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Osservazioni suldifferenziamento del sanguenell'embrioue di polloLeo Raunich aa Istituto di Anatomia comparata dell'Università diFerraraPublished online: 14 Sep 2009.

To cite this article: Leo Raunich (1964) Osservazioni sul differenziamentodel sangue nell'embrioue di pollo, Bolletino di zoologia, 31:2, 993-999, DOI:10.1080/11250006409441130

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LEO ~ ~ A U N ~ C H Istituto di Anatomia comparata dell’Univeraiti di Ferrard

Direttore: Prof. Leo R ~ u s l c l I

Osservazioiii siil differenziamento deI sangue

nell’embrione di pollo.

E’ opinione generalmente acccttata clie le prime cellulc sanguigne dell’embrione originate dagli isolotti dcl Wolff, rappresentino una pri- ma generazione ( generazione prirnitiva), clestinata a sparire dal circolo e a essere rimpiazzata da una seconda generazione (generazione defi- nitiva). Differcnze di forma, struttura c concentrazione emoglobinica fanno si d i e gli elernenti delle due generazioni siano facihnente iden- tificabili negli strisci. Riccrclie di citospettroscopia ( RAUNICII 1963)’ lianno dimostrato una pih rapicla sintesi emoglobinica, nonchb valori piii elevati clel Soret, nclle cellule emoglobiniclie rlella I. gcnerazione.

E’ anclie noto elm durante lo sviluppo esiste una emoglobina un PO’ cliversa (la quella clcIl’arlulto. EcceIIenti riccrclie linnno dixnostrato le clifferenze fra l’enioglobina A e P nei BIamniifcri, riconducibili a una cliversa costituzione clelle catcnc polipeptidielie (a e nella A, a e y nella I?) (v. ad es. INGRAM 1961). Da osservare clie anclie nell’uonio Q stata (limostrata, in stadi precoci dcllo svilnppo (fino a 20 settimane) la prcsenza cli una terza qualiti di emoglobina, iclcntificabile elettrofore- ticamente ( HALBRECIIT e KLIBANSKI, 1956, KUNZER 1957).

Nell’cmbrione di pollo i: stato osservato clie l’emoglobina dell0 emlirione i: cliversa da quella dell’atlulto, per6 i dati bibliografici a questo proposito sono alquanto discordanti : FRASER (1961) osservi, la presenza cli 2 cmoghbine, i eui valori quantitativi si invertono nel corso dello sviluppo. D’AMELIO e SALVO (1961) poterono diluostrare la prcsenza di 2 emogloliine assai precoci, clestinate poi a scomparire, e di altre 3 definitive, clie cotnpaiono dopo la 88.a ora d i incubazione. BIANVWELL et al. (1963) sostenncro la presenza d i 2 emoglobine fino a1

giorno, scguite da altre 2 dal 7” giorno in avanti. Reccntissimamente PRASER (1964)’ in base a ricerclie dcttagliate, ha afferniato clie fino a1 5” giorno edstono 2 emoglobine, e (la1 7” giorno in avanti se ne

(*) Lnvoro eseguito con il contributo del C.N.R.

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aggfiingc iina term : tiitt'e tre pcrt1iirerclrl)cro per tutto lo sviliippo eiiil)rionale.

I1 problema, a tiitt'oggi, non appare socltlisfacenteiiiente risolto, e lion i: iicppure cliinro qiiali rapporti esistaiio Ira gcnerazionc cli cel- lrile e qiialiti cli ciiiog1ol)inc; i risultati cli D'ABIELIO e SALVO (1961) c1iinostrercl)l)cro . per6 iina cffettiva spccificiti di einoglobine nelle singole gciierazioni di clemciiti tlella serie rossa.

Una serie tli ricerrlie sopra la coiiiposizionc clcll~einoglol~ii~a in e~iil)rioiii cli pol10 cli cliversa cti, conciotte inecliante I'elettroforesi 5u gel d'amiclo iiel sisteina cli buffer cliscontinuo, ha dato clei risultati c l ~ e alJpaiono di un certo intcrcse, e clic qui riferisco breveniente.

AIATERIALE E TECNiCA.

E' stato stiicliato il rangue di cinbrioni cli pollo tli 3, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 14, 16 c 20 giorni cli incul)azionc, nonclii! cli pdcini iiconati di 2 giorni. IE cclliilc ~orio state ripctutamente Invale in Tyrocle, e qiiindi cniolizzate con acqiia clistillata. Elcttroforesi su gel d'aniiclo, sisteiiia cli buffer cli~continuo sccoiirlo POULIK (1957), a pH 8,G e 8,95. Teiii- po di corsa 1-2 orc, corrciite continua cli 250.300 V, 25-30 mA. Le varic frazioiii enioglol)iniclie wnivano rivelate mctliante la reazione benzitlinica, e quincli fotografate e disegnate.

PARTE SPERIMEKTALE.

A 3 giorni cli incubazionc si mettoiio in cvidenza 2 enioglobinc (d i ciii iiiia piii abboiiclante clell'altra), e a 5 giorni aliiieno 4 ( Y. fig. 1, i i , I)). A1 7 O gioriio si aggiungono altrc 2 Crazioni, a niigrazione piii \cloce (fie. I, c). Da osscrvare clie In comparsa in circolo di qucste ultiiiie 2 Crazioiii C assai briisca, perch& a1 Go giorno mancano, o sono appena apl)eiia acccnnate.

Fra 1'8" c il 14" giorno il q d r o elettroforetico si iriodifica ulte- rininicntc. La Erazioiie piii lentn, poco cliscosta clnllo start ( a pII 8,95), Lcnc eviclcntc a 7 giorni (fig. 1, c), scompare verso il 12" giorno di inciil)azione, meiitre a1 14" giorno conipare zina frazione leiita eli\ersa ilalla preccdcete per iiioLiIith (a pH 8,95 riinane sullo start, a pH 8,G iiiigra \erso il catoclo (fig. 2).

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Fig. 1. - Fotografia Ji piactra elettroforetica (pII 8,95) tli emoglolhn cli enibrioni t l i 3 (a) , 5 (t) e 7 (c) giorni cli inculazione.

Fig. 2. - Fotografia di piastra (pII 8,95) di cmoglobina di embrioni di 7 (a), 12 (t) e 11 (c) giorni.

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Fig. 3. - Fotogmfia cli piastra (pII 8,6) di emoglobine d i ernbrioni di 12 (a),

1.1 (11) c 20 (c) giorni cli inuuhazione.

Fig. 4. - Fotografia di piastra (pII 8,6) di emoglobina di ernbrione cli 20 giorni (a) e di pulcino di 2 giorni (L).

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Fra il 14" e il 20° gioriio il quadro elettroforetico apparenteniente non si nioclifica: si osservano cliiaralnente 5 frazioni, die a pH 8,G niigrano iina verso il catodo, le altro 4, eon velocitjl diverse, verso I'anoclo (fig. 3).

AiIa nascita seinbra petb clie il quadro elettroforetico si modificlii ulteriormente, con la quasi scomparsa clella frazione piii veloce ( assai cvitlente dal 12" giorno in avanti) (fig. 4).

I)ISCUSSIOXE E COSCLUSIONI.

Anclic sc i risultati esposti non possono aiicora coiisitlerarsi defi- nitivi, in qiianto seiubra clie non tutte le frazioni descritte siano onio- genee, nonpcrtanto si pub concludere clic il quaclro elettroforetico pre- senta notevoli cliter&i iiel corso dello sviluppo.

Fig. 5 - Scliemn rinssrmtivo della cronologia e mobiliti elettroforetica delle

Le cifre inclicnnn i gioriii tli incul~azionc; N - neonnto; S = Start. Aree varie emoglol,ine clcll'embrione di pollo (a pII 8,6).

tratteggiate: preafnzn di cmoglolina, ma in cluaniiti scarci-rima.

Nella fig. 5 110 raccolto, in forma sclieniatica, i clati scaturiti dalle presenti ricerelied confrontancloli insieme a semnda clelja inobiliti elettroforctica, e denoitiinando le frazioni a corm apparentemeiite itlentiea con Iettere aIfahtiche a scopo puramente didascalico. No11 i detto naturalmente eon cib clie Ie frazioni a corm s i d e siano ncces- sariainente uguali dal punto d i vista cliiinico; d'altro canto, perb, frazioni a corsa clivcrsa clcvono necessarianiente differire fra loro per qualchc dettaglio strutturale.

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- 998 - Risulta anzitutto clie si assiste, da u n lato, alla comparsa succes-

siva, sccondo un orrline preciso, cli clivcrsi tipi di emoglol)ina, clic permangono in circolo o transitoriamente o definitivamente, con le riwrve prima csposte: per es., la frazione clie 110 denoniinato d e clie compare per prima, si nianterrebbe fino alla nascita ; cl'altro canto D'Aar ELI0 e SALVO (1961) h n n o dimostrato, con l'immunoelettroforesi, c ~ i c IC prime tluc Emnglo1,ine ein1)rionali scoinpaiono gratlualmente (la1 circolo.

Rla prcbcitlentlo (la cpcstc consitlerazioni, risidtn cliinramente cIie (la1 3" a1 7" giorno si assiste alla comparsa e a1 progrcssivo arricclii- inento in circolo cli diverse fornie cli eiiioglo1)ina (aliuciio 6); fra 1'8" e il 14" giorno sconipaiono siciiranientc 2 frazioni ( la e e la j)' nientre compare nna 7.a frazione ( la g), clrc inigra verso il catotlo e clie perinane fino clop0 la nascita (I'ultimo staclio esaminato). Alla nascita, inoltrc, la frazione a si attenua fino a sconiparire.

Non sianio ancora in graclo tli interpretarc il significato cli tutti qucsti caiii1)ianienti clella costituzione cnioglnbinica nel corso tlello SVilU!1pO enil)rionaIc : essi sono certamentc correlati, in cpIcl ic ma- niera, con i vari focolai cniatopoietici clie si succcclono e con le niodi- ficuzioni fisiologiclie rlcl1'eml)rione e rlepli anncqqi clie su1)entraiio du- rante l'ontogenesi, ilia i tlati a clisposizione sono ancora troppo scarsi per poter trarre qiialclie conclu4one definitiva.

B I B L I 0 G R A F I A

D'AMELIO V., SAL\O A. 31. - dctu EntlrjoZ. Alorph. Exper., 4. 250 (1961). FRASER R. C. - Exp. Cell. Kes., 25, 418 (1961). FRASER R. C. - J . Exper. ZooZ., 156, 185 6196i). IIALBRECIIT I., KLIBAWI.~ C. - A'atnre, li8, 794 (1956). IKCRAM V. N. . IIemoglobin sncl its olnormalities. Tlromas. Springllield, ( 1961). KUMER W. - A'afure, 179, 477 (1957). LEXIEZ L, - iicliwices in Alorphogerresis, 3, 197 (1914). hIAKWELL C., B ~ K E R C. M., ROSL\SShI J. D., FOCI~T fir. - I'roc. Not. dcad. SCi.,

49, 496 (1963). POULIS &I. D. - A'uture, 180, 1477 (1957). RAUKICII L. - Annuli Univ. Ferraru, sez. XIII, 1, 125 (1963).

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D I S C U S S I O N E

N~coi.~rrr - 1) con quaIe tecnica si snno isolate le emoplobine degli em-

2) Dato clic la rcazione lcnzidinica i positiva anclie per le perossidasi, se

Irrioni, sperialiiiente per gli stscli tli 3-1 Fiorni.

si sono aclottate Iireeauzioni per usarc eampioni cli emoglo1)ine pure.

R.\tJhlci[ - 1) Tecnieo: liastotlisrhi di tre giorni rengono espiantati in so-

luzione salina, ripnliti d i tuttn il vitello, tlistesi su piastre tli retro; vengono inrisi i va4 piii grossi e con pipette si nspirano gli critroblnsti.

2) Si E pcnwto ntl evcntuali rrosmoproticli tip0 pcro4daG e citocromi pre- senti in pircnle quantitjl ncgli emolizzati. IIo potuto fare per6 solo il confront0 eletlroforetico eon eitocromo C e peroccidaci \egetale: ambedue hanno un com- portamento clcttrnforetiro acsai direrso; comunqiie nulla si pub dire. D’altroncle andie con le altre colorazioni eitoeromi e pero=irlasi si colorano ugudmentc.

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