IOGENESI
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Laboratory aspects of IVMLaboratory aspects of IVM
DAL CANTO MARIABEATRICE
BIOGENESI REPRODUCTIVE MEDICINE CENTER,
ISTITUTI CLINICI ZUCCHI
V. Zucchi, 24-Monza (Italy) tel/fax +39.39.8383314
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ANTRAL FOLLICLE 5-12 mmPROPHASE ICell diameter 110-120 µ mMonolayer cumulus cellsZona pellucida Cytoplasmic maturation
Minimum follicular diameter Minimum follicular diameter to produce a competent to produce a competent oocytes is around 5 mm oocytes is around 5 mm
Minimum follicular diameter Minimum follicular diameter to produce a competent to produce a competent oocytes is around 5 mm oocytes is around 5 mm
PRE-ANTRAL FOLLICLE 2-5 mmPROPHASE I Cell diameter 80 µ mMonolayer cumulus cells
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GVBD
2n
cAMP
cAMP
cAMP
LH
FF-MASMPF
cAMP
cAMP
OOCYTES OOCYTES MATURATIONMATURATION
PROPHASE IMETAPHASE IIMETAPHASE II
granulosa cell
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DAY -1
DAY 0
IVF
DAY 1-2
I.V.M.
I.V.F.
...IVM REQUIRES FLEXIBILITY AND ...IVM REQUIRES FLEXIBILITY AND ADJUSTMENTS ...ADJUSTMENTS ...
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TRANSVAGINAL US GUIDANCE CRAFT VACUUM PUMP (pressure 80-90
mmHg)
ASPIRATION NEEDLE (Gynetics 4551E 17-G single lumen)
SINGLE FLASK TO COLLECT OOCYTES
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONOocytes Collection
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DAY –1
Disposable Material
Filter 0.70 μm Syringes Flask or tube Petri dishes
Flushing Medium with Heparin Maturation Medium
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONOocytes Collection
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DAY -1
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DAY -1
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DAY -1
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DAY -1
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DAY - 1
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IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONOocytes Collection
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PICK UP (8.30 am)
3 hrs INCUBATION IN LAG MEDIUM
(09.00)
26 hrs INCUBATION IN IVM MEDIUM (12.00 am)
DAY –1
r-FSH 0.075 IU/ml r-FSH 0.075 IU/ml hCG 0.10 IU/mlhCG 0.10 IU/ml10% patient’s 10% patient’s serumserum
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONBiological Aspects
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EXPANDED CUMULUS FULL CUMULUS
SPARSE CUMULUS
NUDE
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONOocytes Classification
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DAY -1
EXPANDED CUMULUS Immature oocytes with multilayer and slack cumulus
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FULL CUMULUS Immature oocytes with compact complete cumulus
DAY -1
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SPARSE CUMULUS Immature oocytes with partial cumulus
DAY -1
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NUDE Immature oocytes
without cumulus
DAY -1
ATRETIC
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DAY 0
• Maturation control (3.00 pm)
hyaluronidase 80 UI
• ICSI (4.00 pm)
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONBiological Aspects
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DAY 0
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DAY 1
•Fertilization control
(8.30 am)
•Culture in multiwells in ISM-1 Medium
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONBiological Aspects
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DAY 2
• Embryo control
• Embryo transfer
IN VITRO MATURATIONIN VITRO MATURATIONBiological Aspects
No cleavage delay was observed
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n° %
Cycles started 463
Oocytes retrieved Full cumulus Sparse cumulus Nude + Atretic
Oocyte in culture
18041455207142
1662
80.611.4
8
Maturation rate
Fertilization rate (2PN)
986/1662
671/824
59.3
81.4
RESULTSRESULTSNatural IVMNatural IVM
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n° %
n° Embryos transferred
n° Emb. 0% fragmentation
n° Emb. 1-10% fragmentation
n° Emb. 11-20% fragmentation
n° Emb. 21-40% fragmentation
n° Emb. >41% fragmentation
671
287
200
78
65
41
42.7
29.8
11.6
9.6
6.3
RESULTSRESULTSNatural IVMNatural IVM
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09.03.2004 A new Law regarding ART was approved
in Italy
09.03.2004 A new Law regarding ART was approved
in Italy...use no more than 3 oocytes for each cycle so as to avoid to produce more than 3 embryos...
...all embryos obtained must be transferred simultaneously with no selection....
3 t
op
ics
... embryo cryopreservation is forbidden....
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n° %N° transfersN° patientsN° tot embryosn° embryos/transfer
361289671
1.8 ± 0.6
β-hCG positive test Clinical pregnancies PR/transferPR/patientIR
6054
54/36154/28958/671
14.918.6 8.6
RESULTSRESULTSNatural IVMNatural IVM
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n° Transfers
n° Patients
n° Clinical Pregnancies
PR/transfer (%)
PR/patient(%)
IVM 164 122 25 15.4 20.5
ICSI 455 407 78 17.1 19.2
FIVET
243 220 48 19.8 23.0
Pregnancy rate with standard IVM, ICSI and IVF-ET in women ≤39 age (May 2004-September 2005)
Dal Canto et Al., RBM Online Vol.13, N°2, August 2006
IVM: the first choice in ItalyIVM: the first choice in Italy
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RESULTS IN SELECTED WOMENRESULTS IN SELECTED WOMEN
14,7%
19,8%
8,5%
10,8%
0,0%
5,0%
10,0%
15,0%
20,0%
25,0%
PR/transf Implantation Rate
*
*
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RESULTS IN SELECTED WOMEN WITH “TOP QUALITY” EMBRYOSRESULTS IN SELECTED WOMEN WITH “TOP QUALITY” EMBRYOS
* analysis performed on women <37 yearsin which only “top embryos” were transferred
14,7%
19,8%
29,1%
8,5%
10,8%
16,1%
0,0%
5,0%
10,0%
15,0%
20,0%
25,0%
30,0%
PR/transfer Implantation Rate
Series1
Series2
Series3
*
*
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we are studing… we are studing…
New Maturation Medium
Extended Culture up to blastocyst Stage
In-vitro matured oocyte Cryopreservation
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Equipe MedicaDr R. FadiniDr M. Mignini RenziniDr R. ComiDr G. RangoniDr A. VillaDr M. MastrolilliDr A. Epis
Equipe BiologicaDr M.B. Dal CantoDr F. BrambillascaDr M. CrippaDr D. FumagalliDr M. LainDr. M. MerolaSig.ra M. MajoliSig.ra A. Longoni
SegreteriaSig.ra C. Del Favero; Sig.ra P. Loreto; Sig.ra F. Rapisarda; Sig.ra F.
Froio
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