I RISCHI DELLA PROCREAZIONE

MEDICALMENTE ASSISTITA

Dottoranda: Dr.ssa C. Pozzobon

Tutor: Prof. G. Ricci

Razionaleamplissima diffusione delle procedure di

PMA negli ultimi anni

10 % delle coppie si troverà ad affrontare un “problema” di infertilità

3,4% dei nati al “Burlo Garofolo” nasce da tecniche di PMA

Razionale

Complicanze a breve termine

Complicanze della somministrazione dei farmaci

Complicanze delle procedure chirurgiche

Trasmissione di malattie virali

Razionale Complicanze a medio termine

Complicanze della gestazione (aborto,

preeclampsia)

Problematiche neonatali (parto pretermine,

basso peso alla nascita, outcome perinatale

negativo, cromosomopatie, malformazioni)

Razionale

Complicanze a lungo termine

Effetti nel tempo delle terapie cui si

sottopongono le donne

Problematiche psicologiche

Problematiche sviluppo psico-fisico dei bambini,

sviluppo di sindromi rare o neoplasie

Obiettivi

I OBIETTIVO=

INDIVIDUARE FATTORI PREDITTIVI E FATTORI DI RISCHIO

II OBIETTIVO=

RILEVAMENTO E MONITORAGGIO

Materiali e Metodi

I OBIETTIVO=

RICERCA

II OBIETTIVO=

SCHEDE DI MONITORAGGIO

Materiali e Metodi

II OBIETTIVO=

SCHEDE DI MONITORAGGIO

I FASE: messa a punto

II FASE: periodo di prova

III FASE: campagna promozione raccolta dati

Risultati I obiettivo

In collaborazione con CRG AZ.VUB

In collaborazione con Genetica Medica del “Burlo Garofolo”

In collaborazione con IVI

Risultati I obiettivo

Risultati I obiettivoProgetto di ricerca in collaborazione con la S.C. Genetica Medica e la S.C. Neuropsichiatria Infantile del “Burlo Garofolo”

Ricerca e quantificazione di sequenze mitocondriali paterne in amniociti di pazienti sottoposte a trattamento di fertilizzazione con ICSI

valutare l’efficacia del meccanismo di selezione in questo stadio di sviluppo fetale

valutare il rischio di una possibile trasmissione paterna di anomalie a carico del mtDNA.

Lo scopo del nostro studio è quello di verificare la presenza di sequenze di mtDNA paterno e l’eventuale percentuale di eteroplasmia negli amniociti di pazienti sottoposte a trattamento

ICSI, con i seguenti obiettivi:

Metodi Estrazione mtDNA da leucociti sangue periferico dei genitori ed amplificazione regione polimorfica + estrazione mtDNA spermatozoi

Costruzione di oligonucleotidi allele specifici in grado di ampliare in maniera selettiva il mtDNA paterno o materno

Estrazione del mtDNA da amniociti seguita da una PCR allele specifica + ev. quantificazione del mtDNA paterno mediante real-time PCR allele-specifica.

Metodi

I FASE: messa a punto delle metodiche

II FASE: coordinazione gruppo

multidisciplinare per il reclutamento

III FASE: analisi dei dati

Risultati

reclutamento 26 famiglie

analisi dati di 10 famiglie

in nessun campione sono state rilevate sequenze

di mt-DNA

Discriminanti scelte per la PCR allele specifica:polimorfismo 215 A/G in padre Primer reverse padre:

5’- TATTATTATGTCCTACAAGCATTTTC -3’

Primer reverse madre: 5’- TATTATTATGTCCTACAAGCATTTTT -3’

Primer forward:

5’-ACCCTATGTCGCAGTATCTGT -3’

Lunghezza amplificato: 130 bp

Padre Madre

73 A/G 73 A/G

195 T/C 150 C/T

215 A/G 152 T/C

263 A/G 263 A/G

309 insC 309 insC

311 insC 311 insC

499 G/A 522-523 delCA

16093 T/C 16189 T/C

16356 T/C 16194 insC

16519 T/C 16270 C/T

Padre Madre

72 T/C 73 A/G

263 A/G 185 G/A

309 insC 188 A/G

etpl 309 insCC 228 G/A

311 insC 263 A/G

16169 C/T 295 C/T

16298 T/C 462 C/T

16069 C/T

16126 T/C

  16325 T/C

Discriminanti scelte per la PCR allele specifica:polimorfismo 72 T/C in padrepolimorfismo 73 A/G in madre

Primer reverse padre: 5’- GCAATGCTATCGCGTGCATG -3’Primer reverse madre: 5’- GCAATGCTATCGCGTGCACA -3’

Primer forward: 5’- GAAATCAATATCCCGCACAAGAGTG-3’

Lunghezza amplificato: 248 bp

Famiglia 11 Famiglia 14

Risultati I obiettivo

Prevenzione farmacologica OHSS con chinagolina

RCT multicentrico

7 centri Instituto Valenciano de Infertilidad

200 pz - 18 mesi

Inizio ottobre 2006

Risultati I obiettivo

Prevenzione farmacologica OHSS con chinagolina

marzo 2007 132 pz randomizzati

Allungamento del reclutamento a 24 mesi

Risultati II obiettivo

I LIVELLO=

Interno al SSD PMA Burlo Garofolo

II LIVELLO=

In collaborazione con ISS

Risultati II obiettivo

Elaborazione e distribuzione di 2

SCHEDE per il MONITORAGGIO delle

GRAVIDANZE da tecniche PMA

2006

100 GRAV

97 SCHEDE

VANISHING TWINS

SCHEDA PER IL FOLLOW-UP

DI GRAVIDANZA DA

PROCREAZIONE MEDICALMENTE

ASSISTITA

PROPOSTA, DISCUSSA E

PROMOSSA

A LIVELLO REGIONALE

Risultati II obiettivo

Collaborazione col l’ISS

per l’elaborazione di un

REGISTRO NAZIONALE

FINALITA’ DEL REGISTRO

censire i centri del territorio nazionale

rendere omogenei i requisiti tecnici-organizzativi

raccogliere dati efficacia ed esiti delle tecniche

censire embrioni prodotti e criopreservati banca dati per analisi epidemiologiche

e confronti con altri Paesi

Risultati II obiettivo

STRUTTURA DEL REGISTRO

RACCOLTA PER DATI AGGREGATI

risponde ad esigenze più immediate

RACCOLTA PER RECORDS INDIVIDUALI

permette di ottenere informazioni più complesse

Risultati II obiettivo

Cartella medica elettronica

RACCOLTA PER RECORDS AGGREGATI

I criterio

accreditamento dei centri presso le regioni

invio degli elenchi dei centri accreditati dalle regioni all’ISS

consegna ai centri degli accessi al sito

registrazione dei centri al registro nazionale

inserimento periodico dei dati dell’attività da parte dei centri

RACCOLTA PER

RECORDS INDIVIDUALI

II criterio

Cartella medica elettronica

BANCA DATICENTRI

BANCA DATIPAZIENTI

BANCA DATICICLI

BANCA DATIEMBRIONI

BANCA DATINATI

BANCA DATIGRAVIDANZE

377 CENTRI

37293 CICLI

29380 OPU

25000 ET

REGISTRO NAZIONALE 2005

REGISTRO NAZIONALE 2005

I II

III

0102030405060708090

100

RISPOSTA CENTRI GRAV PERSE ALFOLLOW-UP

PR/ET 96 CENTRI 2003-2005

2424,5

2525,5

2626,5

2727,5

2828,5

29

2003 2005

FIV

ICSI

TOT

PERDITA IPOTETICA GRAV 2003-2005

↓ 331,6

gravidanze

in meno

RISULTATI BURLO 2006

313 cicli225 pz79 grav

24%

76%

FIVET

ICSI

CLASSI DI ETA’

10

28,7

36

24,6

0,70

5

10

15

20

25

30

35

40

<29 30-34 35-39 40-44 >45

%

RISULTATI BURLO 2006

289 OPU

2390 OVOCITI PRELEVATI

749 OVOCITI INSEMINATI

277 ET

RISULTATI BURLO 2003 vs 2006

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

2003 2006

OVOCITIPRELEVATI

OVOCITIINSEMINATI

COMPLICANZE

1 sanguinamento

1 OHSS severa

0 infezioni

0 morti materne

ESITI NEGATIVI

13

25,6

4,3

0

4,31,4

0

5

10

15

20

25

30

ABORTI ITRIM

ABORTI IITRIM

GEU

2003

2006

%

ESITI NEGATIVI

25,6

01,4

0

5

10

15

20

25

30

ABORTI ITRIM

ABORTI IITRIM

GEU

2006

%

PARTI

79

72,2

18,524

1,9 3,7

0

10

20

30

40

50

60

70

80

SINGOLI GEMELLARI TRIGEMELLARI

2003

2006

%

PARTI

44,4

55,6

0

10

20

30

40

50

60

VAGINALI CESAREO

%

NATI LBW

33,8

16,6

58,3

25

0

10

20

30

40

50

60

TOT SINGOLI GEMELLARI TRIGEMINI

%

NATI PRETERMINE

35,2

28

48

24

05

10152025

30354045

50

TOT SINGOLI GEMELLARI TRIGEMINI

%

RISULTATI BURLO 2005

71 NATI VIVI

2,82% MALFORMAZIONI