HPV- mRNA, p16/ki-67 e regressione delle lesioni cervicali:

Studio NTCC2

Simonetta Bisanzi

ISPRO Istituto per lo studio, la prevenzione e la rete oncologica

S.C. Laboratorio Regionale Prevenzione Oncologica Firenze

&

Gruppo di lavoro NTCC2

Dichiarazione conflitto di interessi

Il progetto è finanziato dal Ministero della Salute, proprietario dei dati. Hologic s.r.l. e Roche Diagnostics S.p.A. hanno fornito parte del materiale necessario a prezzo ridotto o gratis.

Ricerca Finalizzata Ministero della Salute 2009 “L'HPV come test primario di screening nella prevenzione del tumore cervicale: dal DNA all'mRNA? Un RCT double testing con follow up a lungo termine” Grant number RF-2009-1536040 Clinicaltrials.gov identifier NCT01837693

Obiettivi specifici

misurare l’accuratezza dei test HPV E6-E7 mRNA (APTIMA, Hologic) e test p16/Ki-67 (CINtec PLUS, Roche Diagnostic) e il loro valore predittivo negativo prospettico nei successivi 5 anni, misurando la detection rate cumulativa di CIN2+ nei cinque anni a seguito di un test HPV-DNA positivo e di un biomarker, p16/ki-67 o HPV-mRNA, negativo misurare la riduzione di sovradiagnosi data da un triage citologico, con p16/ki-67 e con HPV-mRNA rispetto all’invio diretto in colposcopia delle donne HPV DNA positive.

Necessità di biomarcatori specifici per CIN di alto grado

Il test HPV DNA può causare sovra diagnosi, con conseguente sovra trattamento, in particolare nelle donne giovani, di lesioni CIN2 e CIN3 destinate a regredire.

Razionale

There was evidence that approximately 40% of undiagnosed CIN-2 will regress over 2 years.

Un test che sia più specifico potrebbe almeno parzialmente ridurre il sovratrattamento.

Disegno dello studio

RANDOMIZZAZIONE 1:1

RANDOMIZZAZIONE

Given the randomized design for management of women that are HPV DNA positive/cytology negative, we might establish the ability of HPV E6-E7 mRNA test

and p16/ki-67 test to distinguish between progressive and regressive lesions.

Analisi biomarcatori HPV-mRNA e p16/ki-67: All’arruolamento sulle donne HPV-DNA positive Al richiamo a 1 anno su tutte le donne Al follow-up post colposcopia negativa (richiami precoci)

HPV-mRNA test Aptima

P16/ki67

HPV-mRNA test Aptima

P16/ki67

HPV-mRNA test Aptima

P16/ki67

Richiami precoci post colpo negativa

HPV-mRNA test Aptima

genpathdiagnostics.com

L’espressione degli oncogeni dell’HPV ed i suoi effetti sulla cellula ospite possono essere monitorati direttamente, attraverso l'individuazione di trascritti di mRNA virale E6/E7, o indirettamente, attraverso la rilevazione della proteina cellulare p16.

https://doi.org/10.1016/j.joms.2013.02.019

alterata regolazione trascrizionale di percorsi cellulari della cellula ospite

Trasformazione neoplastica

Il test Aptima HPV consente l’analisi qualitativa con amplificazione di mRNA degli oncogeni virali E6 e E7 di 14 tipi HPV ad alto rischio (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68)

Validato su campioni per citologia in fase liquida → test sullo stesso prelievo del test primario di screening

APTIMA Specimen Transfer Kit

Test HPV E6-E7 mRNA Aptima (Hologic)

Panther Hologic

PreservCyt, Hologic

Cellula epiteliale cervicale positiva per p16INK4a (colorazione citoplasmatica marrone) e per Ki-67 (colorazione nucleare rossa)

TP 5000 autoloader Hologic BENCHMARK GX

Ventana Roche

CINtec PLUS Assay (Roche Diagnostics)

PreservCyt, Hologic

Il confronto tra tasso di rilevamento di lesioni CIN2+ nei due bracci (invio diretto in colposcopia vs follow up a un anno) in donne negative alla citologia darà la misura di quanto il triage citologico può ridurre la sovra-diagnosi in confronto con il DNA di HPV con immediato invio alla colposcopia.

Misure di esito ed esposizione

DESCRIZIONE DELLO STUDIO

Analisi - Dati relativi ai centri di Firenze, Torino, Veneto e Perugia. - Risultati ai primi 12 mesi di follow up, cioè considerati i test entro 2 anni dal reclutamento - Il valore delle CIN2+ adjusted è ottenuto aggiustando per la non compliance alla ripetizione ad un anno

HPV-DNA results

Cytology

+

Randomization

12 months HPV-DNA

1229

Recruited women 40509

22 Missing

37340 3147

Colpo 831

2306

Colpo 1077

10 Missing

-

+ -

Colpo performed 741

Colpo performed 951

HPV-DNA results

+

480 550

-

Colpo performed 490

Returned for 1y follow up

1030

115 CIN2+

34 CIN2+

25 CIN2+ (adj 29,8)

Overall detection: 4,4/1000

83,8%

88,3%

89,2%

89,1%

7.8%

26.4%

Tot 174 CIN2+ (78 CIN2, 95 CIN3 e 1 adenocarcinoma)

mRNA pos 66.5% P167ki67 pos 38.2%

HPV-DNA results

Cytology

+

Randomization 12 months HPV-DNA

1229

Recruited women 40509

22 Missing

37340 3147

Colpo 831

2306

Colpo 1077

10 Missing

-

+ -

Colpo performed 741

Colpo performed 951

HPV-DNA results

+

480 550

-

Colpo performed 490

Returned for 1y follow up

1030

115 CIN2+

34* CIN2+

25** CIN2+ (adj 29,8)

83,8% 88,3%

89,2%

89,1%

Detection 3,2%

Detection 2,4%

RR 0,77 95%CI 0,48-1,25

REGRESSIONE LESIONI IN DONNE CITO NEG

Nelle donne HPV pos/cito neg, circa 1/4 di lesioni CIN2+ potrebbe regredire in meno anno

*19 CIN2 + 15 CIN3

**13 CIN2 + 12 CIN3

La proporzione di CIN2+ HPV DNA positive e mRNA o p16/ki-67 negative che regrediscono in un anno sarà misurato attraverso il confronto del tasso di rilevamento nei due bracci (invio diretto alla colposcopia vs follow-up a un anno) nei casi mRNA o p16 negativi.

Misure di esito ed esposizione

DESCRIZIONE DELLO STUDIO

Randomization 12 months HPV-DNA

1229

Colpo 1077

Colpo performed 581

HPV-DNA results

+

211 406

-

Colpo performed 369

Returned for 1y follow up

617

30 CIN2+

mRNA + -

Colpo performed 366

24 CIN2+ (adj 28,6)

4* CIN2+

HPV-DNA results

+

268 141

-

Colpo performed 118

Returned for 1y follow up

409

1** CIN2+ (adj 1,2)

mRNA + -

HPVDNA+/Cyto-

Regression 17%

Regression 74%

REGRESSIONE LESIONI IN DONNE HPV-mRNA NEG

7 CIN2+ mRNA neg

*3 CIN2 + 1 CIN3

**1 CIN3

Randomization 12 months HPV-DNA

1229

Colpo 1077

Colpo performed 197

HPV-DNA results

+

58 141

-

Colpo performed 124

Returned for 1y follow up

199

18 CIN2+

p16 + -

Colpo performed 637

15 CIN2+ (adj 17,9)

12* CIN2+

HPV-DNA results

+

345 339

-

Colpo performed 305

Returned for 1y follow up

684

5** CIN2+ (adj 6)

p16 + -

HPVDNA+/Cyto-

Regression ~13%

Regression 56%

REGRESSIONE LESIONI IN DONNE p16/ki-67 NEG

28 CIN2+ p16/ki-67 neg

*7 CIN2 + 5 CIN3

*4 CIN2 + 1 CIN3

Entrambi i test, HPV-mRNA e p16/ki-67, se negativi, sembrano capaci di individuare lesioni CIN2+

con maggiore probabilità di regressione.

FOLLOW UP invece del TRATTAMENTO ?

CONCLUSIONI

utili come MARCATORI PROGNOSTICI per ridurre la sovradiagnosi e il conseguente sovratrattamento

Il test p16/ki-67 potrebbe permettere intervalli più lunghi in donne HPV DNA positive ma negative al test di triage

CONCLUSIONI

Sensibilità citologia 66.1%

115/174 IC95% 58,5-73,1

p16/ki-67 83.9% 146/174 IC95% 77,6-89,0

HPV-mRNA 96% 167/174 IC95% 91,9-98,4)

Test di triage? p16/ki-67negative lesions may be highly regressive +

Immediate colposcopy can be avoided in HPVpositive, p16-negative women, who can be safely managed with repeat screening after 2–3 year intervals

Retesting intervals in HPV16/18-negative women with negative DS results can be safely extended to 3 years.

Intervalli di follow up fino a 3 anni sono sufficientemente sicuri

Le lesioni HPV-mRNA negative sono clinicamente poco rilevanti, per cui il

test HPV-mRNA potrebbe essere un buon candidato per lo screening primario, con un intervallo di screening per le donne mRNA neg da valutare quando sarà completato il follow up a 5 anni dello studio.

CONCLUSIONI

Positività citologia 26,4%

p16/ki-67 38,2%

HPV-mRNA 66.5% Troppo elevata per essere utilizzato come test di triage

Regione Lazio: Alessandra Barca e Francesco Quadrino Istituto Nazionale Tumori Regina Elena, Roma: Maria Benevolo, Amina Vocaturo, e Francesca Rollo Reggio Emilia: Paolo Giorgi Rossi, Laura Bonvicini, Pamela Mancuso, Francesco Venturelli ISPRO Firenze: Francesca Maria Carozzi, Karin Andersson, Simonetta Bisanzi, Stefania Capassoni, Massimo Confortini, Carmelina Di Pierro, Giulia Fantacci, Anna Iossa, Marzia Matucci, Paola Mantellini, Alessandra Mongia, Giampaolo Pompeo, Donella Puliti, e Andrea Baldini CPO Torino: Guglielmo Ronco, Raffaella Rizzolo, Anna Gillio Tos, Laura De Marco, Elena Allia, e Bruno Ghiringhello Trento: Mattia Barbareschi, Paolo Dalla Palma, Salvatore Girlando, Enzo Polla, Teresa Pusiol, Sara Condini, e Emma Bragantini Umbria: Basilio Passamonti, Daniela Gustinucci, Simonetta Bulletti, Elena Cesarini, Nadia Martinelli, Gabriella Vinti, Graziella Principi, Arturo Fabra, Antonella Lucaccioni, Angela Carlani, e Maria Donata Giaimo ULSS 17 Este: Maria Gabriella Penon, Natalina Marchi, Angelo Farruggio, e Alessandra Bertazzo IOV: Annarosa Del Mistro, Helena Frayle, Martina Rizzi, e Silvia Gori Registro Tumori del Veneto: Manuel Zorzi Coordinamento Regionale Screening Oncologici Veneto: Chiara Fedato e Adriana Montaguti

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