Fassio cefar 2011

Valutazione della introduzione della diagnostica Microarray in allergologia dal punto di vista tecnico-

analitico e possibili risvolti clinici

Maria Totaro Filippo Fassio

Con il patrocinio di

SIBioCSocietà Italiana di Biochimica Clinicae Biologia Molecolare Clinica

AOU-CareggiImmunologia e Terapie CellulariDirettore Prof. E. Maggi

Corso di AggiornamentoXX^ Edizione Corso CEFARLE PROTEINE:dal laboratorio alla clinica20 ottobre 2011 Firenze

Diagnostica allergologica - Cronologia

1880 1967 1988-91 1995-1999 2000

In-vivo testing

In-vitro testing

Provocation test

Caratterizzazione delle IgE

2007

RAST*

Primi allergeni clonati

Pannelli con allergeni ricombinanti

Primo biochip con determinanti allerg.

Diffusione mondiale

ImmunoCAP ISAC ®

Component-resolved diagnosis

Cos'è un biochip ?

E’ un supporto solido sul quale differenti molecole native e ricombinanti sono state fissate in una precisa disposizione così da formare un array microscopico.

Questo permette il monitoraggio simultaneo e in parallelo delle Interazioni biologiche con piccole quantità di campione e di reagenti.

~ 100 picogrammi allergene / spot> 100 allergeni / cm²

~ 200 µm

Array = disposizione, matriceMicro = microscopica

Component Resolved Diagnosis

Gli estratti allergenici contengono sia molecole allergeniche che non allergeniche e sono difficili da standardizzare.

I cosidetti pan-allergeni sono presenti in diverse fonti allergeniche e inducono cross-reattività tra gli estratti allergenici.

Le singole molecole allergeniche sono markers di una reale sensibilizzazione nei confronti di una fonte allergenica.

Il microarray: nella pratica…

Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari

Allergopatie respiratorie

Allergia al latex

Allergeni meno frequenti

Allergia alimentare

Discriminare tra co-sensibilizzazione e cross-reazione

Identificare i pazienti più idonei all’immunoterapia

CRD: allergopatie respiratorie…


http://milano.blogosfere.it/images/asma.jpg



Michele, 47 anni, soffre da alcuni anni di rinocongiuntivite nel periodo primaverile. Il suo

medico lo invia all’allergologo, che effettua prick test.

Graminacee +++Betulla ++Olivo ++

…co-sensibilizzazione o cross-reazione?



Co-sensibilizzazione!(Graminacee, Olivo, Betulla)

CRD: questa “ovviamente” è…


Cross-reazione!(solo Graminacee con Phl p 12: Profilina)

CRD: oppure no?





Allergia al latex


Allergia alimentare

CRD: latex… Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari

Marta, paziente di 38 aa, lavora come cuoca.Soffre di asma bronchiale di grado lieve, con sporadici

attacchi d’asma in vari momenti della giornata, sia a casa che al lavoro.

Marta sa già di essere allergica ad alcuni pollini ed all’acaro della polvere, ma….

CRD: latex… Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari




Allergia al latex


Allergia alimentare

CRD: allergeni meno frequenti…


http://images.google.it/imgres?imgurl=http://gianruggeromanzoni.files.wordpress.com/2008/10/ape2.jpg&imgrefurl=http://gianruggeromanzoni.wordpress.com/2008/10/08/quando-le-api-spariranno-la-natura-ci-presentera-il-conto/&usg=__vN5MQZ2nftcI-PCFMapWrR9-p5Y=&h=343&w=400&sz=35&hl=it&start=7&sig2=OcOz3zZWCOnuPV65uAmRmw&um=1&itbs=1&tbnid=AROhmZnbMOMIsM:&tbnh=106&tbnw=124&prev=/images?q=api&hl=it&sa=N&um=1&ei=K0t4S4WEHI-6sAa6wPDeDQ

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.osha.gov/SLTC/etools/hospital/hazards/images/latex.jpg&imgrefurl=http://www.osha.gov/SLTC/etools/hospital/hazards/latex/latex.html&usg=__q7EClX_Y3s4XwoniOoCK7QMBr_s=&h=205&w=205&sz=16&hl=it&start=7&sig2=WNfnqjVsGG_ZJK1oeMVX8w&um=1&itbs=1&tbnid=i8JmBvywxXHVBM:&tbnh=105&tbnw=105&prev=/images?q=latex+gloves&hl=it&um=1&ei=dEt4S9f1GcicsAbf_4WsCg

Franco, 44 anni, con rinite ed asma bronchiale, giunge all’osservazione per recente peggioramento della sintomatologia

Continua la tp già in atto da 3 anni con CCS nasali ed associazione CCS + beta2agonista inalatorio, che fino a pochi mesi prima aveva garantito un ottimo

controllo della sintomatologia

Il PT conferma le precedenti polisensibilizzazioni a pollini ed acari, senza sostanziali modifiche

Il paziente nega sostanziali modifiche al proprio stile di vita (casa,lavoro, sport, hobbies…)



Sarebbe emersa la positività senza un test multiplex?



http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.blogalileo.com/wp-content/uploads/2009/01/domanda.jpg&imgrefurl=http://www.blogalileo.com/perche-nelle-domande-utilizziamo-il-punto-interrogativo/&usg=__0enf0EdCJctY95f1RNzu_B2o61w=&h=273&w=306&sz=12&hl=it&start=27&sig2=6gjEyyi0WiBd24o1kFlkoQ&um=1&itbs=1&tbnid=5RYj_OGwzmvoMM:&tbnh=104&tbnw=117&prev=/images?q=domanda&ndsp=18&hl=it&sa=N&start=18&um=1&ei=B0x4S7TjK8ybsAaExJWsCg




Allergia al latex


Allergia alimentare

CRD: allergia alimentare…


Una giovane paziente si rivolge allo specialista allergologo a causa di episodi recidivanti di

angioedema...

gli episodi erano iniziati fin dall’infazia ed erano scatenati dall’assunzione di frutta con guscio...



Il prick test è risultato positivo per:

• Nocciola (+++)• Noce (+/-)

• Pinolo (+/-)

http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.hkbh.org.hk/en/images/service_allergy1.jpg&imgrefurl=http://www.hkbh.org.hk/en/313_allergy.htm&usg=__z-ebpYNYhpSXUXL12RBGYTTsq0s=&h=150&w=210&sz=23&hl=it&start=284&tbnid=RIBt9ktHGSB6EM:&tbnh=76&tbnw=106&prev=/images?q=prick+test&gbv=2&ndsp=18&hl=it&sa=N&start=270



Dosaggio IgE totali (RIST): 37 kU/l

Dosaggio IgE specifiche per inalanti: tutte < 0.10 kUI/l

Dosaggio IgE specifiche per alimenti:

• Nocciola 3,07 kUI/l• Noce 0,12 kUI/l



Cor a 1: Bet v 1-homologue (PR-10)

Cor a 2: profilina (omologo Bet v 2)

Cor a 8: LTP

Cor a 9: 11S globulin (omologo Ara h 3)



A cosa è allergica la paziente?

Cor a 1

Cor a 8

Cor a 2

Cor a 9



…ed il risultato esatto è…

Negativo!

…confermato su ImmunoCAP(Cor a 1, Cor a 8, Bet v 2)

http://images.google.com/imgres?imgurl=http://www.labraqui.com/immunocap/imagenes/ImmunoCAP250.jpg&imgrefurl=http://www.labraqui.com/immunocap/equipos.html&usg=__7ewj8Y-R7YRhMx2uA1n1ozbiRtw=&h=232&w=250&sz=29&hl=it&start=2&um=1&tbnid=e_ftlFa9vdx8AM:&tbnh=103&tbnw=111&prev=/images?q=immunocap&ndsp=20&hl=it&rls=com.microsoft:it:IE-SearchBox&rlz=1I7GGLL_it&sa=N&um=1



…perché 103 molecole sono molte…

…ma in natura ce ne sono DI PIU’…

Ed alla fine…Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari

vs

…alla prossima puntata…

Grazie!

[email protected]

Università degli Studi di Firenze SOD Immunoallergologia Winter School SIAIC 20 Febbraio 2010

Fassio cefar 2011

Health & Medicine

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