Tecnica delle Fette
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TECNICA DELLE FETTE 1-Prelievo organo 2-Fissazione 3-Disidratazione (serie alcool ascendenti) 4-Chiarificazione in solventi organici (xilene –
Histolimon) 5-Inclusione in paraffina 6-Sezioni al microtomo 7-Distensione fette su vetrini 8-Sparaffinatura in solventi organici 9-Serie alcool discendenti 10-Colorazione 11-Disidratazione in serie ascendenti alcool 12-Chiarificazione 13-Montaggio in balsamo (resine sintetiche)
FISSAZIONE
Chimica
Fisica
Congelamento- Sostituzione
Congelamento- Essiccazione
Congelamento
Coagulanti
Non coagulanti
Alcool etilicoAlcool metilicoSublimato corrorivo
Formalina
Acido picrico
Acido aceticoAlcool tricloracetico
Tetrossido di osmio
Inclusione in paraffina
Raccolta delle fette
Fette al microtomo
Distensione delle fette
Colorazione – Disidratazione- Montaggio in balsamo
Tecnica delle fette in Microscopia elettronica
fissazioneinclusionesezionamentospessore fettesupportocolorazionemontaggio
Microscopia otticaformalina+ac.picricoparaffinamicrotomo7 µmvetrinocolarantibalsami
Microscopia elettronicaparaformald, ac. osmico
resine epossidicheultramicrotomo
100 nm ( 0,1 µm)retino di ramemetalli pesanti si butta
PARTICOLARI TECNICHE IN MICROSCOPIA ELETTRONICA
Colorazione negativa -campioni in rilievo contro uno sfondo scuro
Il campione, sospeso in un colorante elettrondenso, è
applicato su un retino ricoperto da un sottile film di plastica. Si asciuga all’aria e si osserva al TEM
Virus mosaico del tabacco
batteriofago
Ombreggiatura al platino
Criofrattura – freeze etching – deep etching
deep etching – vescicola legata a un microtubulo
Criofrattura –membrana di un globulo rosso
Composizione chimica del Protoplasma Acqua (H2O - libera e legata) 80%Proteine 15%Lipidi 2.5%Glucidi (zuccheri semplici e composti ) 1%Acidi nucleici (DNA, RNA) 1%Sali minerali (K+, Na+, Ca++, Mg++, Cl-, SO4
--, PO4
---,HCO3-, CO3
--, NO3-, elementi traccia) 0.5%
Composizione percentuale di C+O+H+N 98% Unitarietà dei viventi = Stessa composizione chimica