KIT$Le$analisi$cromosomiche

Le$analisi$cromosomiche

Lo$studio$dei$cromosomi$costituisce$$una$branca$della$genetica$chiamata$citogenetica

Ogni$specie$è$caratterizzata$da$un$$un$insieme$di$cromosomi,$il$cui$numero$$e$struttura$si$mantengono$costanti$attraverso$le$generazioni

Il# materiale# scritto# in# grassetto# va# riconsegnato# al# CusMiBio.# Il# materiale#restituito# verrà# controllato# alla# consegna.# I# costi# di# eventuali# rotture,#manomissioni#o#strumentazione#mancante#saranno#a#carico#della#scuola.

9#un#fascicolo#con#schede#e#foto#di#cromosomi#metafisici#per#gli#esercizi#(da#scaricare#dal#sito#internet#del#CusMiBio)#9#2#provette#da#1,5#ml#contenenti#preparati#cromosomici#fissati#in#metafase#da#conservare#in#freezer#9#una#scatola#contenente#vetrini#porta#oggetti#9#una#scatola#contenente#vetrini#copri#oggetti#9#reagente#per#la#colorazione#(blu#di#metilene#0,05%)#1$2$micropipette$da$20$microlitri$1$2$scatole$di$puntali$per$micropipette

MATERIALE$NEL$KIT

9#laboratorio#o#aula#con#tavoli/banconi###9#microscopi#ottici#con#obiettivi#4x,#10x#e#40x#9#videoproiettore#9contenitori#per#rifiuti##9matite#e#pennarelli#

MATERIALE$NECESSARIO$A$SCUOLA

TEMPO$RICHIESTO$circa#1,592#ore

Disporre#sul#banco#da#lavoro#il#materiale#in#modo#che#gli#studenti#lavorino#in#due#gruppi.#Ogni#postazione#deve#essere#così#costituita:#•1#vetrino#coprioggetti#e#portaoggetti#per#studente#•1#micropipetta#da#20#microlitri#•1#provette#contenente#la#sospensione#cellulare#•1#falcon#contenente#blu#di#metilene#•microscopi#ottici#•inoltre#sul#banco#di#lavoro#dovranno#essere#presenti#un#contenitore#dei#rifiuti,#una#scatola#di#puntali,#matite#e#pennarelli

Allestimento$del$materiale

Procedimento Uso$micropipetta

• Illustrare#la#portata#massima#di#20#e#minima#di#2#microlitri;#oltre#questi#valori#la#micropipetta#si#rompe#

• Mostrare#ai#ragazzi#come#si#imposta#il#volume#girando#la#rotella#in#alto,#se#si#ruota#verso#sinistra#il#volume#aumenta,#al#contrario#se#si#ruota#a#destra#il#volume#diminuisce.#

• Impostare#lo#strumento#su#5#microlitri,#stando#molto#attenti#al#decimale#dopo#la#virgola#

• Mostrare#ai#ragazzi#come#si#inserisce#il#puntale#sulla#punta#della#micropipetta##semplicemente#appoggiando#lo#strumento#sul#puntale#e#facendo#una#leggera#pressione#

• Spiegare#come#si#preleva#un#volume.#Fare#una#leggera#pressione#sulla#rotella#usata#per#l’impostazione#del#volume#fino#a#quando#non#si#percepisce#una#resistenza,#mantenendo#abbassata#la#rotella#inserire#la#punta#del#puntale#dentro#il#volume#da#prelevare#(#per#esempio#si#può#usare#la#provetta#contenente#acqua)#e#a#questo#punto#lasciare#andare#il#dito#accompagnando#la#rotella#verso#l’alto.##

• Espellere#il#puntale#nel#contenitore#dei#rifiuti#usando#l’apposito#pulsante###############situato#in#alto#sullo#strumento

LE$FASI$DELLA$ATTIVITA’

9 Consegnare#ad#ogni#ragazzo#un#vetrino#sul#quale#scriverà#con#la#matita#il#proprio#nome#sulla#banda#sabbiata#

9 Prendere#dal#freezer#la#sospensione#cellulare#e#risospendere##accuratamente#il#contenuto#picchiettando#sul#fondo#della#provetta##

9 Prelevare#5#microlitri#della#sospensione#cellulare#e#metterli#al#centro#del#vetrino#portaoggetti;#eliminare#il#puntale#nel#contenitore#per#i#rifiuti#

9 Fare#evaporare#il#fissativo#lasciando#il#vetrino#all’aria#per#pochi#minuti#9 Prelevare#10#microlitri#di#blu#di#metilene#e#metterli#al#centro#del#vetrino#

portaoggetti;#eliminare#il#puntale#nel#contenitore#per#i#rifiuti#9 Coprire#con#il#coprioggetti#cercando#di#evitare#la#formazione#di#bolle#di#aria#9 Osservare#le#metafasi#al#microscopio#fino#ad#un#ingrandimento#40x

Ingrandimento$40x

Cariotipo$normale$o$patologico?

$ Come#interpretare#le#immagini:$

Femmina$normale#�$46#cromosomi#(XX)$# Cromosomi#acrocentrici#corti:# 4$ $^#^# ##^#^## # # # # # ##21# ##22#

Maschio$normale#�##46#cromosomi#(XY)$# Cromosomi#acrocentrici#corti:# 5# #^#^# ##^#^# ^## # # # # # ##21# ##22# Y#

Alla#fine#della#attività#pratica#consegnare#le#immagini#dei#cariotipi#da#analizzare

Down$$�$ 47#cromosomi#(XX)$# Cromosomi#acrocentrici#corti:#5$ $$^#^#^## ####^#^## # # # # ####21##### ####22#Down$�#$$ 47#cromosomi#(XY)$$ Cromosomi#acrocentrici#corti:#6# ##^#^#^###########^#^# #^$# # # # # ####21# #####22# #Y#Klinefelter#�$$ 47#cromosomi#(XXY)$$ Cromosomi#acrocentrici#corti:#5$ $$$^#^$$$ $$$$^#^# #^$# # # # # ####21# #####22# #Y#XYY#�# # 47#cromosomi#(XYY)$# Cromosomi#acrocentrici#corti:#6# ###^#^$$$ $$$^#^# #^^## # # # # ####21# ####22# #YY

Cariotipi$patologici

Perché$studiare$i$cromosomi?

�$Patologia$cromosomica

�#Nelle#cellule$tumorali#sono#presenti#anomalie#$cromosomiche

�$Studio#della$struttura$e$funzione$dei#cromosomi

Patologia$cromosomica

1.$ANOMALIE$DEL$NUMERO#ANEUPLOIDIE$e$POLIPLOIDIE

2.$ANOMALIE$DELLA$STRUTTURA$MUTAZIONI$$CROMOSOMICHE

ALTERAZIONI$DEL$DOSAGGIO$GENICO$LETALITA’#PRE9#o#POST9NATALE#

ANOMALIE#FENOTIPICHE

ANEUPLOIDIE$VITALI$NELL’UOMO$e PATOLOGIE$ASSOCIATE

AUTOSOMI CROMOSOMI$DEL$SESSO

CARIOTIPO SINDROME TIPO$DI$ANEUPLOIDIA$ CARIOTIPO$ SINDROME TIPO$DI$ANEUPLOIDIA$

47,XX$o$XY$ Patau trisomia 45,X0$ Turner monosomia

47,XX$o$XY Edwards trisomia 47,XXX$48,XXXX$

trisomia$tetrasomia

47,XX$o$XY$ Down trisomia 47,XXY$48,XXXY

Klinefelter trisomia$tetrasomia

47,XYY Doppio$Y trisomia

h"p://learn.gene-cs.utah.edu/content/basics/karyotype/888h"p://www.biology.arizona.edu/human_bio/ac-vi-es/karyotyping/karyotyping.html888

Link8e8App88

App:8Karyotyping8free8(Carolina8Biological8Supply)88

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