“Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione
Specific AT-rich DNA-binding Protein(SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo.”
Tesi di Laurea in MedicinaFacoltà di Medicina e Psicologia – Università di Roma “La
Sapienza”
Angelo D’Ambrosio
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
2
Un terzo della popolazione europea riporterà una patologia psichiatrica nel corso della vita. (Alonso J, Angermeyer MC, Bernert S, et
al., 2004)
Prevalenza maggiori disturbi psichiatrici:
•Disturbi d’ansia: 10.6%
•Disturbi dell’umore: 6.8%
•Schizofrenia: 0.4%
•Disturbi della personalità: 13.4%
La Patologia Psichiatria È Molto Diffusa
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
3
VIENE TRATTATO IL
SINTOMONON LA CAUSA
La Patologia Psichiatria È Molto Diffusa
La maggior parte dei farmaci a nostra disposizione agisce sulle sinapsi e in partcolare sul sistema delle monoammine (serotina, noradrenalina, GABA)
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
4
Epigenetica
Renthal and Nestler
Dialog. Clin Neurosci 11, 2009
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
5
Epigenetica
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
6
SATB1 e SATB2 e le MAR
La cromatina è organizzata in anse.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
7
SATB1 e SATB2 e le MAR
Le Matrix Attachment Regions (MARs) sono dei domini che permettono l’attracco del DNA alla matrice nucleare e la formazione e la regolazione delle anse della cromatina.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
8
SATB1 e SATB2 e le MAR
I fattori SATB si legano alla base delle anse e fungono da landing point per una molteplicità di effettori, fra i quali anche HDAC e HAT.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
9
SATB1 e SATB2
I fattori SATB sono necessari per lo sviluppo di molte linee cellulari e sono coinvolti in alcune patologie.
SATB1Switch da emoglobina fetale ad adultaDifferenziazione CD4+CD8+PatologiaDeficit causa ritardo mentaleFenotipo metastatico K mammellaNel Sistema NervosoSviluppo IEGCorretta formazione precoce delle spine dendritiche
SATB2Necessario lyonizzazione chromosoma
XSviluppo osseo
Attivazione IgM in cellule BPatologia
Deformazioni crani-facciali, palato schisi, ritardo mentale,
Screening K Colon RettoNel Sistema Nervoso
Fenotipo cortico-corticale neuroni corteccia
Swtich colinergico delle fibre sudoromotorie del simpatico
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
10
SATB1 e SATB2,Riassumendo
I fattori SATB regolano l’espressione di molti geni permettendo la modifica della cromatina. Fungono quindi da interruttori generali del fenotipo cellulare.
Le informazioni sulla loro funzione fa intuire un possibile ruolo nelle funzioni cognitive superiori e quindi anche nella loro patologia.
Il nostro studio è un primo approccio alla definizione di SATB2 nei processi di apprendimento e affettivi.
A tal fine abbiamo indagato l’effetto del modello del Fear Conditioning sull’espressione nell’amigdala di topo.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
11
Fear Conditioning
E’ un paradigma di memoria associativa.
Presentando più volte uno stimolo emotivamente neutro, come un suono, con uno rilevante, come il dolore causato da una scossa elettrica, alla fine lo stimolo neutro sarà in grado autonomamente di provare risposte associate a quello rilevante.La risposta che noi andiamo a misurare è il freezing.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
12
Amigdala
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
13
Protocolli Di Fear Conditioning
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
14
Protocollo Di Fear Conditioning
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
15
Metodi
Topi C57/Bl6n.
Perfusione tramite infusione transcardica di acido picrico e paraformaldeide.
Immunostaining con immuno perossidasi e immuno fluorescenza.
Anticorpi utilizzati per le proteine SAT:
•Rabbit policlonale anti-SATB1 (rRbSATB1) [1:1000] da Abcam (ab49061)
•Mouse monoclonale anti-SATB2 (mMsSATB2) [1:1500] da Abcam (ab51502)
•Rabbit monoclonale anti-SATB12 (mRbSATB2) [1:500] da Abcam (ab92446)
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
16
Immunoreatività
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
17
Immunoreatività
Anti-FOXP2 = rosso mMs-SATB2 = verde
Mancanza di co-localizzazione tra FOXP2 e SATB21/ nel complesso basolaterale dell’amigdala
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
18
Immunoreatività
Anti-GAD = rosso mMs-SATB2 = verde
Assenza di espressione del SATB-1/2 nei neuroni GABAergici inibitori nell’amigdala
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
19
Training di Fear ConditioningI dati mostrano l’efficacia del modello, con un aumento significativo del freezing
FA: fear acquisition
FC: fear conditioning
S/L: Short/Long
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
20
Quantificazione segnaleCostante diminuzione a 24h e a 72h del segnale di SATB1 nell’amigdala basolaterale.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
21
Quantificazione segnaleIl segnale di SATB2 in amigdala basolaterale è difficilmente apprezzabile e mostra una variazione a campana, sebbene non significativa.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
22
Interpretazioni
• Diminuzione di SATB1 nei topi trattati
• Diminuzione di SATB1 potrebbe impedire complessamento HDAC con cromatina, favorendo la trascrizione genica necessaria per plasticità sinaptica
• SATB1 e SATB2 potrebbero interagire positivamente o negativamente.
• Impossibile valutare effetti di modifiche post-trascrizionali su SATB1 e SATB2.
• In futuro sarà necessario sviluppare dei knock-out condizionali per valutare gli effetti del deficit dei fattori SATB sull’apprendimento di ansia e paura nel Fear Conditioning.
D’Ambrosio, A. “Influenza del paradigma Fear Conditioning sull’espressione dei fattori di trascrizione Specific AT-rich DNA-Binding Protein (SATB) 1 and 2 nell’amigdala di topo”. Tesi di Laurea in Medicina, 2011-2012
23
Epigenetica?
Un meccanismo complesso per un sistema complesso
GRAZIE!
Top Related