpiIgGanti-Zika.In ciascuna delle finestre di analisi sono presenti 2 lineecolorate:perleIgMunaèblu,l’altraèverde,mentreperleIgG,unaègialla,l’altraèverde.
Finestradianalisi-RilevamentodelleIgM
Finestradianalisi-RilevamentodelleIgG
Riportarel’IDdelpazientequi
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2.
Se si usa un campione da polpastrello, con la pipetta ditrasferimentomescolare il campione e trasferire 100 µl dellamiscela campione/buffer dalla provetta per campione alpozzetto 1 SAMPLE+BUFFER (CAMPIONE+TAMPONE).Verificarechenellapipettanonvisianobolled’aria.
Sesiusanocampionidisangueintero,sierooplasma,usareunapipettadalaboratoriopertrasferire100µldellamiscelacampione/bufferdallaprovettapercampionealpozzetto1SAMPLE+BUFFER(CAMPIONE+TAMPONE).
3.
Attendere5minuti.Lelineecolorateblu(IgM)egialla(IgG)devono scomparire dalle finestre rettangolari TEST eCONTROL. In caso contrario, NON USARE il dispositivo dianalisi;gettarloeutilizzarneunonuovo.Lalineadicoloreverdepuòscomparireomeno.Capovolgere il flacone di tampone DPP IgM/IgG (tappoazzurro)etenerloinposizioneVERTICALE(noninclinata)sulpozzetto 2 BUFFER (TAMPONE). Aggiungere lentamente 8gocce(250µl)ditampone,unagocciaallavolta,alpozzetto2BUFFER (TAMPONE).Entro2-3minuti sidovrebbenotareunflussodicolorerossastrolungolastrisciareattiva.Leggere i risultati dell’analisi mediante l’unità DPP MicroReader 10-15minuti dopo l’aggiunta del tampone DPPIgM/IgGalpozzetto2BUFFER(TAMPONE).
Pozzetto2
100µldicampione+tampone
100µldicampione+tampone
Pozzetto1
Pozzetto1
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4.
Accertarsi che il misuratore e i componenti siano puliti. Asportare ogni traccia di polvere o impurità dalla finestra dirilevamentoallabasedell’unità.Inserirel’unitàDPPMicroReadernelrelativosupporto,comeillustrato.
a.
Almomento indicato per la lettura dei risultati dell’analisi,collocare il misuratore e il relativo supporto sulla finestraSUPERIORE (IgM) del dispositivo di analisi e premere ilpulsantemultifunzione.IldisplayvisualizzaON(ACCESO).
b.
Premere nuovamente il pulsante multifunzione; il displayvisualizzaRFIDCollocarelaschedaRFIDspecificaperl’analisiDPP Zika IgM/IgG sopra l’unità DPP Micro Reader eattendere l’emissione del segnale acustico. Rimuovere lascheda;ildisplayvisualizzaTEST(ANALISI).
c.
Premere il pulsante multifunzione; il display visualizza RUN (ESECUZIONE). Dopo 3 secondi circa, il display visualizza unvalorenumericoperleIgM;prenderenotadelrisultatodelleIgM(consultarelasezioneINTERPRETAZIONEDEIRISULTATIDIANALISI).SpostareilmisuratoresullafinestraINFERIORE(IgG).
d.
Premerenuovamenteilpulsantemultifunzione;ildisplayvisualizzaRFIDCollocarelaschedaRFIDspecificaperl’analisiDPPZika IgM/IgGsopra l’unitàDPPMicroReadereattendere l’emissionedel segnaleacusticoRimuovere la scheda; ildisplayvisualizzaTEST(ANALISI).Premere il pulsante multifunzione; il display visualizza RUN (ESECUZIONE). Dopo 3 secondi circa, il display visualizza unvalorenumericoperleIgG;prenderenotadelrisultatodelleIgG(consultarelasezioneINTERPRETAZIONEDEIRISULTATIDIANALISI).Alterminedellaregistrazionemanualedeidati,ilmisuratoresispegneautomaticamentedopo50secondicircadiinattività.L’unità DPP Micro Readernon è dotata di un dispositivo di spegnimento dedicato o di un dispositivo che consenta dirichiamareirisultatidell’ultimaanalisi.
NOTA–Smaltireillooppercampione,ildispositivodianalisietuttiglialtrimaterialiusatiperl’analisiinuncontenitoreperrifiutibiologici
UnitàDPPMicroReader
Apertureperipozzetti1e2
Supportopermisuratore
FinestradiletturadeirisultatidelleIgM
UnitàMicroReaderconsupporto
FinestradiletturadeirisultatidelleIgG
Pulsantemultifunzione
Display
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CONTROLLODIQUALITÀFunzionedicontrolloincorporataLalineadicontrollofungedacontrollointernoincorporatoeconfermal’aggiuntadelcampioneelacorrettaesecuzionedell’analisi.Ilmisuratoreverifica lapresenzadella lineadicontrolloemisura l’intensitàdelcolore incorrispondenzadientrambe leposizionidelle linee di analisi; interpreta i risultati in base a un algoritmo che include i valori di cut-off specifici per l’analisi e segnala unrisultatopositivo,negativoononvalidodopocirca3secondi.(ConsultarelasezioneInterpretazionedeirisultatidianalisi)
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INTERPRETAZIONEDEIRISULTATIDIANALISI
QUESTORISULTATOSCORRERÀSULDISPLAYDELMISURATORE
NONREATTIVOSe i valori numerici visualizzati per ENTRAMBE, IgMe IgG, sonouguali o inferiori a 25, ilrisultato dell’analisi indica un campione NON REATTIVO. Un risultato di analisi NONREATTIVOsignificachenelcampionenonsonostatirilevatiglianticorpianti-Zika.Ilrisultatodianalisiè interpretatocomeNEGATIVO;ciònonesclude,tuttavia, lapossibileinfezione da virus Zika. Se si sospetta l’infezione da virus Zika, un risultato negativo puòindicare l’analisi di un campione prelevato nel corso della fase acuta. Analizzare uncampioneinfasediconvalescenzadopo5-7giorni.
REATTIVOPERIgMSe il valore numerico visualizzato per le IgM è superiore a 25, il risultato di analisi delcampione in questione indica un risultato REATTIVO per gli anticorpi IgM. Un risultatoREATTIVOnellafinestradianalisiIgMsignificaSOLOchenelcampionesonostatirilevatiglianticorpiIgManti-Zika.IlpazienteèritenutoPRESUNTOPOSITIVOperl’infezionedavirusZika, dalmomento cheè stata identificata l’evidenza sierologicadi unapossibile recenteinfezionedavirusZika.La CONFERMA della presenza degli anticorpi IgM anti-Zika nei campioni presunti positivirichiedeulteriorianalisiadoperadilaboratoriqualificati,inbaseall’algoritmofornitodaiCDC.
REATTIVOPERIgGSe il valore numerico visualizzato per le IgG è superiore a 25, il risultato di analisi delcampione in questione indica un risultato REATTIVO per gli anticorpi IgG. Un risultatoREATTIVOnellafinestradianalisiIgGsignificaSOLOchenelcampionesonostatirilevatiglianticorpiIgGanti-Zika.SeilrisultatodelleIgGèREATTIVOeilrisultatodelleIgMènonreattivo,èpossibilechesiastata eseguita l’analisi di un campione prelevato in fase di convalescenza oppure che ilsoggetto sia affetto da un’infezione da Zika secondaria. Inoltre, questo risultato puòriflettere una precedente vaccinazione contro un flavivirus (ad esempio, il virus dellafebbregialla),oppureunaprecedenteoconcomitanteinfezioneconarboviruscorrelati(adesempio,ivirusDengue,Chikungunya,dellafebbregialla),inclusoilvirusZika.Sono richieste ulteriori analisi ad opera di laboratori qualificati per il rilevamentodi altriarbovirus,inbaseall’algoritmofornitodaiCDC.
REATTIVOPERIgMeIgGUn risultato di analisi REATTIVO per le IgM e REATTIVO per le IgG significa che nelcampionesonostati rilevatientrambigli anticorpi IgMe IgGdiretti contro il virusZika. IlpazienteèritenutoPRESUNTOPOSITIVOper l’infezionedavirusZika,dalmomentocheèstataidentificatal’evidenzasierologicadiunapossibileinfezionedavirusZika.
LaCONFERMAdellapresenzadeglianticorpiIgMeIgGanti-Zikaneicampionipresuntipositivirichiede ulteriori analisi ad opera di laboratori qualificati, in base all’algoritmo fornito daiCDC.
NONVALIDOSe il misuratore restituisce un risultato NON VALIDO per le IgM OPPURE per le IgG, irisultati dell’intera analisi sono consideratiNONVALIDI.Un’analisiNONVALIDAnon puòesseresottopostaainterpretazione.Siraccomandadiripeterel’analisiNONVALIDAconunnuovodispositivo.
IgM x ≤25/ NR
IgG x ≤25/ NR
IgM x >25 / R
INV
IgG x >25 / R
IgG x >25 / R
IgG x >25 / R
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CARATTERISTICHEDELLEPRESTAZIONISENSIBILITÀSensibilitàalleIgManti-ZikaLa sensibilità del sistema DPP Zika IgM/IgG per quanto riguarda il rilevamento dei campioni positivi per le IgM è stata valutatausando16campioniottenutidaindividuiresidentiinunaregioneendemicainteressatadaepidemiedaarbovirus(specificamente,MatoGrosso,Brasile)e3campioniottenutidaunsetdi50campionidivirusdelNilooccidentalefornitidaDiscoveryLifeSciences(LosOsos,California,USA).Questi19campionieranopositiviper le IgMsecondounmetodoper le IgMEIAconmarcaturaCE.Diquesti campioni, 17 sono risultati positivi per le IgM anche all’analisi con il sistema DPP Zika IgM/IgG. La sensibilità relativa delsistemaDPPZikaIgM/IgGperquantoriguardaleIgM,calcolatainconfrontoalmetodoperleIgMEIAconmarcaturaCE,èrisultatadell’89,5%(17/19).VederelaTabella1quisotto.Tabella1–SensibilitàrelativadelsistemaDPPZikaIgM/IgGperleIgM
Campioni PositiviconDPPZikaperleIgM/PositiviconmetodoperIgMEIAconmarcaturaCE
Campionicliniciprovenientidaunaregioneendemicainteressatadaepidemiediarbovirus:MatoGrosso,Brasile
14/16(87,5%)
VirusdelNilooccidentale,infezionesecondariadaZika 3/3(100%)Totale 17/19(89,5%)SensibilitàalleIgGanti-ZikaLasensibilitàdelsistemaDPPZikaIgM/IgGperquantoriguardailrilevamentodeicampionipositiviperleIgGèstatavalutatausando46campioniottenutidaindividuiresidentiinunaregioneendemicainteressatadaepidemiediarbovirus(specificamente,ilBrasile).Dei46campionipositiviperleIgGconilmetodoperleIgGEIAconmarcaturaCE,ilsistemaDPPZikaIgM/IgGhadatoasuavoltarisultatipositiviperleIgGin45casi.LasensibilitàrelativadelsistemaDPPZikaIgM/IgGperquantoriguardaleIgG,calcolatainconfrontoalmetodoperleIgGEIAconmarcaturaCE,èrisultatadel97,8%(45/46).VederelaTabella2quisotto.Tabella2–SensibilitàrelativadelsistemaDPPZikaIgM/IgGperleIgG
Campioni PositiviconDPPZikaperleIgG/PositiviconmetodoperIgGEIAconmarcaturaCE
Campionicliniciprovenientidaunaregioneendemicainteressatadaepidemiediarbovirus:MatoGrosso,Brasile
45/46(97,8%)
SENSIBILITÀANALITICAConilsaggioDPPIgG/IgMZikaèstatovalutatountotaledi65campionida35casiconfermatidi infezionedavirusZika.Per11diquesti35casièstataconfermatal’infezionedavirusZikamedianteRTPCReirelativicampionisonostatianalizzaticonilsistemaDPPIgG/IgMZikaaRiodeJaneiro,Brasile(UniversidadeFederaldoRiodeJaneiro);3campionisonostatiottenutidaunfornitorequalificatochehaconfermatomedianteRTPCRlostatodiinfezionedaZikadeicampioniottenutiinColombia,mentreirestanti21casisonostatiottenutidaunfornitorequalificato(BocaBiolistics)chehaconfermatomedianteunmetodoEIAper il rilevamentodelleIgM/IgGanti-ZikalostatodiinfezionedavirusZikadeicampioniottenutinellaRepubblicaDominicana.Tabella3.1–CasidiinfezionedaZikaconfermati,BrasilePositivo(POS),Negativo(NEG),NonTestato(NT).
N.caso
Evento
PCR
DPPZikaIgM/IgG
Cut-off=25 Interpretazione
IgM IgG Caso7 Casodimicrocefalia1 POS 9(NEG) 88(POS) Positivo
Caso8 Casodimicrocefalia1 POS 8(NEG) 282(POS) Positivo
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Caso4 Screeningdonneincinte POS 89(POS) 216(POS) Positivo
Caso3 Duranteisintomi POS 25(POS) 7(NEG) Positivo
Caso10 Datadelprelievo POS 40(POS) 64(POS) Positivo
Caso11 Datadelprelievo POS 4(NEG) 31(POS) Positivo
Caso52 12giornidopolacomparsadeisintomi POS2 143(POS) 239(POS) Positivo
Caso62 6giornidopolatrasfusione POS 9(NEG) 32(POS) Positivo
30giornidopolatrasfusione Neg 33(POS) 335(POS)
Caso1 Duranteisintomi POS 5(NEG) 6(NEG) Positivo
33giornidopolacomparsadeisintomi Neg 52(POS) 241(POS)
72giornidopolacomparsadeisintomi Neg 18(NEG) 146(POS)
Caso2 5giornidopolacomparsadeisintomi POS 58(POS) 167(POS) Positivo
12giornidopolacomparsadeisintomi NT 52(POS) 215(POS)
19giornidopolacomparsadeisintomi NT 30(POS) 244(POS)
26giornidopolacomparsadeisintomi NT 25(NEG) 217(POS)
Caso9 Datadelprelievo POS 5(NEG) 19(NEG) Positivo
4giornidopoilprelievodelcampione NT 5(NEG) 36(POS)
11giornidopoilprelievodelcampione NT 5(NEG) 51(POS)
26giornidopoilprelievodelcampione NT 2(NEG) 12(NEG)1Matricedelcampione,sanguedacordoneombelicaleprovenientedallamadre;bambinonatoaffettodamicrocefalia.2IlCaso5eraunsoggettochehadonatosanguealCaso6,cheèquindidiventatosintomatico.Dopoladiagnosi,ildonatoredisangueoriginale(Caso5)èstatonuovamenteconvocatoperleanalisiedèrisultatopositivoperilvirusZikamediantePCRsuurina12giornidopolacomparsadeisintomi.
Nel contestodegli 11 casi testati inBrasile, 20 campioni sono stati analizzati usando il sistemaDPPZika IgM/IgGdi Chembio. Suquesti20campioni,16hannoesibito reattivitànell’ambitodel sistemaDPPZika IgG.Deiquattrocampioninonreattiviper le IgGmedianteDPPZika:
uno era un campione ottenuto da un paziente sintomatico e ha dato un risultato reattivo per le IgM all’analisi con ilsistemaDPPZikaIgM/IgGunoerauncampioneottenutodaunpazientesintomaticoehadatounrisultatononreattivoperleIgMall’analisiconilsistemaDPPZikaIgM/IgG;ulterioricampioniprelevatiindatesuccessivesonorisultatireattiviperleIgGduecampioniprovenivanodaunpazienterisultatononreattivoperleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGalladatadelprelievoinizialedelcampioneealladatadelprelievofinaledelcampione(26);prelieviematiciinserieeseguiti4e11giornidopoilprelievoinizialesonorisultatireattiviperleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG
In9campionisu20sonostatiosservatirisultatireattiviall’analisiDPPZikaIgM.Degli11campioninonreattiviperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG:
due(Casi7,8)eranocampionidadueneonatiaffettidamicrocefalia;essendoleIgMmolecoledidimensioniconsiderevoli,essepossonononriuscireadattraversarelabarrieraplacentaredandounrisultatononreattivoperleIgMall’analisiconilsistemaDPPZikaIgM/IgGuno(Caso11)erauncampioneottenutodaunpazientechehadatounrisultatoreattivoperleIgGall’analisiconilsistemaDPPZikaIgM/IgG;nonsonostateeseguiteulteriorianalisiperilrilevamentodialtriflavivirusuno(Caso6)erauncampioneottenutodaunpazientechehadatounrisultatoreattivoperleIgGall’analisiconilsistemaDPPZikaIgM/IgG;questopazienteharicevutounatrasfusionedisanguedaunindividuoidentificatocomepositivoperilvirusZikadopoladonazionedisangue;nonsonostateeseguiteulteriorianalisiperilrilevamentodialtriflavivirus
duecampioni(Caso1)provenivanodaunpazienterisultatononreattivoperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGalladatadelprelievoinizialedelcampione,mentrelaPCRdavarisultatopositivo;ilcampionedelsecondoprelievoera risultato negativomediante PCRma reattivo per le IgM e le IgG all’analisimediante il sistema DPP Zika IgM/IgG; ilprelievofinale(72giornidopolacomparsadeisintomi)hadatounrisultatononreattivoperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG,èrimastonegativomediantePCRmaèrisultatoreattivoperleIgG
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uncampione(Caso2)provenivadaunpazienterisultatoreattivoperleIgMeleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG5,12e19giornidopolacomparsadeisintomi;ilprelievofinale(26giornidopolacomparsadeisintomi)hadatounrisultatononreattivoperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGedèrimastoreattivoperleIgG
Tabella3.2–CasidiZikaconfermati,ColombiaPositivo(POS),Negativo(NEG),NonTestato(NT).
N.caso–Paese
Evento
PCR
DPPZikaIgM/IgG
Cut-off=25 Interpretazione
IgM IgG 1-Colombia Dataprelievo:17/12/2015
5giornidopolacomparsadeisintomiPOS 3(NEG) 105(POS) Positivo
Dataprelievo:22/01/2016
41giornidopolacomparsadeisintomiNT 78(POS) 291(POS)
Dataprelievo:05/02/201655giornidopolacomparsadeisintomi NT 52(POS) 266(POS)
Dataprelievo:05/03/201684giornidopolacomparsadeisintomi NT 60(POS) 207(POS)
2-Colombia Dataprelievo:18/12/20153giornidopolacomparsadeisintomi POS 21(NEG) 45(POS)
Positivo
Dataprelievo:30/12/201515giornidopolacomparsadeisintomi
NT 37(POS) 220(POS)
Dataprelievo:22/01/201638giornidopolacomparsadeisintomi
NT 20(NEG) 201(POS)
Dataprelievo:05/02/201652giornidopolacomparsadeisintomi NT 18(NEG) 244(POS)
Dataprelievo:19/02/201666giornidopolacomparsadeisintomi NT 17(NEG) 180(POS)
Dataprelievo:29/02/201676giornidopolacomparsadeisintomi NT 15(NEG) 133(POS)
Dataprelievo:19/03/201695giornidopolacomparsadeisintomi
NT 22(NEG) 117(POS)
3-Colombia Dataprelievo:18/12/20154giornidopolacomparsadeisintomi
POS
3(NEG) 3(NEG) Positivo
Dataprelievo:22/01/201639giornidopolacomparsadeisintomi NT 3(NEG) 254(POS)
Dataprelievo:22/02/201670giornidopolacomparsadeisintomi NT 4(NEG) 90(POS)
Dataprelievo:25/02/201673giornidopolacomparsadeisintomi NT 10(NEG) 174(POS)
TrecasidiZikasonostatifornitidaBocaBiolistics,tuttiprovenientidallaColombia,peruntotaledi15campionianalizzatimedianteil sistemaDPP Zika IgM/IgG.Complessivamente, la reattività all’analisiDPP Zika IgMè stataosservata in 4 campioni su 15.Degli11campioninonreattiviperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG:
uncampione(Caso1-Colombia)provenivadaun individuorisultatopositivomediantePCRereattivoper le IgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGalladatadelprelievo;successiviprelievidicampioniigiorni41,55e84hannodatorisultatireattiviperleIgMeleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG;nonsonostateeseguiteulteriorianalisiperilrilevamentodialtriflavivirus
sei campioni (Caso 2-Colombia) provenivano da un individuo risultato positivomediante PCR e non reattivo per le IgMall’analisimediante ilsistemaDPPZika IgM/IgGalladatadelprelievo;unsuccessivoprelievoeffettuato15giornidopo lacomparsadeisintomihadatounrisultatoreattivoperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG;risultatinonreattiviper le IgMsonostatiottenuti tra38e95giornidopo lacomparsadeisintomimedianteanalisicon il saggioDPP
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Zika;lareattivitàalleIgGnell’ambitodelsistemaDPPZikaIgM/IgGèstataosservatatuttiigiorniincuisonostatieffettuatiiprelievideicampioni;nonsonostateeseguiteanalisisupplementariperilrilevamentodialtriflavivirus
quattrocampioni(Caso3-Colombia)risultatinonreattiviperleIgMprovenivanodaunindividuorisultatopositivomediantePCR alla data del prelievo e non reattivo per le IgG all’analisimediante il sistema DPP Zika IgM/IgG; successivi prelievi dicampionineigiornida39a73hannodatorisultatireattiviperleIgGsoloall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG
Tabella3.3–CasidiinfezionedaZikaconfermati,RepubblicaDominicanaPositivo(POS),Negativo(NEG),NonTestato(NT).
N.caso–Paese
Evento
MetodoEIAperanticorpianti-Zika SaggioDPPZikaIgM/IgG
IgM IgG Cut-off=25 IgM IgG
1-RD Visita1 NEG POS 7(NEG) 305(POS)
Visita2 NEG POS 3(NEG) 349(POS)
Visita3 NEG POS 4(NEG) 344(POS)
Visita4 NEG POS 3(NEG) 318(POS)2-RD Visita1 NEG POS 17(NEG) 326(POS)3-RD Visita1 NEG POS 4(NEG) 346(POS)4-RD Visita1 NEG POS 6(NEG) 288(POS)5-RD Visita1 NEG POS 27(POS) 292(POS)6-RD Visita1 NEG POS 9(NEG) 343(POS)7-RD Visita1 NEG POS 117(POS) 182(POS)
Visita2 NEG POS 37(POS) 238(POS)8-RD Visita1 NEG POS 8(NEG) 209(POS)
Visita2 NEG POS 7(NEG) 216(POS)
Visita3 NEG POS 6(NEG) 272(POS)
Visita4 NEG POS 6(NEG) 200(POS)9-RD Visita1 NEG POS 8(NEG) 243(POS)
Visita2 NEG POS 6(NEG) 264(POS)
Visita3 NEG POS 2(NEG) 265(POS)10-RD Visita1 NEG POS 9(NEG) 253(POS)11-RD Visita1 POS POS 46(POS) 264(POS)12-RD Visita1 NEG POS 5(NEG) 153(POS)13-RD Visita1 NEG POS 77(POS) 288(POS)14-RD Visita1 POS POS 20(NEG) 163(POS)15-RD Visita1 NEG POS 46(POS) 103(POS)16-RD Visita1 NEG POS 3(NEG) 73(POS)17-RD Visita1 NEG POS 18(NEG) 16(NEG)18-RD Visita1 NEG POS 2(NEG) 39(POS)19-RD Visita1 POS POS 168(POS) 9(NEG)20-RD Visita1 NEG POS 46(POS) 219(POS)21-RD Visita1 NEG POS 4(NEG) 46(POS)
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21 casi di Zika sono stati forniti da Boca Biolistics, tutti provenienti dalla Repubblica Dominicana, per un totale di 30 campionianalizzatimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG.LareattivitàalleIgMnell’ambitodiDPPZikaIgMèstataosservatain8campionisu30,mentreilmetodoEIAdiconfrontoharilevatoleIgMin3campionisu30.LareattivitàalleIgGèstataosservatain28campionisu30analizzatimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGein30campionisu30analizzatimedianteilmetodoEIAdiconfronto.DeiduecampionirisultatinonreattiviperleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG,uncampioneeranonreattivoperleIgMsiaconilsistemaDPPZikaIgM/IgGsiaconilmetodoEIAdiconfronto(Caso17-RD).L’altrocampioneerareattivoperleIgMsiaconilsaggioDPPZikasiaconilmetodoEIAdiconfronto(Caso19-RD).Perquesticampioninoneranodisponibilidatisupplementaririguardantialtriflavivirus.SPECIFICITÀDonneinstatodigravidanzaLaspecificitàdelsistemaDPPZikaIgM/IgGèstatavalutatausando300campionidisieroprovenientidadonnemessicaneinstatodigravidanza. I campioni sono stati ottenuti in Messico, una nazione classificata come non endemica per l’infezione da Zika almomentodelprelievoditalicampioni,consideratiquindipresuntinegativiperl’infezionedavirusZika.Dei300campionianalizzati,12hannodatorisultatipositivi;7sonorisultatipositiviperleIgMsoloall’analisimedianteilsistemaDPPZika IgM/IgGe5sonorisultatipositiviper le IgGsoloall’analisimediante il sistemaDPPZika IgM/IgG.Laspecificità risultantedelsistemaDPPZikaIgM/IgGperleIgMeleIgGèstatarispettivamentedel97,7%(293/300=97,7%conICal95%di95,3-99,1%)edel98,3%(295/300=98,3%conICal95%di96,2-99,5%);vederelaTabella4.LaspecificitàcumulativadelsistemaDPPZikaIgM/IgGèstatacalcolataal96,0%(288/300=96,0%conICal95%di93,1-97,9%).LaspecificitàdelsistemaDPPZikaIgM/IgGèstatavalutatausando206campionidisieroprovenientidadonnestatunitensiinstatodi gravidanza (senzadistinzione tra i diversi trimestri). I campioni sono statiottenuti negli StatiUniti d’America, classificati comeregione non endemica per l’infezione da Zika almomento del prelievo di tali campioni, considerati quindi presunti negativi perl’infezionedaarbovirusedavirusZika.Dei206campionianalizzati,11hannodatorisultatipositivisoloperleIgMall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgGe5sonorisultatipositivisoloperleIgGall’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG.LaspecificitàrisultantedelsistemaDPPZikaIgM/IgGperleIgMeleIgGèstatarispettivamentedel94,7%(195/206=94,7%conICal95%di90,7-97,3%)edel97,6%(201/206=97,6%conICal95%di94,4-99,2%);vederelaTabella4.LaspecificitàcumulativadelsistemaDPPZikaIgM/IgGèstatacalcolataal92,2%(190/206=92,2%conICal95%di97,7-96,3%).Tabella4–SpecificitàdelsistemaDPPZikaIgG/IgMconcampionipresuntinegativiperl’infezionedavirusZika
Paese SpecificitàperleIgM(ICal95%)
SpecificitàperleIgG(ICal95%)
Messico(donneincinte) 293/30097,7%(95,3-99,1%)
295/30098,3%(96,2-99,5%)
U.S.A.(donneincinte) 195/20694,7%(90,7-97,3%)
201/20697,6%(94,4-99,2)
SpecificitàperleregioninonendemicheLa specificità del sistema DPP Zika IgM/IgG è stata valutata usando 484 campioni presunti negativi. I campioni erano unacombinazionedicampionidisangueinterovenosoinEDTA(n=94)ediplasmainEDTA(n=390)prelevatidaindividuiasintomaticinegliStatiUnitid’America,unaregionenonendemicaperl’infezionedavirusZika.Dei 94 campioni di sangue intero presunti negativi inclusi nel presente studio, 88 campioni hanno dato risultati non reattivi perentrambe,IgMeIgG,all’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG.Untotaledi4campionidisangueinteroèrisultatoreattivosoloperleIgM,1campioneèrisultatoreattivosoloperleIgGe1campioneèrisultatoreattivoperentrambe,IgMeIgG.Nonsonostate eseguite ulteriori analisi per il rilevamento di altri arbovirus. Le specificità risultanti del sistema DPP Zika IgM/IgG per ilrilevamentodelleIgMedelleIgGinsangueinterosonorispettivamentedel94,7%(89/94=94,7%conICal95%di88,0-98,3%)edel97,9% (92/94 = 97,9% con IC al 95% di 92,5-99,7%); vedere la Tabella 5. La specificità cumulativa del sistemaDPP Zika IgM/IgGvalutatasulsangueinteroèrisultatadel93,6%(88/94=93,6%conICal95%di86,6-97,6%).
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Dei 390 campioni di plasma presunti negativi inclusi nel presente studio, 363 campioni hanno dato risultati non reattivi perentrambe,IgMeIgG,all’analisimedianteilsistemaDPPZikaIgM/IgG.Untotaledi25campionidiplasmaèrisultatoreattivosoloperleIgM,e2campionisonorisultatireattivisoloperleIgG;nessuncampioneèrisultatoreattivosiaperleIgMsiaperleIgG.Nonsonostate eseguite ulteriori analisi per il rilevamento di altri arbovirus. Le specificità risultanti del sistema DPP Zika IgM/IgG per ilrilevamentodelleIgMedelleIgGnelplasmasonorispettivamentedel93,6%(365/390=93,6%conICal95%di90,7-95,8%)edel99,5% (388/390=99,5%con ICal 95%di 98,2-99,9%); vedere la Tabella5. La specificità cumulativadel saggioDPPZika IgM/IgGvalutatasulplasmaèrisultatadel93,1%(363/390=93,1%conICal95%di90,1-95,4%).Tabella5–SpecificitàdelsistemaDPPZikaIgG/IgMconcampionipresuntinegativiperl’infezionedavirusZika
MatriceEDTA
SpecificitàperleIgM(ICal95%) SpecificitàperleIgG(ICal95%)
Sangueintero89/94
94,7%(88,0-98,3%)92/94
97,9%(92,5-99,7%)
Plasma365/390
93,6%(90,7-95,8%)388/390
99,5%(98,2-99,9%)CampionicliniciLa specificità analitica è stata valutata usando 190 campioni di siero raccolti da 140 individui nel periodo compreso tra il1˚febbraio2016e il 23marzo2016 inun’areaendemicaper leepidemiediDengue (cittàdiCampoGrandenello statodelMatoGrossoDoSul,Brasile).IlperiododiraccoltadiquesticampioniècoincisoconsegnalazionidiepidemiediinfezionidaarbovirusnelMatoGrossoneimesidigennaio-febbraio2016:7000casidiinfezionedaZika,354casidiinfezionedaChikungunyae11.233casidiinfezionedaDengue.15Uncampionedisieroinizialeèstatoraccoltoda140individui,inmedia4giorni(35giornialmassimo)dopol’esordio dei sintomi febbrili. Un secondo campione di siero è stato successivamente raccolto da 50 di questi individui, inmedia7giorni dopo il prelievo iniziale, per un totale di 190 campioni. Di questi 140 individui, 101 avevano precedentemente subito lavaccinazione contro il virus della febbre gialla. Questi campioni sono stati caratterizzati mediante metodi EIA per Dengue eChikungunya:l’85,2%(162/190)deicampionièrisultatoreattivoalleIgManti-Dengue,alleIgGanti-Denguee/oall’antigeneNS1delvirusDengue,eil5,3%(10/190)deicampionièrisultatoreattivoalleIgManti-Chickungunya.Diciassettecampioni(17/190)hannodimostratoreattivitàatuttietreglianalitidellaDengue(NS1,IgM,IgG),suggerendo,inbaseallelineeguidadeiCDCrelativeaitestdiagnosticiperlaDengue,laprecedenteinfezionedaDengueoaltroflavivirus.16IlsistemaDPPZikaIgM/IgGèstatomessoaconfrontoconimetodiEIAconmarcaturaCE;idatirelativisonoriassuntinellaTabella6qui sotto. Complessivamente, la concordanza positiva del sistema DPP Zika IgM/IgG con i metodi EIA conmarcatura CE è statadell’89,5%(17/19)perleIgMedel96,4%(54/56)perleIgG,mentrelaconcordanzanegativaèstatadel95,3%(162/170)perleIgMedell’89,6%(112/125)perleIgG.Tabella6.1–ConcordanzadelsistemaDPPZikaIgM/IgGconimetodiEIAconmarcaturaCE
MetodoEIAconmarcaturaCE
SistemaDPPZikaIgM/IgG(concordanza%)Individuiconunprelievo
disiero(n=90)
PrelievimultipliConcordanzacomplessivaSieroiniziale
(n=50)Secondosiero
(n=50)IgM+ 4/4(100,0%) 3/3(100,0%) 10/12(83,3%) 17/19(89,5%)1
IgM- 82/85(96,5%) 46/47(97,9%) 34/38(89,5%) 162/170(95,3%)1
IgMcomplessive 86/89(96,6%) 49/50(98,0%) 44/50(88,0%) 179/189(94,7%)1
IgG+ 18/19(94,7%) 9/10(90,0%) 27/27(100,0%) 54/56(96,4%)2
IgG- 59/65(90,8%) 34/38(89,5%) 19/22(86,4%) 112/125(89,6%)2
IgGcomplessive 77/84(91,7%) 43/48(89,6%) 46/49(93,9%) 166/181(91,7%)21Èstatoesclusodaicalcoliun(1)campionerisultatoequivocoall’analisimediantemetodoperleIgMEIAconmarcaturaCE2Sonostatiesclusidaicalcolinove(9)campionirisultatiequivociall’analisimediantemetodoperleIgGEIAconmarcaturaCE
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REATTIVITÀCROCIATAPer valutare l’effetto della reattività crociata degli arbovirus sulle prestazioni del sistemaDPP Zika IgM/IgG, sono stati analizzati134campioni rappresentanti vari arbovirus. La reattività crociata degli arbovirus testati mediante il sistema DPP Zika IgM/IgG èriassuntanellaTabella7.Dei134campionitestati,quarantuno(41)sonostatiottenutidafornitoriqualificati (SeraCareLifeSciences,Pannello0845-0075ePannello PVD201); lo stato di questi campioni è stato confermato mediante vari saggi anti-Dengue, ivi compreso, a titolo nonesaustivo,ilsaggioperleIgGeleIgMELISAconmarcaturaCE.Dieci(10)campionisupplementarisonostatiottenutisottoformadipannello da Zeptometrix Corporation (Pannello 1304-272-00098); tali campioni sono stati confermati come positivi alla Denguemediante un metodo ELISA per il rilevamento delle IgG/IgM della febbre Dengue (Quest Diagnostics). Di questi 41 campioni,3campioni (2appartenentialPannello1304-272-00098,1appartenentealPannelloPVD201)sonorisultatinegativiall’analisi contuttiisaggianti-Dengueusati.Dei rimanenti 93 campioni analizzati, diciannove (19) campioni sono risultati positivi per le IgM/IgG dirette contro il virusChikungunya, 8 sono stati confermati per il virus della febbre gialla a seguito della vaccinazione e cinquantasei (56) sono staticonfermatiperilvirusdelNilooccidentale.Dei56campioni,cinquanta(50)sonostatiottenutidaunfornitorequalificato(DiscoveryLifeSciences,DSL15)esonostaticaratterizzatimediantePCRemedianteunsaggioELISAperilrilevamentodelleIgG/IgMdelvirusdel Nilo occidentale. Tutti e 50 i campioni sono risultati reattivi al virus del Nilo occidentale mediante PCR; tuttavia, di questi50campioni,31sonorisultatireattiviall’analisimediantesaggioELISAperilrilevamentodelleIgG/IgMdelvirusdelNilooccidentale.I rimanenti sei (6) campioni sono stati ottenuti da Zeptometrix Corporation (Pannello KZMC027) e sono stati confermati comepositivialvirusdelNilooccidentalemedianteunsaggioELISAperilrilevamentodelleIgG/IgMdelvirusdelNilooccidentale(QuestDiagnostics).Tabella7–Sommariodellareattivitàcrociatadegliarbovirus
Arbovirus Campionianalizzati
Positiviperarbovirus
ReattiviconilsistemaDPP®ZikaIgM/IgGIgM IgG
Dengue 51 48 0(0%) 22(46%)Chikungunya 19 19 0(0%) 7(37%)Febbregialla 8 8 0(0%) 3(38%)
VirusdelNilooccidentale 56 31 0(0%)1 0(0%)13campionisonostatiesclusidaicalcoliperchépositiviperleIgMsiaall’analisiconilsistemaDPPZikaIgM/IgGsiaall’analisiconilsaggioZikadiconfronto(metodoEIAconmarcaturaCE).LIMITIDELLAPROCEDURA1. Il sistemaDPP Zika IgM/IgG di Chembio deve essere utilizzato SOLO con sangue intero capillare (prelevato da polpastrello) o
sangueinterovenoso,sierooplasma.L’usodialtritipidicampionio l’analisidicampionidisangueinteroprelevatomediantevenipuntura o di plasma prelevato usando una provetta contenente un anticoagulante diverso dall’EDTA può determinarerisultatinonaccurati.
2. Aifinidell’accuratezzadeirisultati,ilsistemaDPPZikaIgM/IgGdiChembiodeveessereusatoinconformitàalleistruzionifornitenelpresentefogliettoillustrativo.
3. Laletturadeirisultatidianalisimediantel’unitàDPPMicroReaderprimadi10minutiodopopiùdi15minutidall’aggiuntadeltamponealpozzetto2BUFFER(TAMPONE)puòdeterminarerisultatierrati.
4. Aprirelaconfezionedialluminiosigillatasoloquandosièprontiaeseguirel’analisi.5. Nonusareimaterialideikitoltreladatadiscadenzaindicata.6. Accertarsicheilditosiacompletamenteasciuttoprimadieseguireilprelievodalpolpastrello.7. La presenza di anticorpi IgM e IgG anti-Zika nei campioni presunti positivi richiede ulteriori analisi ad opera di laboratori
qualificati,inbaseall’algoritmofornitodaiCDC.8. Un risultato NEGATIVO non esclude la possibile infezione da virus Zika. Se si sospetta l’infezione da virus Zika, un risultato
negativo può indicare l’analisi di un campione prelevato nel corso della fase acuta. Analizzare un campione in fase diconvalescenzadopo5-7giorni.
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Laboratories(BMBL);currentversion.14. ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute.2011.ClinicalLaboratoryWasteManagement.CLSIDocumentGP5-A3.15. Central Globo: Mato Grosso registra 7 mil casos de vírus da zika e 354 de chikungunya, http://g1.globo.com/mato-
grosso/noticia/2016/03/mato-grosso-registra-7-mil-casos-de-virus-da-zika-e-354-de-chikungunya.html16. Centers for Disease Control and Prevention: Dengue Laboratory Guidance and Diagnostic Testing,
https://www.cdc.gov/dengue/clinicalLab/laboratory.html
DATIPERL’ORDINE
65-9553-0SistemaDPPZikaIgM/IgGdiChembio
70-1049-0UnitàDPPMicroReaderdiChembioperDPPZikaIgM/IgG
Perinformazionirelativeaiprodotti,riferimentibibliograficie/oschededatisullasicurezza(SDS),inviareunae-maila
CHEMBIODIAGNOSTICSYSTEMS,INC.3661HORSEBLOCKROADMEDFORD,NY11763,USA
Tel:+16319241135
E-mail:[email protected]
SitoWeb:www.chembio.com
EC REPEMERGO EUROPE
Molenstraat 15
2513 BH, The Hague
The Netherlands20
LEGENDA DEI SIMBOLI
CONSULTARE IL MANUALE PRIMA DELL’USO
AVVERTENZA
NON RIUTILIZZARE
DA USARSI ENTRO I LIMITI DI TEMPERATURADISPOSITIVO MEDICO PER DIAGNOSTICA IN VITRO
CODICE DEL LOTTO
NUMERO DI CATALOGO PRODOTTO
IDENTIFICAZIONE DEL FABBRICANTE
DATA DI FABBRICAZIONE
DATA DI SCADENZA
CONTENUTO SUFFICIENTE PER 20 TEST
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