Universidad de La Salle Universidad de La Salle

Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle

Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias

2007

Dinámica folicular en hembras bovinas cebuinas sincronizadas Dinámica folicular en hembras bovinas cebuinas sincronizadas

mediante dispositivo intravaginal nuevo y usado mediante dispositivo intravaginal nuevo y usado

Ivan Dario Camelo Cifuentes Universidad de La Salle, Bogotá

Yholmar Alfonso Zorro Lamus Universidad de La Salle, Bogotá

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Citación recomendada Citación recomendada Camelo Cifuentes, I. D., & Zorro Lamus, Y. A. (2007). Dinámica folicular en hembras bovinas cebuinas sincronizadas mediante dispositivo intravaginal nuevo y usado. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/medicina_veterinaria/105

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DINAMICA FOLICULAR EN HEMBRAS BOVINAS CEBUINAS SINCRONIZADAS MEDIANTE DISPOSITIVO INTRAVAGINAL NUEVO Y

USADO

IVAN DARIO CAMELO CIFUENTES

YHOLMAR ALFONSO ZORRO LAMUS

UNIVERSIDAD DE LA SALLE FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA

BOGOTÁ, D.C. 2007

DINAMICA FOLICULAR EN HEMBRAS BOVINAS CEBUINAS SINCRONIZADAS MEDIANTE DISPOSITIVO INTRAVAGINAL NUEVO Y

USADO

IVAN DARIO CAMELO CIFUENTES Código: 14002091

YHOLMAR ALFONSO ZORRO LAMUS Código: 14002088

Trabajo de grado presentado como requisito parcial para optar por el título de Médico Veterinario

DIRECTOR Dra. MARIA TERESA GAVIRIA SCIOVILLE

Médica Veterinaria

UNIVERSIDAD DE LA SALLE FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA

BOGOTÁ, D.C. 2007

UNIVERSIDAD DE LA SALLE

DIRECTIVAS RECTOR Hno. FABIO GALLEGO ARIAS F.S.C VICERRECTOR ACADÉMICO Hno. CARLOS GABRIEL GÓMEZ RESTREPO F.S.C. VICERRECTOR DE PROMOCIÓN Y DESARROLLO HUMANO Hno. EDGAR FIGUEROA ABRAJIM F.S.C. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO DR. MAURICIO FERNÁNDEZ FERNÁNDEZ SECRETARIO GENERAL DR. GUILLERMO PANQUEVA MORALES DECANO DR. PEDRO PABLO MARTÍNEZ MÉNDEZ SECRETARIA ACADÉMICA DRA. MARIA TERESA URIBE MALLARINO DIRECTOR DE LA CLINICA VETERINARIA DR. HUMBERTO VASQUEZ ROMERO

NOTA APROBATORIA

_____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________

_____________________________________ DRA. MARÍA TERESA URIBE MALLARINO

SECRETARIA ACADÉMICA

_____________________________________ Dra. MARÍA TERESA GAVIRIA SCIOVILLE

DIRECTOR TRABAJO DE GRADO

_____________________________________ DR. JOSE CARLOS COEHLO DE OLIVEIRA

JURADO

_____________________________________ DR. FERNANDO AGUSTIN ESCOBAR

JURADO

COMPROMISO

Ni la Universidad, ni el asesor, ni el jurado calificador son responsables de las ideas expuestas por los graduandos. Los trabajos de grado, no deben contener ideas que sean contrarias a la doctrina de la iglesia católica, en asuntos de dogma y moral.

AGRADECIMIENTOS

Los Autores expresa sus agradecimientos a: La UNIVERSIDAD DE LA SALLE especialmente a la Facultad de Medicina Veterinaria. A la Dra. María Teresa Gaviria Scioville, Directora del estudio, Profesora y amiga, por todas sus enseñanzas, conocimiento, apoyo constante, paciencia y colaboración desinteresada. Los dueños y trabajadores de la Ganadería “la Maria”, por toda su entrega y colaboración durante todo el proceso. A Nohora Silvia Cifuentes, Rubén Darío Camelo, Julio Cesar Camelo, Alfonso Zorro y Esperanza Lamus, por todo su amor, apoyo incondicional durante este proceso, su ejemplo de vida, paciencia, enseñanza y colaboración. A El Dr. Ignacio Videla Dorna y al Dr. Lucas Cutaia De Laboratorios Syntex S.A. Por haber confiado en nuestro trabajo y apoyarnos desde un principio. Gracias por su patrocinio desinteresado.

DEDICATORIA

En primer lugar dedico este trabajo a Dios, ya que no es posible avanzar en ningún aspecto de nuestra vida sin su bendición; a mis padres porque han sabido educarme con amor y orientarme hasta este momento, por su apoyo, dedicación y esfuerzo, por brindarme todos los valores que hoy hacen de mi la persona que soy; A mi hermana, por su amor incondicional, por compartir conmigo toda su vida, y participar con su respaldo para que este sueño se convierta en realidad. A mi tío Julio, por confiar en mí y darme la oportunidad de estudiar esta carrera, por todo ese gran cariño reflejado en el respaldo de todos los sueños que he emprendido, por su ejemplo de vida, su entrega y sacrificio por verme convertido en profesional; a mi novia Lady por acompañarme y estar todo este tiempo a mi lado brindándome su amor y su aliento; a mis amigos (Anita, Bibiana, Camilo) que han estado apoyándome todo el tiempo y compartiendo continuamente su vida conmigo; a la Doctora Maria Teresa Gaviria quien mas que una directora en este proyecto ha sido una amiga incondicional y confió en mí desde un principio para llevar a cabo este proyecto; por ultimo, pero no menos importante, quiero hacer una mención especial para una persona que fue mi amiga y el motor principal de este proyecto desde un comienzo: Aurita, solo espero que desde el cielo estés complacida con la dirección que le di a este proyecto, que tu me entregaste un día cuando dejaste de brillar, gracias por tu presencia en mi vida porque has llegado a cambiarla, aun ahora que tu ausencia me ha marcado y me ha impulsado a ser mejor y llevar a termino uno de tus grandiosos sueños. Iván Camelo Yholmar Zorro; dedico a Dios, a mis padres (Alfonso y Esperanza), mis hermanos (Eduard, Margery y Andrea), mis amigos y demás familiares que siempre estuvieron en todos los momentos buenos y malos para poder apoyarme, y a un gran numero de personas que colaboraron en este proyecto para que saliera adelante. Yholmar Zorro

CONTENIDO Pág. RESUMEN INTRODUCCIÓN 1

1. OBJETIVOS 4 1.1. OBJETIVO GENERAL 4 1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 4 2. MARCO TEORICO 5 2.1 EL CICLO ESTRAL BOVINO 5 2.2 ONDAS DE DESARROLLO FOLICULAR 5 2.2.1 Dinámica De Las Ondas De Desarrollo Folicular 8 2.2.2 Regulación Del Desarrollo Folicular 9 2.2.3 Dinámica Folicular En Ganado Bos indicus 10 2.4 PROPIEDADES DEL ULTRASONIDO 13 2.4.1 El Ultrasonido En La Reproducción 15 2.4.1.1 Estructuras Ováricas Como Ayudas Diagnósticas 16 2.4.1.2 Folículos Ováricos 17 2.4.1.3 Ondas Foliculares 18 2.4.1.4 Cuerpos Lúteos 18 2.4.1.5 Limitantes Diagnósticas de la Imagen Ultrasónica 19 2.4.1.6 Diagnóstico Precoz de Preñez 20 2.5 TRATAMIENTOS DE SINCRONIZACIÓN DE LA OVULACIÓN E IATF

22

2.5.1 Protocolos Con Dispositivos Con Progesterona Y Estradiol 23 2.5.2 Tratamientos Con Dispositivos con P4 y eCG 24 3. MATERIALES Y METODOS 27 3.1 LOCALIZACIÓN 27 3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 28 3.3 VARIABLES 28 3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO 29 3.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS 29 3.5.1 Periodo de Evaluación 29 3.5.2 Protocolo De Sincronización De La Ovulación e Inseminación Artificial a Tiempo Fijo

29

3.5.3 Seguimiento de la Dinámica Folicular 30 3.5.4 Inseminación Artificial 32 3.5.5 Diagnostico de Gestación 33

Pág. 4. RESULTADOS Y DISCUSION 34 4.1 ANALISIS DESCRIPTIVO DE LAS VARIABLES QUE DETERMINAN LA DINAMICA FOLICULAR EN LOS TRES TRATAMIENTOS

34

4.1.1 Número De Ondas Foliculares 34 4.1.1.1 Porcentaje De Presentación De Ondas Foliculares 34 4.1.2 Día De Emergencia De La Onda Folicular Y Numero De Onda Foliculares

35

4.1.3 Número De Folículos 39 4.1.4 Tasa De Crecimiento Y Diámetro Del Folículo Dominante 41 4.1.5 Tasa De Crecimiento Y Diámetro Del Folículo Subordinado 42 4.2 TASA DE PREÑEZ 47 5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 54 5.1 CONCLUSIONES 54 5.2 RECOMENDACIONES 56 BIBLIOGRAFIA 58 ANEXOS 77

LISTA DE TABLAS

Pág. Tabla 1. Características del Elemento Vs. Velocidad de Propagación

14

Tabla 2. Día de la primera detección de características identificables en el concepto bovino

21

Tabla 3. Datos Descriptivos Del Numero De Ondas Foliculares 34 Tabla 4. Relación Porcentual De La Presentación De 2 Ondas Foliculares

35

Tabla 5. Datos Descriptivos Del Día De Emergencia De Las Ondas Foliculares

36

Tabla 6. Datos Descriptivos Del Número De Folículos 40 Tabla 7. Datos Descriptivos del diámetro del Folículo dominante y su Tasa de Crecimiento

41

Tabla 8. Datos Descriptivos del diámetro del Folículo Subordinado y su Tasa de Crecimiento

43

Tabla 9. Descriptiva del Porcentaje de Preñez 48

LISTA DE GRAFICAS

Pág. Gráfica 1. Descriptiva Del Numero De Animales Que Presentaron 1 Y 2 Ondas Foliculares

35

Gráfica 2. Día De Emergencia De La Onda Folicular 36 Gráfica 3. Descriptiva Del Número De Folículos 40 Gráfica 4. Descriptiva Del Diámetro Del Folículo Dominante Y Su Tasa De Crecimiento

42

Gráfica 5. Descriptiva Del Diámetro Del Folículo Subordinado Y Su Tasa De Crecimiento

43

LISTA DE FIGURAS

Pág. Figura 1. Descripción del modelo de Dinámica Folicular 7 Figura 2. Porcentajes de preñez en función de la condición corporal en vacas tratadas (n=678) o no (n=9668) con 400 UI de eCG (P>0,1)

25

Figura 3. Porcentaje de preñez en función del porcentaje de ciclicidad del rodeo en vacas tratadas o no con 400 UI de eCG. Las tasas de preñez difieren entre las vacas en anestro tratadas o no tratadas con eCG (P<0,01)

26

Figura 4. Localización del municipio de Tame en el departamento de Arauca

27

Figura 5. División Política del municipio de Tame 28 Figura 6. Protocolo de sincronización de celo mediante inserción de dispositivo intravaginal liberador de progesterona

30

Figura 7. Ecógrafo Pie Medical Falco 100 31 Figura 8. Medición del Diámetro Folicular Con el Software EVIEW® Pie Medical Equipment B. V. ©

32

RESUMEN La eficiencia reproductiva es un aspecto por mejorar en la altillanura colombiana ya que afecta en forma directa el retorno económico de las explotaciones ganaderas. Estrategias como la implementación de protocolos de inseminación a tiempo fijo, marcan un sendero a seguir para disminuir las perdidas económicas, debido a la ineficiencia en la detección de celos. El objetivo de este trabajo es comparar, mediante seguimiento por medio de ultrasonografía transrectal seriada, la dinámica folicular, la tasa de concepción y la tasa de preñez en hembras bovinas cebuínas sincronizadas mediante Dispositivo Intravaginal (DIB-Syntex®) nuevo y reutilizado por segunda y tercera vez. En el presente estudio se trabajaron 60 hembras Brahman (Bos indicus) con una condición corporal superior a 7 en la escala de 1 a 9, en edades entre 2 y 6 años, distribuidos en tres grupos homogéneos de 20 animales pastoreando en praderas de Brachiaria humidicola y gramas nativas; posteriormente, fueron seleccionadas 6 novillas de cada grupo en las que se realizo el seguimiento ecográfico de la dinámica folicular durante 9 días. El perfil de dinámica folicular para cada animal se baso en el análisis retrospectivo de los datos obtenidos en la ultrasonografía de cada folículo detectado a partir de 3 mm. Los animales del grupo 2 presentaron un número promedio de folículos de 6.7135 ± 1.5238, seguido por el grupo 1 con 6.3075 ± 1.4774 folículos y el grupo 3 con 5.7552 ± 1.3708 folículos. Se puede afirmar con certeza que los animales del tratamiento 2 desarrollaron una mayor cantidad de folículos, ya que existe diferencia significativa entre las medias de los tres tratamientos (p < 0.05). El numero de ondas foliculares para el tratamiento 1 fue de 1.4 ± 0.5071, del tratamiento 2 de 1.5 ± 0.5345 ondas y del tratamiento 3 de 1.6 ± 0.4924 ondas (P>0.05). El folículo dominante de los animales del tratamiento 3 alcanzó un diámetro de 10,433 ± 1,3760 mm con una tasa de crecimiento de 0.9267 ± 0,5519 mm/día, mayor al diámetro del tratamiento 2 de 10,071 ± 1.9754 mm con una tasa de crecimiento de 0,6886 ± 0,2830 mm/día y del tratamiento 1 con 9,4200 ± 1.2491 mm de diámetro con tasa de crecimiento de 0,8033 ± 0,4738 (P>0.05). Los animales de los tres tratamientos no mostraron diferencias significativas durante el periodo de seguimiento de la dinámica folicular, a pesar de ser sincronizados con dispositivos nuevos y usados por segunda y tercera vez. La tasa de preñez para el tratamiento 3 fue del 50 %, seguida por el tratamiento 1 con un 45% y por ultimo, el tratamiento 2 alcanzo un 31.6%, donde se puede observar que existe una diferencia significativa entre los tratamientos, (P = 0.4869; χ2 = 1.44). Las altas concentraciones de progesterona liberadas por los dispositivos intravaginales de primer uso disminuyen la frecuencia de liberación de LH y por consiguiente pueden retrasar o disminuir el crecimiento folicular, afectando la maduración del folículo preovulatorio y disminuyendo la tasa de preñez.

ABSTRACT The reproductive efficiency is an aspect to improve in the Colombian altillanura since it affects in direct form the economic return of the cattle operations. Strategies as the implementation of protocols of in time fixed insemination, mark a footpath to follow to diminish lost the economic ones, due to inefficiency in the detection of fervor. The objective of this work is to compare, by means of pursuit by means of transrectal ultrasonography, follicular dynamics, the rate of conception and the rate of pregnancy in synchronous bovine females by means of Intravaginal Device (DIB-Syntex®) new and reused by second and third time. In the present study 60 females worked Brahman (Bos indicus) with a corporal condition superior to 7 in the scale from 1 to, in ages between 2 and 6 years, distributed in three homogenous groups of 20 animals shepherding in prairies of native Brachiaria humidicula and natives gramas; later, 6 heifers of each group were selected for the ecográfic pursuit of follicular dynamics during 9 days. The profile of follicular dynamics for each animal was based on the retrospective analysis of the data collected in the ultrasonography of each follicle detected from 3 mm. The animals of group 2 presented a number average of 6,7135± 1,5238, followed by group 1 with 6,3075 ± 1,4774 follicles and the group 3 with 5,7552 ± 1,3708 follicles. It is possible to be affirmed with certainty that the animals of treatment 2 developed a greater amount of follicles, since significant difference between the averages of the three treatments (p < 0,05). The number of follicular waves for treatment 1 was of 1,4 ± 0,5071, the treatment 2 of 1,5 ± 0,5345 waves and treatment 3 of 1,6± 0,4924 waves (P >0.05). The dominant follicle of the animals of treatment 3 reached a diameter of 10.433 ± 1.3760 mm with a rate of growth of 0,9267 ± 0.5519 mm/day, greater to the diameter of the treatment 2 of 10.071 ± 1,9754 mm with a rate of growth of 0.6886 ± 0.2830 mm/day and of the treatment 1 with 9.4200 ± 1,2491 mm of diameter with rate of growth of 0.8033 ± 0.4738 ± (P>0.05). The animals of the three treatments did not show significant differences during the period of pursuit of follicular dynamics, in spite of being synchronous with devices new and used by second and third time. The rate of pregnancy for treatment 3 was of 50%, followed by treatment 1 with a 45% and finally, treatment 2 reach 31,6%, where can be observed that a significant difference between the treatments exists, (P = 0.4869; x 2 = 1,44). The high concentrations of progesterone released by the intravaginal devices of first use diminish the frequency of LH liberation and therefore they can delay or diminish the follicular growth, affecting the maturation of the follicle preovulatory and diminishing the rate of pregnancy.

INTRODUCCION La ganadería Bovina de Carne es una actividad generalizada y desarrollada

prácticamente en todo el país, considerada como un renglón socioeconómico de

gran importancia para el desarrollo del campo. El sector ganadero esta

caracterizado por la generación de empleo e impulso al desarrollo social y

participa con una representativa contribución al producto interno bruto (PIB) con el

3.5% en el Producto Interno Bruto (PIB) Nacional, 26% del PIB Agropecuario y el

56% del PIB Pecuario. Esta establecido que de 1.730.000 predios dedicados a la

actividad agropecuaria, cerca de 849.000, equivalentes al 49%, tienen algún grado

de actividad ganadera, ratificando la gran importancia de esta actividad para el

sector rural y, en general, para la economía nacional (DANE, 2006). Por lo anterior

la Ganadería Bovina amerita una mayor atención para encontrar mayores niveles

de productividad, que la hagan competitiva y le permitan el protagonismo

necesario para enfrentar los grandes desafíos económicos del país frente a la

globalización de mercados.

La optimización de la eficiencia reproductiva en ganaderías de carne de la

altillanura Colombiana es uno de los principales factores que contribuyen para

garantizar el retorno económico de una explotación ganadera en esta región. Sin

lugar a dudas, la tasa de preñez, tiene un impacto muy importante sobre la

situación económica de un establecimiento de cría. Lograr un ternero por vaca al

año es el ideal de un sistema de producción bovina, para este fin es necesario que

posteriormente al periodo de gestación, las hembras deberían estar preñadas de

nuevo a los 82 días de paridas (Baruselli, 2003). Tomando en consideración los

40 a 60 días de recuperación de la capacidad reproductiva después del parto que

tiene una vaca de cría en condiciones de pastoreo, las vacas disponen solo de un

1

celo o dos para lograr la preñez siguiente y mantener el intervalo entre partos de

12 meses; asimismo obtener vacas que tengan cría mas temprano también tiene

ventajas económicas inmediatas. La ventaja mas importante es que el ternero de

esas vacas será de mayor edad al destete y por lo tanto mas pesado.

El principal objetivo de la implementación de la Inseminación Artificial (IA) en

explotaciones ganaderas de cría es el producir un progreso genético en el

establecimiento. No obstante, según Thibier, M., Wagner, H. G., citados por G. Bó (2001) afirman que menos del 1% de los rodeos bovinos de los países de

MERCOSUR utilizan inseminación artificial como herramienta en un programa de

mejoramiento genético. Dentro de las causas más importantes que dificultan el

uso masivo de esta tecnología están los relacionados con el manejo y la

ineficiencia en la detección de celos de los animales. La alternativa mas útil parta

aumentar significativamente el número de animales inseminados es la utilización

de protocolos que permite realizar la IA sin la necesidad de la detección de celos,

denominada Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF). Sin embargo, el costo

elevado de los tratamientos dificulta la utilización de esta herramienta; el

establecimiento de técnicas que contribuyan a la disminución en los costos que

genera un programa de sincronización de la ovulación es una alternativa atractiva

para garantizar un mayor retorno económico para el productor con una inversión

cada vez menor.

En un programa de IATF el resultado ideal esperado, es un porcentaje de

concepción del 60%, para obtener un porcentaje de preñez de un 50% (Cutaia, 2005). Sin embargo, según Burke C. y R. Mussard, citados por G. Bó (2001)

esto varia de acuerdo con la condición corporal de la vaca, si esta cíclica o

anéstrica, la etapa del ciclo estral en que se encuentra al momento de la

2

sincronización, los días de emergencia y tamaño del folículo al momento de retirar

el dispositivo.

En el presente trabajo se quiere dar a conocer, la dinámica folicular en hembras

bovinas cebuínas sincronizadas mediante Dispositivo Intravaginal (DIB-Syntex®)

nuevo y reutilizado por segunda y tercera vez, en donde se tendrán en cuenta los

diámetros de los folículos dominantes, subordinados, y el

número de ondas foliculares. La finalidad de esta investigación es demostrar que

es posible disminuir los costos de los tratamientos para posibilitar el uso de la

IATF como un instrumento cotidiano en las explotaciones de cría del país.

3

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL Determinar si existe diferencia en la dinámica folicular y tasa de preñez de

hembras bovinas cebuinas, debido a los efectos generados por la sincronización

de celo, mediante el uso de Dispositivo Intravaginal Bovino (DIB - Syntex®) nuevo

y reutilizado por segunda y tercera vez.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Comparar el perfil de dinámica folicular de hembras cebuínas sincronizadas con

dispositivo intravaginal bovino (DIB - Syntex®) nuevo y reutilizado por segunda y

tercera vez por medio de ultrasonografía transrectal.

Comparar la tasa de concepción en hembras bovinas cebuinas sincronizadas con

dispositivo intravaginal bovino (DIB - Syntex®) nuevo y reutilizado por segunda y

tercera vez.

Comparar la tasa de preñez en hembras bovinas cebuinas sincronizadas con

dispositivo intravaginal bovino (DIB - Syntex®) nuevo y reutilizado por segunda y

tercera vez.

4

2. MARCO TEORICO Y ESTADO DEL ARTE 2.1 EL CICLO ESTRAL BOVINO

El ciclo estral bovino hace referencia a la serie de procesos que ocurren al inicio

de la pubertad y se suceden cíclicamente en el ovario, el tracto reproductivo y en

la vaca, Con un promedio de 21 días de duración. Tomando como base el día del

estro para el inicio del nuevo ciclo, consideremos las cuatro fases clásicas del ciclo

con sus procesos endocrinos característicos: el metaestro, período de formación

del cuerpo lúteo a partir del folículo ovulado, al final del cual se establece la

producción de progesterona en una curva ascendente; el diestro, período

caracterizado por la estabilización de la producción de progesterona hasta llegar a

la meseta de concentración; el proestro, período de cambios hormonales

caracterizado por la producción endometrial de prostaglandina F2α, la lisis del

cuerpo lúteo y la caída de la progesterona, el pico de FSH, el pico de estradiol e

inhibina; y el estro, durante el cual se presenta predominantemente el pico

preovulatorio de LH (Knickerbocker, 1986). Lo anterior se podría considerar

corno la definición clásica de los eventos hormonales del ciclo estral.

2.2 ONDAS DE DESARROLLO FOLICULAR

El proceso de continuo crecimiento y regresión – atresia - de los folículos antrales,

que conduce al desarrollo de un folículo dominante, es la definición para la

dinámica folicular. Una onda de desarrollo folicular implica el crecimiento de un

gran número de folículos antrales de pequeño diámetro (2 – 4 mm) que se

hacen evidentes ultrasonográficamente (4 – 5 mm). La selección del folículo

5

dominante y la regresión -atresia - de los folículos subordinados, para llegar

finalmente a la atresia o la ovulación del folículo dominante si persiste o no el

cuerpo lúteo -o las concentraciones de progesterona del diestro (Kastelic, 1994).

La dinámica folicular esta conformada por tres procesos:

Reclutamiento. Es el periodo en el cual un grupo -cohorte- de folículos dan inicio a

su maduración bajo un ambiente de gonadotropinas propicio que permita su

desarrollo hasta la ovulación.

Selección. Es el proceso de escogencia de un solo folículo de la cohorte reclutada,

el cual no sufre atresia y adquiere el potencial para llegar a ovular.

Dominancia. Es el proceso por el cual el folículo dominante seleccionado inhibe el

surgimiento de una nueva cohorte de folículos (Lucy, 1992, Ginther, 1996).

La maduración folicular ocurre en oleadas a lo largo del ciclo estral, que implican

el reclutamiento de una cohorte de folículos -lo cual parece empezar con el

reclutamiento de un grupo de folículos primarios varios ciclos atrás- que se hacen

visibles como cohorte por ultrasonografía, entre 4 – 5 mm de diámetro; una vez se

detecta la onda folicular ésta sigue creciendo hasta que dos días después se

evidencia el crecimiento de un folículo que sobresale de la cohorte y se hace

dominante - con un diámetro aproximado de 8 mm - en tanto que los demás

folículos cesan su crecimiento y se denominan folículos subordinados. Una vez se

evidencia la dominancia folicular continúa una fase de crecimiento del folículo

dominante hasta que alcanza su diámetro preovulatorio de 18 - 22 mm en ganado

de leche y de 14 - l8mm (Anderson, 1994) e incluso 10 mm (Rhodes, 1995)

en ganado de carne; éste se mantiene durante varios días

6

Figura 1. Descripción del modelo de Dinámica Folicular

WEBB, P.C. Garnsworthy, J.-G. Gong, and D. G. Armstrong Control of follicular growth: Local interactions and

nutritional influences1, 2 R. J. Anim. Sci.. 82(E. Suppl.) p. E63–E74. 2004.

Fase estática: hasta un punto en el cual empieza la fase de degeneración si su

período de latencia concuerda con el predominio de las concentraciones de

progesterona típicas del diestro. Las fases de crecimiento y estática abarcan a su

vez el período de dominancia. Las vacas y novillas que ovulan oocitos a partir de

folículos en fase de crecimiento tienen tasas de concepción significativamente

mayores, a comparación con aquellas que ovulan de folículos persistentes

(Anderson, 1994).

Se ha detectado que las vacas pueden tener ciclos estrales de dos o de tres

ondas foliculares en promedio, aunque, se pueden encontrar ciclos estrales de

una sola onda o de cuatro ondas foliculares. Estudios hechos en novillas Brahman

han demostrado que una misma hembra puede presentar ciclos de dos, tres y

cuatro ondas foliculares, dependiendo de diversos factores que sugieren

7

adaptaciones de la hembra a las cambiantes condiciones del ambiente (Rhodes, 1995).

La dinámica folicular no se limita solo al desarrollo de varias ondas foliculares

durante el ciclo, sino también al ajuste del ciclo al número de ondas foliculares

durante el mismo; es así como en ganado lechero se ha detectado un promedio de

18 días para el ciclo de las vacas con dos ondas foliculares, 21 días para el ciclo

de las vacas con tres ondas y 24 días para el de vacas con cuatro ondas. Por

observaciones de campo se han detectado vacas que regresan al estro

en un lapso de 10 días, lo que probablemente representa ciclos de una onda

folicular. Del mismo modo, la duración de los períodos de crecimiento, dominancia

y latencia del folículo dominante, varían dependiendo de la oleada del ciclo en la

cual se presente (Ginther, 1996). 2.2.1 Dinámica De Las Ondas De Desarrollo Folicular En un ciclo de dos

ondas foliculares, la primera cohorte de folículos empieza a diferenciarse el día de

la ovulación, el folículo dominante se evidencia hacia los días 3 ó 4 del ciclo,

continúa su crecimiento hasta el día 6 y permanece estable hasta el día 11,

cuando empieza su fase de regresión. La segunda cohorte se hace evidente hacia

el día 10 del ciclo y .su folículo dominante se convierte finalmente en el folículo

ovulatorio.

En un ciclo de tres ondas foliculares la dinámica de la primera cohorte es similar a

la del ciclo de dos ondas; sin embargo, la segunda onda se puede evidenciar el

día 9 del ciclo, el folículo dominante permanece estático hasta el día 16 cuando

inicia su regresión y se hace evidente la tercera cohorte, cuyo folículo dominante

se hace evidente dos días después y se convierte en el folículo ovulatorio, porque

su fase de crecimiento concuerda con la caída de las concentraciones plasmáticas

de progesterona (Lucy, 1992).

8

De lo anterior se puede deducir que:

1) las ondas foliculares se suceden en un lapso de 6 - 10 días,

2) el folículo dominante de la onda solo ovula cuando caen las concentraciones

plasmáticas de progesterona del diestro por la lisis del cuerpo lúteo y

3) cada vez que ocurre la luteolisis es posible encontrar un folículo dominante

viable, dispuesto a ovular varios días después (Maldonado, 1997). 2.2.2 Regulación Del Desarrollo Folicular La regulación del desarrollo folicular

ocurre por mecanismos de acción de tipo endocrinos, de tipo paracrino y autocrino

- que operan el microambiente del ovario - o ambos (Lucy, 1992). Mientras un

folículo dominante se encuentre en su fase de crecimiento o en su fase estática no

aparece una nueva onda folicular. A los tres días del surgimiento de una nueva

onda el folículo dominante previo inicia su proceso de atresia. Al parecer el folículo

dominante de una nueva onda en crecimiento es el responsable de:

a) causar la regresión de los folículos subordinados;

b) causar la regresión del folículo dominante previo; y

c) retrasar la emergencia de una nueva onda folicular. Estos eventos operan en

el ovario contralateral o ipsilateral al del nuevo folículo dominante, lo que

sustenta la hipótesis sobre los mecanismos de regulación locales y sistémicos

(Kastelic, 1994).

El folículo dominante causa la regresión de sus folículos subordinados. La

eliminación del folículo dominante al inicio del surgimiento de la onda retrasa la

regresión del primer folículo subordinado, lo que no ocurre cuando el folículo

dominante es eliminado en estados avanzados del período de dominancia.

9

Además, durante su fase de crecimiento el folículo dominante suprime la

emergencia de una nueva onda folicular. La cauterización del folículo dominante

entre el día 3 - 5 del surgimiento de la onda, ocasiona un surgimiento más

temprano de la siguiente onda folicular (Ginther, 1996).

De otro lado, el folículo dominante podría regular el aporte de gonadotropinas a los

folículos subordinados, induciendo así su regresión. La supresión .puede ocurrir

por dos mecanismos: primero, suprimiendo las concentraciones plasmáticas de

FSH y segundo, reduciendo la sensibilidad a la FSH. Las concentraciones de

estradiol e inhibina, el inhibidor natural de la FSH, se encuentran en mayor

concentración en el líquido folicular del folículo dominante que en el de los

folículos subordinados. Además, factores de crecimiento presentes en el folículo

dominante le permiten a éste continuar su crecimiento aún bajo un ambiente

hormonal sistémico no propicio (Kastelic, 1994).

2.2.3 Dinámica Folicular En Ganado Bos indicus En ganado de carne y de

leche se han encontrado variaciones en la funcionalidad ovárica dependiente de

la estación del año, donde el ganado Bos indicus parecer ser más propenso que el

Bos taurus a presentar las variaciones estacionales. Por ejemplo, se ha informado

que las novillas Bos indicus presentan menos ciclicidad en el invierno en La

Florida, mientras que la aciclicidad aumenta en las novillas en Texas también

durante el invierno. En Argentina se ha encontrado aumento de anestros en las

épocas del año en que disminuye la longitud del día (Maldonado, 1997).

En un estudio hecho en Australia se evaluó el patrón de crecimiento y dinámica

folicular en novillas Nelore (Bos indicus), los factores que determinaron la

ovulación y la extensión en que los cambios podían ser debidos a variaciones

individuales, del ambiente, o ambas (Rhodes, 1995a). Finalmente se quiso

corroborar en ganado Bos indicus la dinámica folicular establecida para ganado

10

Bos taurus (Rhodes, 1995b). En el estudio se evaluaron los ovarios de 17 novillas

Brahman durante un lapso de 10 meses que implicó un seguimiento de 117

intervalos ovulatorios, evaluando el tamaño y la posición en el ovario de los

folículos mayores de 5 mm de diámetro y el tamaño del cuerpo lúteo. En general,

el patrón de dominancia folicular fue similar al informado para novillas Bos taurus,

pero el diámetro promedio de los folículos preovulatorios y del cuerpo lúteo fue

menor. Además, se encontró una correlación significativa entre: a) el número de

folículos dominantes antes de la ovulación y el tiempo de aparición del segundo

folículo dominante, y b) el tamaño del folículo ovulatorio del ciclo anterior y la

duración de la detección del cuerpo lúteo (Rhodes, 1995a).

En el estudio se encontró, además, que el porcentaje de novillas con ciclos de dos

ondas foliculares fue menor (26.5%) que las novillas con ciclos de tres ondas

foliculares (66.7%), en tanto que solo un pequeño porcentaje de las novillas

presentaron ciclos de cuatro ondas foliculares (6.8%). Como dato importante, se

informó en la literatura científica, que un mismo animal puede presentar ciclos de

dos, tres y cuatro ondas si se hace un seguimiento en el tiempo.

Estos hallazgos contrastan con informes que sostienen que en ganado de leche

en lactancia predominan los ciclos de dos ondas foliculares (Rhodes, 1995a).

Figueiredo (1997) por el contrario, encontró un predominio de ciclos de dos ondas

foliculares en novillas cebú Nelore en tanto que en las vacas predominaron los

ciclos de tres ondas de desarrollo folicular.

La duración del ciclo estral en novillas Bos indicus parece variar en respuesta al

número de ondas foliculares que se desarrollen en el ciclo. Es así como la

duración para ciclos con dos, tres, o cuatro ondas foliculares fue de 20, 21 y 22

días, respectivamente. Del mismo modo, la duración de la fase lútea fue de 12

días para novillas con ciclos de dos ondas y de 14.2 días para novillas con ciclos

de tres ondas foliculares. El intervalo entre la emergencia del folículo preovulatorio

11

y la caída de la producción de progesterona fue mayor para novillas con ciclos de

dos ondas (- 5.1días) que para novillas con ciclos de tres (-1.2 días) (Rhodes, 1995a).

El fotoperíodo tiene una correlación significativa con la duración del intervalo

ovulatorio, la persistencia del cuerpo lúteo, y el máximo diámetro del folículo

preovulatorio y el cuerpo lúteo. El máximo diámetro del folículo dominante también

se vio afectado significativamente por el cambio en el peso corporal en el tiempo.

Se encontró que por cada kilogramo de ganancia diaria de peso resultó en un

aumento de 0,74 mm en el máximo diámetro del primer folículo dominante. Los

cambios en la dinámica folicular estuvieron afectados por la duración del

fotoperíodo, la disponibilidad de forraje y consecuentemente el peso corporal

(Rhodes, 1995a).

Rhodes y col (1995) evaluaron el efecto de la reducción en la masa corporal

(800gr/animal/día) y el anestro subsecuente, sobre la dinámica folicular y el patrón

de producción de gonadotropinas y esteroides sexuales en novillas B. indicus. El

inicio del anestro se vio precedido de una disminución linear en el tamaño de los

folículos ovulatorios y del cuerpo lúteo y por una persistencia del primer folículo

dominante del ciclo; cambios que fueron proporcionales con la disminución de la

masa corporal. Cuando se logró restablecer la ganancia de peso y cesó el anestro

nutricional, se observó un aumento lineal en el tamaño del folículo dominante y su

persistencia, en tanto que la ovulación se restableció cuando los folículos

desarrollaron la capacidad de crecer un 104% respecto de su tamaño en la etapa

de anestro.

Los estudios en hembras Bos indicus revelan que la dinámica folicular

comprenden una serie de eventos que van más allá del desarrollo de cohortes

foliculares e implican toda una serie de interacciones entre el ambiente externo y

el ambiente interno del animal. La época del año, el fotoperíodo y la disponibilidad

12

de forrajes, que determinan en gran parte la condición corporal del animal, se

correlacionan significativamente con el diámetro promedio de los folículos

dominantes, los cuerpos lúteos, la duración del ciclo (intervalo ovulatorio) y el

número de folículos preovulatorios en el ciclo (Maldonado, 1997).

2.4 PROPIEDADES DEL ULTRASONIDO

El ultrasonido consiste ondas sonoras que poseen una frecuencia por encima del

límite audible para el ser humano (encima de 16 KHz). Para el propósito de la

obtención de imágenes se utilizan frecuencias por encima de 1 a 10 MHz. Las

ondas ultrasonográficas son generadas por transductores construidos a partir de

materiales piezoeléctricos.

Las propiedades básicas del ultrasonido son las siguientes:

1. Generar imágenes a través de líquidos, sólidos y sustancias gaseosas.

2. Presenta velocidades de propagación diferentes, según su medio, siendo una

característica inherente al proceso de interacción de ondas ultrasonográficas.

Como se puede observar en la tabla 1.

3. El ultrasonido sufre cambios de refracción y reflexión, por las interfases de la

onda lo cual afecta la densidad de la imagen.

4. El ultrasonido se propaga de un medio a otro, siempre sufre atenuación de la

intensidad debido a los efectos de absorción, reflexión y esparcimiento.

5. La reflexión es la propiedad de una onda sonora para refractar cuando

encuentra una superficie de separación entre dos medios elásticos diferentes.

13

6. La Refracción es el cambio de velocidad y de la dirección que sufre la onda

sonora en el momento que pasa de un medio elástico a otro.

7. El Efecto Piezoeléctrico, es la propiedad de algunos materiales de deformarse y

vibrar cuando se le aplican voltajes, lo anterior es llamado efecto piezoeléctrico

directo.

Tabla 1. Características del Elemento Vs. Velocidad de Propagación

Característica del

Elemento

Velocidad de Propagación

(Pts/seg.)

Aire 330

Agua 1500

Grasa 1430

Músculo 1620

Hueso 3500

El Transductor es la herramienta por la cual se consigue la piezoelectricidad. Esta

herramienta posee una superficie por donde se emiten ondas que emergen de una

superficie ultrasónica, que tiene una cama especial para permitir el perfecto

acoplamiento acústico y dar protección a los elementos piezoeléctricos como lo

son los cristales de cuarzo.

La formación de la imagen a raíz del ultrasonido se ve a partir de tres modos

básicos como lo son el Modo A (De Amplitud), Modo B (Dimensional) y modo M

(de movimiento).

El Modo A es el modo mas sencillo de la ultrasonografia. Los pulsos del

ultrasonido de corta duración son enviados por un único transductor que también

14

funciona como receptor de dos ecos refractados por interfases. El Modo B es el

sistema mas usado para la obtención de imágenes del interior del cuerpo del

animal. Estos sistemas sofisticados permiten el uso de unos o mas traductores de

multifrecuencia, en donde se pueden tomar imágenes de diferentes planos

formando una imagen de dos dimensiones, en los cuales se puede capturar la

imagen por medio de un congelador, los cuales son llevados por una imagen al

monitor.

Con la frecuencia se busca mejorar la penetración para obtener imágenes mas

completas del órgano a evaluar, la cual es el resultado entre una relación de la

velocidad y la onda a emitir. Es de anotar que entre mayor sea la frecuencia mayor

será la resolución y así se va a sufrir menor atenuación de las imágenes. Las

frecuencias para animales vivos varían entre 1 a 5 MHz, siendo la más utilizada en

la medición de grasa dorsal y área de ojo de lomo la de 3.5 MHz.

Las imágenes de modo A son útiles para visualizar aparatos reproductivos,

lesiones en ligamentos y tendones, o para visualizar órganos y ayudar a

diagnosticar los problemas que se presentan.

Para observar y cuantificar el espesor de grasa y el área de ojo de lomo siempre

se necesita de una medida dimensional la cual la da el modo B, porque si se

evaluara con instrumento de modo A solo se podría analizar al espesor de la

grasa. Las propiedades del ultrasonido fueron tomadas de los Conceptos físicos

del Ultrasonido, dictado por el Dr. Carlos Biscagli, en Uberaba (Brasil) 2004.

2.4.1 El Ultrasonido En La Reproducción La historia del ultrasonido no es muy

antigua por la evolución del ultrasonido. El primer reporte de ultrasonografía

transrectal se hizo alrededor del año de 1.980, cuando Palmer y col (2004)

15

estudiaron las yeguas vacías y en estado de preñez utilizando el ecógrafo como

ayuda diagnóstica.

Desde esa época hasta la fecha se han realizado diversos estudios en caninos

como descripción de la próstata (Cartee,1980), diagnóstico de preñez en bovinos

por vía transrectal (Chaffaux y col. 1982), diagnóstico de preñez transabdominal

en cerdas y ovejas (Inaba, 1984), y por último hacia el año de 1.987 se inician los

trabajos de seguimiento de la ciclicidad ovárica en yeguas y vacas, cuando

Thowson, Ginther y Pierson hicieron aportes para formar un reporte sobre el tipo

de ecogenicidad que mostraban estos tejidos.

Según Fricke (2001) como herramienta de investigación, el ultrasonido transrectal

ha revolucionado el conocimiento de la biología reproductiva. Como elemento de

manejo, el ultrasonido transrectal proporcionará una herramienta diagnóstica para

mejorar el manejo reproductivo en las granjas lecheras. Aunque hay muchas

aplicaciones potenciales del ultrasonido en reproducción, la combinación del

ultrasonido para diagnóstico temprano de gestación con inseminación artificial (IA)

a tiempo fijo, en unión con la detección de gestaciones gemelares probablemente

resultará en el uso más difundido de esta tecnología.

2.4.1.1 Estructuras Ováricas Como Ayudas Diagnósticas Los exámenes

reproductivos de rutina deben incluir la visualización de las principales estructuras

(o su ausencia) en los dos ovarios. Aunque la palpación rectal puede ser un

método preciso para el diagnóstico de preñez, es un método deficiente para definir

los folículos ováricos (Pieterse y col., 1999). En contraste, la imagen del

ultrasonido permite una alta precisión y rapidez para evaluar las estructuras

ováricas (Griffin y Ginther, 1992). Comúnmente, los practicantes bovinos

proceden directamente a escanear el útero durante el examen reproductivo

olvidando por completo los ovarios. Esto es un error, pues lo ovarios contienen

16

abundante información que puede ser usada como ayuda diagnóstica en el

chequeo reproductivo, y en la selección de las terapias o intervenciones

reproductivas apropiadas. Por ejemplo, la presencia o ausencia de cuerpo lúteo

ayuda en el diagnóstico de la preñez, especialmente si es un diagnóstico

temprano. Cuando está presente, el tamaño y la ubicación (ovario derecho o

izquierdo) del cuerpo lúteo indica la localización del concepto dentro del útero si la

vaca está preñada.

Debido a que la mayoría de los gemelos en el ganado son dicigóticos (Wiltbank y col., 2000), la presencia de múltiples cuerpos lúteos es un indicador diagnóstico

de la presencia de gestación gemelar. Las patologías del ovario, como “ovarios

estáticos” y quistes foliculares y luteinizados pueden ser fácilmente distinguidos.

Sin embargo, el uso de las estructuras ováricas como ayudas diagnósticas durante

los exámenes reproductivos, requiere amplio conocimiento de la anatomía y

fisiología ovárica y reproductiva. Además, hay limitaciones a las conclusiones que

pueden hacerse de un solo (comparado a exámenes seriados) examen de

ultrasonido (Fricke, 2001).

2.4.1.2 Folículos Ováricos La foliculogénesis es el proceso de formación de

folículos maduros capaces de ovular del grupo de folículos primordiales que yacen

estáticos en el ovario (Spicer y Echternkamp, 1986). Los folículos ováricos son

estructuras llenas de fluido rodeadas por una capa interna de células de la

granulosa y una capa externa de células de la teca. El oocito esta suspendido

dentro del antro por un pedículo especializado de células de la granulosa llamado

Cúmulus Oophorous. Como el fluido absorbe las ondas de ultrasonido en lugar de

rechazarlas, las estructuras llenas de fluido como los folículos, se aprecian como

estructuras circulares negras rodeadas por tejido ovárico ecogénico. La mayoría

de los ecógrafos en veterinaria pueden escanear folículos desde 2 a 3 mm de

diámetro, y el crecimiento folicular puede ser fácilmente seguido con sesiones

seriadas de ecografía (Pierson y Ginther, 1988). La capacidad del ultrasonido de

17

hacer este tipo de seguimiento de manera no invasiva durante el ciclo estral ha

revolucionado nuestro conocimiento de la fisiología reproductiva.

2.4.1.3 Ondas Foliculares Los estudios científicos usando ultrasonografía

transrectal han llevado a la clarificación de la naturaleza del desarrollo de los

folículos antrales en el ganado (Ginther y col., 1996). Los primeros estudios

usando ultrasonido revelaron que el crecimiento folicular ocurre en ondas, cada

una culminando con la formación de un folículo de gran tamaño.

Una onda folicular empieza con la emergencia de un grupo o cohorte de pequeños

folículos antrales justo antes del día de ovulación. Durante los siguientes días, uno

de los folículos en esta cohorte continúa creciendo y se hace dominante

suprimiendo así el crecimiento de los demás folículos subordinados de esa onda, y

la emergencia de una nueva onda folicular. Mientras el folículo dominante continúa

creciendo, el crecimiento de los restantes folículos en la cohorte cesa o se hace

lento y finalmente sufren atresia. Una segunda onda emerge al rededor del día 10

después de la ovulación, y en ciclos de tres ondas, una onda final emerge el d 16

después de la ovulación. En ambos casos el folículo ovulatorio surge de la onda

final (Ginther y col., 1996).

Bajo la mayoría de circunstancias, las ondas foliculares aseguran que solo un

folículo capaz de llegar a la ovulación está presente en un momento dado durante

el ciclo estral. Algunos factores que pueden influenciar el número de ondas por

ciclo estral en el ganado lechero incluyen la ingesta en la dieta (Murphy y col., 1991), edad, número de partos, y estado de lactancia (Lucy y col., 1992).

2.4.1.4 Cuerpos Lúteos El CL es una glándula endocrina temporal que se forma

después de la ovulación de los tejidos que hacían parte de folículo. Así, el CL

18

puede ser visto como la etapa terminal del desarrollo folicular. El CL presenta

áreas de marcada ecogenicidad dentro del estroma ovárico. Muchos cuerpos

lúteos aparecen como masas de tejido sólido, pero también pueden contener

cavidades con fluidos. En base a exámenes de ultrasonido en vaquillas, el 79% de

los CL de aspecto normal contienen cavidades desde menos de 2 a más de 10

mm de diámetro en algún momento del ciclo estral e inicio de la preñez (Kastelic y Col., 1990b; Singh y Col., 1997).

Las características ultrasonográficas del CL como diámetro transversal, área lútea

y ecogenicidad han sido relacionados con la estructura y funcionamiento luteal

(Battocchio y Col., 1999; Kastelic y Col., 1990a; Singh y Col., 1997). El uso de

las características luteales para mejorar la precisión en el diagnóstico de gestación

ha sido reportado en vaquillas de leche (Kastelic y Col., 1991), pero no existen

datos semejantes en vacas en producción. El tamaño luteal y características

ecogénicas evaluados en momentos específicos después del servicio puede

demostrar ser un método útil para mejorar la precisión en el diagnóstico temprano

de preñez en el ganado de leche. A pesar de que el ultrasonido es más preciso

que la palpación rectal para evaluar los folículos, es difícil de distinguir entre un CL

en desarrollo y uno en regresión usando cualquiera de las dos técnicas (Pieterse y Col., 1990).

2.4.1.5 Limitantes Diagnósticas de la Imagen Ultrasónica Bajo la mayoría de

las circunstancias, la aplicación práctica del ultrasonido para el manejo

reproductivo de rutina consiste en un solo examen en un momento dado. Es

importante entender que el estado fisiológico de un folículo (dominante,

subordinado, en crecimiento, en regresión) o CL no puede ser determinado con un

solo examen de ultrasonido. Además, la imagen ultrasónica ayuda a distinguir las

características anatómicas de una estructura, pero provee poca información a

cerca del estado fisiológico o estado endocrino. Por ejemplo, Los quistes ováricos

19

pueden ser clasificados por características anatómicas como diámetro y presencia

o ausencia de tejido lúteo, sin embargo, no se puede obtener información a cerca

de su funcionalidad como concentraciones plasmáticas hormonales. Una

excepción sería la visualización del latido cardíaco como un indicador diagnóstico

de viabilidad del feto. La limitante diagnóstica de la imagen ultrasónica cobra

importancia cuando se llega a recomendar una terapia o una intervención

reproductiva incorrecta. Un completo conocimiento de la fisiología ovárica y de los

mecanismos por los cuales los programas hormonales funcionan o fracasan es

esencial para la correcta interpretación de la información de la imagen ultrasónica

(Fricke, 2001)

2.4.1.6 Diagnóstico Precoz de Preñez El uso de la ultrasonografía transrectal

para determinar el estado temprano de preñez es una de las aplicaciones más

prácticas del ultrasonido en reproducción de ganado lechero. La pronta

identificación de las vacas vacías después del servicio mejora la eficiencia

reproductiva y la tasa de preñez en un hato al disminuir el intervalo entre

inseminaciones e incrementar la tasa de servicio. El diagnóstico de preñez en

vaquillas de leche con base en la presencia de fluido uterino intraluminal antes de

los 16 días no es confiable, pues pequeñas cantidades de fluido pueden estar

presentes en vaquillas no inseminadas desde los 10 días después del último celo.

Sin embargo, la precisión en el diagnóstico basado únicamente en los fluidos fue

casi del 100% el día 20. La precisión en el diagnóstico de preñez en vaquillas de

leche no fue mayor del 50% antes de los 18 d usando un transductor de 5.0 MHz,

o antes de los 16 d usando uno de 7.5 MHz (Kastelic y col., 1991). Aunque el

diagnóstico de gestación puede ser establecido temprano, se debe tener cuidado

para asegurar la precisión del diagnóstico. Por ejemplo, un diagnóstico falso

negativo fue más probable cuando el útero estaba localizado delante del borde

anterior de la pelvis que cuando estaba en la cavidad pélvica (Szenci y col, 1995).

20

El ultrasonido es un método rápido para el diagnóstico de gestación, y los

palpadores experimentados se adaptan fácilmente al ultrasonido. El tiempo

requerido para diagnóstico de preñez en vaquillas de carne al final de una estación

de servicios de 108 días promedió a 11.3 segundos/vaquilla usando palpación

rectal versus 16.1 segundos necesarios para evaluación de preñez y edad del feto

usando ultrasonido (Galland y Col., 1994). La edad del feto también afectó el

tiempo requerido para el diagnóstico, siendo menos el tiempo necesario para los

fetos mayores (Galland y Col., 1994). Aunque el ultrasonido a ≥45 d de gestación

no mejoró la precisión en el diagnóstico en palpadores experimentados, si puede

hacerlo en los menos experimentados (Galland y Col., 1994).

Tabla 2. Día de la primera detección de características identificables en el

concepto bovino

Día de la primera observación

Característica Promedio(día) Rango (días)

Embrión 20.3 19 a 24

Latido cardíaco 20.9 19 a 24

Alantoides 23.2 22 a 25

Columna vertebral 29.1 26 a 33

Miembros anteriores 29.1 28 a 31

Membrana amniótica 29.5 28 a 33

Orbita ocular 30.2 29 a 33

Miembros posteriores 31.2 30 a 33

Placentomas 35.2 33 a 38

Pezuñas 44.6 42 a 49

Movimiento fetal 44.8 42 a 50

Costillas 52.8 51 a 55

Adaptado de Curran y Col., 1986.

21

Dos factores tienen que considerarse cuando se usa el ultrasonido para el

diagnóstico temprano de preñez. Primero, el énfasis tiene dirigirse a identificar las

vacas no preñadas en lugar de las preñadas. Segundo, se tiene que implementar

una estrategia de manejo para retornar esas vacas no preñadas al servicio tan

pronto como sea posible después del diagnóstico de preñez. Tales estrategias

pueden ser la administración de PGF2α a las vacas con un CL receptivo, uso de

ayudas para le detección de estro, o una combinación de ambos métodos.

Desafortunadamente, la tasa de servicio fue solo del 58% cuando se uso un

sistema que combinó PGF2α y detectores de monta Kamar (Britt y Gaska, 1998),

probablemente debido a la inherente deficiencia en la expresión de estro de las

vacas lecheras en producción.

2.5 TRATAMIENTOS DE SINCRONIZACIÓN DE LA OVULACIÓN E IATF

En general, podemos dividir a los protocolos de IATF en aquellos que utilizan

combinaciones de GnRH y prostaglandina F2α (PGF), llamados protocolos

Ovsynch (Pursley, 1997) y los que utilizan dispositivos con progesterona (P4) y

estradiol (Bó y Col., 2002). El protocolo Ovsynch ha resultado en una fertilidad

aceptable para vacas de leche (Pursley, 1997; Burke, 1996) y de carne (Martínez y Col., 2002). Sin embargo, los resultados de su aplicación en rodeos de cría

manejados en condiciones de pastoreo no han sido satisfactorios, debido a los

bajos porcentajes de concepción que se obtienen en vacas en anestro (Baruselli, 2001). Por lo tanto, la elección de este protocolo en rodeos de cría va a depender

de la categoría de animales a utilizar y del estado de ciclicidad del rodeo. En este

estudio se utilizo la combinación entre dispositivos con Progesterona DIV - B®

Syntex, Benzoato de Estradiol y la adición de eCG, por lo cual, a continuación se

hará énfasis en estos protocolos.

22

2.5.1 Protocolos Con Dispositivos Con Progesterona Y Estradiol Existen

actualmente en el mercado dispositivos eficientes que liberan P4 y que son

mantenidos en la vagina por un período de 7 u 8 días. El tratamiento mas utilizado

consiste en administrar 2 mg de benzoato de estradiol (EB) por vía intramuscular

(i.m.) junto con la inserción del dispositivo en lo que se denomina el Día 0 del

tratamiento; en el Día 7 u 8, se extrae el implante y se aplica PGF i.m. y 24 h

después se administra 1 mg de EB i.m. Se realiza IATF entre las 52 y 56 h de la

remoción del dispositivo (Cutaia, 2001). La función fundamental de la aplicación

de estrógenos en el inicio del tratamiento es provocar la atresia de los folículos

existentes e impedir de esta manera la formación de folículos persistentes que

interfieren negativamente en la fertilidad (Cutaia, 2001). Como la atresia es

seguida por el comienzo de una nueva onda folicular a los 4 días (Moreno, 2001)

se asegura de esta manera la presencia de un folículo nuevo y un ovocito viable

en el momento de retirar el dispositivo (Bó, 1995). Originalmente, el dispositivo era

colocado en la vagina junto con una cápsula con 10 mg de EB, para inducir la

regresión luteal y sincronizar el desarrollo folicular (Macmillan, 1993). Sin

embargo, desde el año 1996 se utiliza 2 mg de EB por vía i.m. porque se demostró

que la cápsula de EB no es efectiva para sincronizar el desarrollo folicular (Bó, 1996) y es menos eficaz que la PGF para inducir la luteólisis. Por último, la

segunda administración de EB es fundamental para sincronizar la ovulación y

obtener buenos índices de preñez a la IATF (Colazo, 1999). Datos de 13510

inseminaciones realizadas entre el año 2000 y el 2004 resultaron en un media de

52,7% con un rango de 27,8% al 75%. Los factores que más afectaron la preñez

fueron la condición corporal (CC) del rodeo inseminado y si las vacas estaban

cíclicas o en anestro (Bó y Col., 2005).

23

2.5.2 Tratamientos Con Dispositivos con P4 y eCG El uso de dispositivos de

P4 en combinación con eCG ha sido muy utilizado en vacas en anestro posparto.

La eCG es una glicoproteina de larga vida media que tiene en la vaca un efecto

similar a la FSH y que puede ser utilizada para estimular el crecimiento de los

folículos en el posparto (Yavas, 2000). Tratamientos con eCG han mostrado un

incremento en el porcentaje de preñez en vacas con cría con alta incidencia de

anestros (Cutaia, 2003). Sin embargo, cuando se ha usado junto con P4+EB en

protocolos de IATF en vacas en buena condición corporal los porcentajes de

preñez no se incrementaron con respecto a los grupos que no recibieron la eCG.

Esto se debería a que estas vacas no necesitarían del estimulo extra que ofrece la

eCG para el crecimiento folicular por encontrarse en buena condición corporal

(Cutaia, 2003) y por lo tanto la adición de eCG solo tendría resultados positivos en

vacas en una condición corporal comprometida. Esto se corroboró en trabajos

realizados por Cutaia y Col. (2003) donde se concluyó que la aplicación de 400

U.I. de eCG en el momento de retirado el dispositivo con P4 aumenta los

porcentajes de preñez en vacas británicas con cría y con buena condición

corporal. Sin embargo, cuando se utilizaron vacas con pobre o moderada

condición corporal la aplicación de eCG aumento los porcentajes de preñez, sobre

todo en vacas sin estructuras ováricas palpables o solo con folículos (sin un CL) al

inicio del tratamiento. En otro estudio (Baruselli, 2004) se demostró que el

tratamiento con eCG incrementa las concentraciones plasmáticas de P4 y el

porcentaje de preñez a IATF en vacas con cría en anestro posparto. Por lo tanto,

el tratamiento con eCG puede ser una herramienta importante para aumentar la

tasa de concepción a la IATF, disminuir el periodo posparto y mejorar la eficiencia

reproductiva (Baruselli, 2003).

En la Figura 2 se muestran datos de las IATF realizadas entre diciembre de 2000 y

diciembre de 2003, teniendo en cuenta diferentes factores como la condición

corporal y el grado de ciclicidad del rodeo (Cutaia y Bó, 2004). Los datos fueron

recogidos de 9668 IATF realizadas. Como bien puede observarse, la condición

24

corporal es un factor determinante en los resultados de preñez a IATF. Los

resultados presentados aquí y en otros trabajos sugieren que los animales deben

tener una condición corporal mínima de 2,5 (escala 1 al 5) o idealmente 3 para

obtener buenos resultados de preñez cuando se utiliza un protocolo de IATF sin la

adición de eCG. Si a estos datos los comparamos con las tasas de preñez

obtenidas en 678 vacas que fueron tratadas con 400 UI de eCG en el Día 8 (retiro

del DIB; n=678), vemos que la adición de eCG permitió alcanzar tasas de preñez

cercanas al 50% en las vacas que tenían una condición corporal de 2 al momento

del inicio del tratamiento. Esto se puede conseguir únicamente cuando las vacas

están en un plano de aumento de peso ya que cuando las condiciones de sequía o

falta de disponibilidad de alimento evitan que la vaca mejore su condición corporal

durante el servicio las tasas de preñez de estas difícilmente superen el 35%,

inclusive con eCG (Colazo, 1999).

Figura 2. Porcentajes de preñez en función de la condición corporal en vacas

tratadas (n=678) o no (n=9668) con 400 UI de eCG (P>0,1).

CUTAIA, L., Bó, GA. Factores que afectan los resultados en programas de inseminación artificial a tiempo fijo en rodeos de cría utilizando dispositivos con progesterona. Resúmenes 1° Simposio Internacional de Reproducción Bovina. 20 al 22 de Octubre de 2004. Barquisimeto, Venezuela; 109 - 123. 2004.

25

Se evaluó también el impacto del porcentaje de ciclicidad del rodeo sobre los

porcentajes de preñez. Se determinó ciclicidad como la presencia de un CL a la

palpación rectal o signos de celo al momento de iniciado el tratamiento y anestro

cuando sólo tenían folículos. En la figura 3 se observa que la adición de la eCG no

mejora la tasa de preñez en las vacas cíclicas, pero sí lo hace en las vacas en

anestro.

Figura 3. Porcentaje de preñez en función del porcentaje de ciclicidad del rodeo

en vacas tratadas o no con 400 UI de eCG. Las tasas de preñez difieren entre las

vacas en anestro tratadas o no tratadas con eCG (P<0,01).

CUTAIA, L., Bó, GA. Factores que afectan los resultados en programas de inseminación artificial a tiempo fijo en rodeos de cría utilizando dispositivos con progesterona. Resúmenes 1° Simposio Internacional de Reproducción Bovina. 20 al 22 de Octubre de 2004. Barquisimeto, Venezuela; 109 - 123. 2004.

26

3. MATERIALES Y METODOS

3.1 LOCALIZACIÓN

Esta investigación se desarrolló en la Ganadería “La Maria”, de propiedad del Sr.

Alfonso Zorro Zorro, localizada al sur oriente del casco urbano del municipio de

Tame (Arauca), ubicada en el paraje de Naranjitos, con una extensión

superficiaria aproximada de 307 hectáreas, localizado a 187 Km. de la Capital

(Arauca) en el extremo sur occidental del Departamento, a una altitud de 1000

m.s.n.m con una temperatura promedio de 28 Centígrados y una precipitación

anual de 693 mm de lluvia en promedio

Figura 4. Localización del municipio de Tame en el departamento de Arauca

Tomado de Enciclopedia Encarta, 2006

27

Figura 5. División Política del municipio de Tame

Tomado de www.tame-arauca.gov.co/nuestromunicipio.shtml

3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA Fueron seleccionadas 60 hembras cebuinas (Bos indicus) con una condición

corporal superior a 7 en la escala de 1 a 9, en edades entre 2 y 6 años (no

gestantes) , distribuidos en tres grupos, de 20 animales en cada grupo,

pastoreando en praderas de Brachiaria humidicola y gramas nativas, consumiendo

sal mineralizada y agua a voluntad.

3.3 VARIABLES

• Tasa de preñez.

• Número de ondas foliculares

• Diámetros foliculares.

28

3.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para evaluar la respuesta de los tratamientos con los dispositivos nuevos y

reutilizados por segunda y tercera vez se utilizó un modelo Completamente al azar

y una prueba no planeada SNK para valores con una significancia menor a 0.05

(P< 0.05). Para el análisis de variables semicuantitativas como la tasa de preñez

se realizó una prueba de contingencia de χ2 c (Chi cuadrado). En el estudio de

variables como diámetro folicular, número de ondas foliculares, número de

folículos dominantes se utilizó ANAVA.

3.5 MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS

3.5.1 Periodo de Evaluación La realización del protocolo de sincronización y el

seguimiento de la dinámica folicular, se llevaron a cabo desde el día 20 al 30 de

Noviembre del 2006. El diagnóstico de gestación se realizo el Día 24 de Enero del

2007.

3.5.2 Protocolo De Sincronización De La Ovulación e Inseminación Artificial a Tiempo Fijo Se realizo ultrasonografía y palpación rectal de los animales

previa a la realización del protocolo de sincronización. Los dispositivos

intravaginales usados fueron adquiridos en la empresa CGR Biotecnología

Reproductiva, de parte del entonces Director científico de esta compañía, Dr.

Edgar Cifuentes; con la garantía de uso que se requería para este proyecto; estos

dispositivos fueron higienizados utilizando agua limpia y amonio cuaternario al 1

%. El día 0 se realizó la inserción de lo dispositivos mediante un aplicador

dispuesto por el fabricante para tal fin; los grupos 1, 2 y 3 fueron sincronizados

con dispositivos intravaginales (DIV-B Syntex® 1 gr. de progesterona) nuevos,

29

reutilizados por segunda y tercera vez respectivamente. En cada grupo se realizó

una aplicación intramuscular de 2.5 ml de Benzoato de Estradiol 25 (Syntex®

2.5 mg). El día 8 se retiraron los dispositivos y se aplicaron 2 ml de Novormon®,

(Gonadotropina Corionica Equina [ eCG ] 400 UI) y 2 ml de Ciclase (Clorprostenol

D 75 μg / ml, Syntex®), vía intramuscular. El día 9, es decir 24 horas después de

retirados los dispositivos, se aplicó vía intramuscular 1 ml de Benzoato de

Estradiol 25 (Syntex® 2.5 mg)

Figura 6. Protocolo de sincronización de celo mediante inserción de dispositivo

intravaginal liberador de progesterona

3.5.3 Seguimiento de la Dinámica Folicular Fueron seleccionadas 6 novillas de

cada grupo en las que se realizo el seguimiento ecográfico de la dinámica folicular

durante 9 días, iniciando el seguimiento el día de inserción de los dispositivos

intravaginales o día 0 del protocolo de sincronización y finalizando el examen por

ultrasonografía transrectal el día 9, es decir un día antes de la inseminación

artificial. Las novillas se traían diariamente de los respectivos potreros en la

30

mañana y eran pasadas al corral, una vez allí, una a una ingresaban al brete

metálico para realizar el examen respectivo y la toma de registros fotográficos.

Las novillas fueron examinadas mediante ultrasonografía transrectal, durante 9

días consecutivamente, utilizando un ecógrafo de tiempo real y modo B Pie

Medical Falco 100, dotado de un Transductor Lineal Endorectal de 6.0/8.0 Mhz de

doble frecuencia. Durante cada examen los ovarios fueron observados

cuidadosamente, en al menos dos planos diferentes y las lecturas fueron grabadas

en diskette de 3.5 para su posterior interpretación en un computador, utilizando el

Software EVIEW® de Pie Medical y el protocolo descrito por Pierson y Kastelic (1988). Figura 7. Ecógrafo Pie Medical Falco 100

Tomado de www.ultramedica.com.co

Los parámetros usados para la caracterización de la dinámica folicular fueron: el

número total de folículos para ambos ovarios; la presencia de folículos dominantes

(DF) con un diámetro de 8 a 12 mm y una tasa de crecimiento de 1.2 ± 0.5 mm /

día; folículos subordinados con de diámetros ≤ a 6 mm y tasa de crecimiento de

31

0.7 ± 0.3 mm / día; la divergencia del folículo dominante de la cohorte de folículos

en crecimiento; la duración de la onda de desarrollo folicular, definida como el

periodo de crecimiento y regresión del folículo dominante.

Figura 8. Medición del Diámetro Folicular Con el Software EVIEW® Pie Medical

Equipment B. V. ©

3.5.4 Inseminación Artificial La inseminación artificial de los animales se realizó

el día 30 de Noviembre del 2006, entre 52 y 56 horas de retirado el dispositivo

intravaginal, periodo en el que se han establecido los mayores resultados en

relación con la tasa de preñez (Cutaia, 2001). Para realizar la inseminación en el

plazo establecido, sin que se presentara ningún inconveniente relacionado con el

manejo de los animales, descongelación y manipulación del semen y el tiempo

entre una inseminación y otra, se realizo el retiro de los dispositivos intravaginales

el día 8 (28 de Noviembre) en tres fases, en donde se incluyeron grupos de 20

animales por etapa; la primera dio inicio a las 6:00 AM, la segunda dio inicio a las

7:30 AM y la tercera a las 9:00 AM. Teniendo en cuenta los tiempos de inicio para

cada fase, se calculo el tiempo para realizar la inseminación en cada uno de los

32

grupos de acuerdo al intervalo de tiempo mencionado anteriormente (52 a 56

horas).

Se dio inicio a la inseminación el Día 10 del protocolo (30 de Noviembre) con el

primer grupo a las 10:00 AM, posteriormente se procedió a inseminar los animales

del segundo grupo a las 11:30 AM y por ultimo en el tercer grupo de hembras a la

1:30 PM. Para la eficiencia en el procedimiento, fue necesaria la utilización de 2

bretes, 2 pistolas de inseminación universales, 4 personas encargadas del manejo

de los animales y 3 personas encargadas del proceso completo de inseminación.

Fue así como se designó a la Doctora Maria Teresa Gaviria como la encargada de

la descongelación de las pajillas y armado de las pistolas de inseminación y

Yholmar Zorro e Iván Camelo realizamos la inseminación de los animales

dispuestos en cada uno de los bretes.

3.5.5 Diagnóstico de Gestación El diagnóstico de gestación se realizo el Día 9

de Febrero del 2007, es decir, 70 días post – inseminación, mediante palpación

rectal ya que en ese momento no fue posible contar con el ecógrafo debido a que

este se encontraba en reparación. Los animales fueron pasados al corral y

posteriormente fueron llevados uno a uno al brete donde se realizó el examen

correspondiente.

33

4. RESULTADOS Y DISCUSION

4.1 ANALISIS DESCRIPTIVO DE LAS VARIABLES QUE DETERMINAN LA DINAMICA FOLICULAR EN LOS TRES TRATAMIENTOS 4.1.1 Número De Ondas Foliculares El número promedio de ondas foliculares

para el tratamiento 1 fue de 1.4 ± 0.5071, del tratamiento 2 de 1.5 ± 0.5345 ondas

y del tratamiento 3 de 1.6 ± 0.4924 ondas. Aun así, no existe una diferencia

significativa entre las medias de estos parámetros.

Tabla 3. Datos Descriptivos Del Número De Ondas Foliculares

# De OF

TTO n X

S

SX

CV

1 15 1.4 0.5071 0.1309 36.221 2 7 1.5 0.5345 0.2020 34.015 3 12 1.6 0.4924 0.1421 29.542

OF: ondas foliculares totales TTO: tratamiento n: número de animales X: media S: Desviación estándar Sx: Error estándar CV: Coeficiente de Variación

4.1.1.1 Porcentaje De Presentación De Ondas Foliculares De 17 animales en

los que se realizo seguimiento de la dinámica folicular, el 100% presentaron la

primera onda folicular, y solo 7 presentaron la segunda onda folicular, lo que

representa un 41,3% del total de animales de los tres grupos. Del tratamiento 1, 2

animales presentaron una segunda onda folicular representando un 11.8% del

total, del tratamiento 2, 2 animales representando un 11.8% y del tratamiento 3, 3

34

animales representando un 17.7%. En relación con la presentación de la segunda

onda folicular el mayor porcentaje fue alcanzando por el tratamiento 3 seguido por

los tratamientos 2 y 3, esto se debe a que solo 2 animales manifestaron 2 ondas.

Ver tabla 4 y gráfica 1.

Tabla 4. Relación Porcentual De La Presentación De 2 Ondas Foliculares

TTO Onda 1 Onda 2

1 6/17 (35.3%) 2/17 (11,8%) 2 5/17 (29.4%) 2/17 (11,8%) 3 6/17 (35.3%) 3/17(17,7%)

Total 17/17 (100%) 7/17(41,3%) TTO: tratamiento

Gráfica 1. Descriptiva Del Número De Animales Que Presentaron 1 Y 2 Ondas Foliculares

6

5

6

2 2

3

0

1

2

3

4

5

6

7

1 2 3

Tratamientos

Num

ero

de a

nim

ales

1 OF 2 OF

4.1.2 Día De Emergencia De La Onda Folicular Y Número De Ondas Foliculares El día de emergencia promedio de la primera onda folicular para el

tratamiento 1 fue el 3 ± 1.1690, en el tratamiento 2 el día 3 ± 1.0954 y en el

tratamiento 3 el día 3 ± 0.5164; para la segunda onda folicular en el tratamiento 1,

35

el día de emergencia de la onda folicular fue en promedio el 4 ± 1.4142, para el

tratamiento 2 el día 4.5 ± 0.7071 y para el tratamiento 3 fue el día 5 ± 1.0000. De

acuerdo a esto, en el tratamiento 1 el inicio de la segunda onda fue más temprano

a comparación de los tratamientos 2 y 3. Ver tabla 5 y gráfica 2.

Tabla 5. Datos Descriptivos Del Día De Emergencia De Las Ondas Foliculares

ONDA 1 (día) ONDA 2 (día) TTO n

X

S

SX

CV

n X

S

SX

CV

1 6 3 1.1690 0.4773 41.260 2 4 1.4142 1.0000 35.3552 5 3 1.0954 0.4899 39.123 2 4.5 0.7071 0.5000 15.7133 6 3 0.5164 0.2108 19.365 3 5 1.0000 0.5774 20.000

TTO: tratamiento; n: número de animales; Sx: Error estándar; CV: Coeficiente de Variación; X: media; S: Desviación estándar Gráfica 2. Día De Emergencia De La Onda Folicular

3 3 3

4

4,5

5

0

1

2

3

4

5

6

1 2 3

Tratamiento

Dias DE Onda 1

DE onda 2

36

Bó y colaboradores (1995) mencionan que tras la administración de 5 mg de

17β estradiol en hembras bovinas con implante liberador de progesterona se

evidenció la emergencia de una nueva onda folicular el día 4,3 ± 0.2 después del

inicio del protocolo; Colazo (2004), en un experimento con 66 novillas Simmental,

realizando un protocolo de sincronización de celos utilizando CRESTAR® y la

administración de 5 mg de 17β estradiol demostró la emergencia de una nueva

onda folicular alrededor del día 3,6 ± 0,5; adicionalmente Aviles (2005) realizo un

estudio basado en el efecto del uso de DIB® nuevos y reutilizados por segunda

vez (0.5 y un g de progesterona) sobre el inicio de la onda folicular, y determino

el inicio de la nueva onda folicular con un promedio de 3,52 ± 3.1 días para los

animales tratados con dispositivos nuevos y de 4,12 ± 3,5 para dispositivos

usados. Como se observó, el día de emergencia de la nueva onda folicular es

similar en este estudio para todos los tratamientos, además, no existe una

diferencia significativa con los estudios mencionados anteriormente. La utilización

del DIB® nuevo fue igualmente eficiente a los usados por segunda y tercera vez

sobre el control del desarrollo de ondas foliculares.

La emergencia de una nueva onda folicular depende del incremento transitorio de

las concentraciones de FSH en la circulación sanguínea. Se ha demostrado que

después de la administración de progesterona y estradiol, las concentraciones de

FSH circulante y la amplitud y frecuencia de los pulsos de LH disminuyeron

críticamente, resultando en la regresión de los folículos dependientes de FSH y LH

(Bó, 1995; Ireland JJ, 1982). Como las concentraciones plasmáticas de estradiol

comienzan a decrecer, el resurgimiento de concentraciones plasmáticas de FSH

aparecen y la emergencia de una nueva onda folicular ocurre aproximadamente 1

día después.

Diferentes preparaciones del estradiol han sido elaboradas con el fin de suprimir la

liberación de FSH en intervalos de tiempo variables (Martínez, 2002). Esteres de

37

estrógeno (Benzoato de estradiol BE, Valerato de estradiol VE y Cipionato de

Estradiol CE) son absorbidos de forma muy lenta después de una inyección

intramuscular; la larga cadena Ester que contienen, los hace de baja solubilidad en

el agua y requieren un largo intervalo de tiempo para que el estradiol sea

absorbido (Mapletoft 2002). Teniendo en cuenta lo anterior, Bó (2000) afirma que

las concentraciones de estradiol circulantes alcanzan un pico máximo 2 horas

después de la inyección de una dosis de 17β-estradiol , seguido de un retorno a

niveles básales alrededor de 36 horas después; cuando se administran 5 mg de

BE o VE resulta en un aumento de las concentraciones circulantes de Estradiol

mucho mas gradual, extendiendo su pico máximo entre 12 – 24 horas y

retornando a niveles básales en aproximadamente 96 horas (Martínez, 2002; Bó, 1993). Estas diferencias en las concentraciones circulantes de estradiol, y el

retraso en la aparición de concentraciones plasmáticas de FSH después de la

inyección de de 2 mg de BE podrían ser las responsables de la reducción o

ampliación de el intervalo en la emergencia de la onda folicular observado en este

estudio para los distintos tratamientos.

Aunque una inyección de 5 mg de BE resultó en elevadas concentraciones

circulantes de estradiol hasta por 96 horas, concentraciones de FSH comienzan a

incrementarse alrededor de 60 horas (Martínez, 2002).Según Duffy (2004), esto

parece indicar que existen otros factores que influyen en la aparición de las

concentraciones circulantes de FSH y que es necesario determinar a partir de

futuras investigaciones. Estas concentraciones de FSH pueden ser responsables

de la emergencia de un nuevo folículo dominante con la subsiguiente emergencia

de una onda folicular; este nuevo folículo dominante crece bajo influencia del

aumento en la frecuencia de pulsos de LH después del retiro del dispositivo

intravaginal.

La administración de bajas dosis de BE ha resultado en una alta sincronización en

la emergencia de las ondas foliculares (Caccia, 1998; Moreno 2001), como

38

ocurrió en el presente estudio. Rhodes (2002) en un experimento con 20 vacas

friesian de primer parto, en el cual, se evaluó el desarrollo folicular posparto

después del tratamiento con un dispositivo intravaginal de Progesterona (CIDR™)

y la inyección intramuscular de 2 mg de BE, demostró la emergencia de un

segundo folículo dominante durante el periodo de inserción del dispositivo en

todas las vacas ciclando normalmente, a diferencia de vacas anestricas en las que

este fenómeno solo alcanzo un 55% de presentación, el tratamiento con BE

disminuyo la persistencia del primer folículo dominante por 3,2 días en vacas

anestricas y en 2.9 días en vacas que se encontraban ciclando normalmente.

De acuerdo a lo mencionado anteriormente, el tratamiento con 2 mg de BE en el

momento de la inserción del dispositivo DIV - B Syntex®, tendría un efecto

significante en la emergencia de un segundo folículo dominante y una segunda

onda folicular en vacas cíclicas, pero no en vacas anéstricas. En los animales de

los tres tratamientos, el segundo folículo dominante emergió durante el periodo de

inserción del dispositivo, lo cual concuerda con lo mencionado por Rhodes (2002). Estos resultados están de acuerdo con otros estudios previos, en los cuales la

inyección de 1 mg de BE en vacas ciclando normalmente en el día 13 del ciclo

estral, resulto en el cese del crecimiento del segundo folículo dominante y la

emergencia de una nueva onda folicular 4.5 días después de la inyección (Burke y col., 2000), aunque los intervalos en la expresión de la segunda onda folicular

en esta investigación son mucho menores que en estudios anteriores, no

obstante, el mecanismo que involucra la menor duración de este periodo no esta

totalmente claro y amerita investigaciones ulteriores.

4.1.3 Número De Folículos Los animales del grupo 2 presentaron un número

promedio de folículos de 6.7135 ± 1.5238, seguido por el grupo 1 con 6.3075 ±

1.4774 folículos y el grupo 3 con 5.7552 ± 1.3708 folículos. Se puede afirmar con

certeza que los animales del tratamiento 2 desarrollaron una mayor cantidad de

39

folículos, ya que existe diferencia significativa entre las medias de los tres

tratamientos (p < 0.05).

Tabla 6. Datos Descriptivos Del Número De Folículos

NUMERO DE FOLICULOS TTO

N

X

S

SX

CV

1 722 6.3075b 1.4774 0.0550 23.423 2 768 6.7135a 1.5238 0.0550 22.698 3 654 5.7552c 1.3708 0.0536 23.818

a,b,c Medias en la misma columna con diferentes superíndices son diferentes (p < 0.05). TTO: tratamiento DD: ondas foliculares totales X: media S: Desviación estándar Sx: Error estándar CV: Coeficiente de Variación

Gráfica 3. Descriptiva Del Número De Folículos

6,3

5,7

6,7

5,2

5,4

5,6

5,8

6

6,2

6,4

6,6

6,8

1 2 3

Tratamientos

Num

ero

de F

olíc

ulos

Numero de Folículos

40

El número de folículos de este estudio es menor al reportado por Evans (1994) para novillas de producción de carne y mucho menor al encontrado por Ruiz

Cortez (1999) con una media de 11 ± 2 folículos, pero mayor al reportado por

Murphy (1990) para vacas tipo carne en lactancia (3.2 +/- 0.2; con un rango de 1-

6) y por Sirois (1988) en novillas Holstein (5,7 ± 0,8; con un rango de 3-8). No

obstante, el número de folículos se vio altamente influenciado por la selección de

folículos de menor diámetro al establecido para este criterio (3 mm). 4.1.4 Tasa De Crecimiento Y Diámetro Del Folículo Dominante El diámetro

del folículo dominante y su respectiva tasa de crecimiento se encuentran en la

tabla 7 y gráfica 4. El folículo dominante de los animales del tratamiento 3 alcanzó

un diámetro de 10,433 ± 1,3760 mm con una tasa de crecimiento de 0.9267 ±

0,5519 mm/día, mayor al diámetro del tratamiento 2 de 10,071 ± 1.9754 mm con

una tasa de crecimiento de 0,6886 ± 0,2830 mm/día y del tratamiento 1 con

9,4200 ± 1.2491 mm de diámetro con tasa de crecimiento de 0,8033 ± 0,4738. La

tasa de crecimiento que reporto mayor desarrollo para el folículo dominante fue la

del tratamiento 3, seguidas por los tratamientos 1 y 2. A pesar del mayor

crecimiento del folículo dominante del tratamiento 3, no se presentaron diferencias

significativas entre las medias de los tres tratamientos. Ver tabla 7 y gráfica 4.

Tabla 7. Datos Descriptivos del diámetro del Folículo Dominante y su Tasa de Crecimiento

∅FD* TC FD* TTO n

X

S

SX

CV

n X

S

SX

CV

1 15 9.4200 1.2491 0.3225 13.260 15 0.8033 0.4738 0.1223 58.9822 7 10.071 1.9754 0.7466 19.614 7 0.6886 0.2830 0.1070 41.0983 12 10.433 1.3760 0.3972 13.188 12 0.9267 0.5519 0.1593 59.553

TTO: tratamiento; ∅: Diámetro; FD: folículo dominante; TC: tasa de crecimiento. * Datos expresados en mm

41

Gráfica 4. Descriptiva Del Diámetro Del Folículo Dominante Y Su Tasa De Crecimiento

9,4210,07 10,43

0,80 0,69 0,93

0,00

2,00

4,00

6,00

8,00

10,00

12,00

1 2 3

Tratamientos

mm Diametro FD

TC FD

El diámetro máximo del folículo dominante fue mayor al descrito por Figuereido (1997) en vacas Nelore y al reportado por Rhodes (1995) en novillas Brahman, y

menor para el caso de hembras Bos taurus descrito por Murphy (1990). En el

presente estudio, se observo el crecimiento de folículos dominantes de buen

tamaño con una tasa de crecimiento, acorde a lo descrito por Ruiz Cortez (1999) en vacas Brahman en postparto.

4.1.5 Tasa De Crecimiento Y Diámetro Del Folículo Subordinado El mayor

diámetro del folículo subordinado lo alcanzaron los animales del tratamiento 3 con

un promedio 6,8417 ± 0,6487 mm, seguido del tratamiento 1 con un promedio de

6,5533 ± 0,5097 mm y el tratamiento 2 con un promedio de 6,4286 ± 0,5155 mm.

El promedio de tasa de crecimiento del tratamiento 3 fue de 0,6192 ± 0,1758

42

mm/día, del tratamiento 2 fue de 0,5571 mm/día y en el tratamiento 1 fue de

0,5273. No existe diferencia significativa entre la tasa de crecimiento y el diámetro

del folículo subordinado entre los tres tratamientos.

Tabla 8. Datos Descriptivos del diámetro del Folículo Subordinado y su Tasa de Crecimiento

∅FS* TC FS* TTO n

X

S

SX

CV

n X

S

SX

CV

1 15 6,5533 0,5097 0,1316 7,7780 15 0,5273 0,2048 0,0529 38,8332 7 6,4286 0,5155 0,1948 8,0185 7 0,5571 0,1835 0,0693 32,9293 12 6,8417 0,6487 0,1873 9,4819 12 0,6192 0,1758 0,0508 28,398

TTO: tratamiento; ∅: Diámetro; FS: folículo subordinado; TC: tasa de crecimiento. * Datos expresados en mm Gráfica 5. Descriptiva Del Diámetro Del Folículo Subordinado Y Su Tasa De Crecimiento

6,55 6,436,84

0,53 0,56 0,62

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

5,00

6,00

7,00

8,00

1 2 3

Tratamientos

mm Diametro del FS

TC FS

43

El diámetro máximo alcanzado por el folículo subordinado es mucho mayor al

reportado por Ruiz Cortez (1999) en vacas Cebú lactantes (5.0 ± 1 mm), y similar

al reportado por Henao (2000) en un estudio con vacas Brahman lactantes y no

lactantes.

Básicamente, el crecimiento folicular se realiza en forma de ondas, conformadas

por cohortes de folículos que son seleccionados para crecer a partir de las reserva

en reposo, estos inician un rápido crecimiento bajo el estimulo de la hormona FSH,

comprobándose en ellos un incremento del acido ribonucleico mensajero (RNAm)

para la enzima aromatasa P450, quien es responsable de la biotransformación de

andrógenos en estradiol (Savio, 1993; Badinga, 1992).

Entre los folículos reclutados en cada onda se establece una competencia por la

dominancia, en la cual un solo folículo de la cohorte adquiere el desarrollo

funcional y estructural que le permitirá seguir creciendo en un ambiente de bajas

concentraciones de gonadotropinas, al tiempo que sus compañeros de cohorte

sufren atresia (Adams ,1999; Ireland y col., 2000).

Para el establecimiento de la dominancia folicular se requiere que ocurra

divergencia o desviación, que corresponde al tiempo durante el cual el folículo

dominante y el subordinado más desarrollado crecen a una tasa diferente antes

que el subordinado manifieste atresia Bodensteiner (1996).

Dentro de los aspectos funcionales y estructurales que caracterizan las células del

folículo dominante, están los altos niveles de RNAm para receptores de

gonadotropinas, principalmente receptor de hormona luteinizante (LHR), proteínas

y enzimas involucradas en la síntesis de andrógenos y progestágenos:

17αhidroxilasa (17αOH), aromatasa P450 (P450), 3β hidroxiesteroide

deshidrogenasa (3βHSD) y proteína regulatoria esteroidogénica aguda (StAR) y . La acción de IGF-I en sinergismo con la FSH como amplificadores de la actividad

44

aromatasa en células de la granulosa, esta asociada a la biosíntesis y aumento de

estradiol (Webb, 2004); El aumento de LHR en las células de la granulosa del

folículo dominante posiblemente incrementan la actividad aromatasa en respuesta

a gonadotropinas, o provoca un cambio de dependencia de FSH a hormona

luteinizante (LH). Esto, aumenta o mantiene la capacidad del folículo dominante

para producir más estradiol que los folículos subordinados (Fortune 2000).

El folículo preovulatorio crece, gana gran tamaño y produce estradiol suficiente

para inducir el comportamiento del estro y el pico preovulatorio de LH, lo cual es

seguido por la ovulación después de 18-32 horas. El tamaño de un folículo

ovulatorio es altamente variable entre las vacas oscilando entre 15 y 22 mm

aproximadamente Henao (2000).

El E2 y la Inhibina producidos por el folículo dominante son responsables de la

atrésia de los folículos subordinados; promueven la expresión de LHR en las

células de la granulosa del folículo dominante y ejerce un estímulo inhibitorio sobre

la liberación de FSH de la adenohipófisis, haciendo que el crecimiento del folículo

dominante sea dependiente de LH hasta alcanzar el tamaño preovulatorio (Xu, 1995).

La atresia folicular es un proceso regulado hormonalmente, y diferentes factores

intervienen dependiendo el estadio de desarrollo folicular. Cuando los folículos se

encuentran creciendo, estos expresan receptores para FSH y son dependientes

de su estimulo para continuar su crecimiento, sin embargo, cuando ocurre

dominancia folicular, la secreción de FSH comienza a disminuir por efecto de la

inhibina y E2, generando la atresia de aquellos folículos dependientes de FSH. La

disminución o ausencia de factores de crecimiento paracrinos que incluyen al

Factor de Crecimiento Insulínico I (IGF-I), Factor básico de Crecimiento

Fibroblastico (bFGF), activina e Interlukina 1β (IL - 1β) puede provocar atresia;

sumado a lo anterior, existen factores involucrados directamente en la inducción

45

de Atresia como el Factor de Necrosis Tumoral α (TNFα), interleukina 6 (IL - 6) y

radicales libres (Kaipia y Hsueh, 1997). Los folículos de menor tamaño contienen

una mayor concentración de Factor de Crecimiento Epidérmico, (EGF) que tiene

un efecto inhibitorio autocrino sobre las células de la granulosa; a su vez, las

células de la teca del folículo dominante también producen EGF, que actúa

paracrinamente inhibiendo el crecimiento de los folículos subordinados

(Driancourt, 1991). La presencia del sistema prorenina – renina - angiotensina

(PRAS) en folículos preovulatorios de bovino, hace presumir, que tiene influencia

sobre la producción de estradiol (Nielsen y col. 2001). Mukhopadhyay (1996)

determinó que LH influye en la producción del sistema PRAS a partir de las

células de la granulosa, el cual se ha visto asociado a la atresia folicular;

posteriormente evaluó el efecto de diversos factores mediadores de crecimiento

como TGFα y BFGF sobre la producción de prorenina a partir del estimulo de LH

y observó que todos estos factores agonistas en el proceso de atresia, inhibieron

la secreción de prorenina estimulada por LH de forma dosis – dependiente. En

conclusión, la supresión del PRAS ovárico en células de la granulosa normales, a

partir de factores de crecimiento derivados de las mismas, pueden evitar que un

folículo sufra atresia.

Según diversos autores el crecimiento folicular en un protocolo de sincronización

de la ovulación se manifiesta por el mecanismo descrito a continuación. Según

Adams (1992) la progesterona liberada a partir de la colocación del dispositivo

intravaginal tiene un rol importante sobre la dinámica folicular ovárica, provocando

la regresión del folículo dominante y acelerando el inicio de una nueva onda

folicular, cesando la elaboración de productos foliculares como estrógenos e

inhibina, lo cual genera el aumento de FSH (Webb, 2004), responsable del

reclutamiento de los folículos de la nueva onda folicular. La extracción del

dispositivo provoca la caída de Progesterona a niveles subluteales (< 1 ng/ml) que

inducen el incremento de la frecuencia de los pulsos de LH, el crecimiento y la

persistencia del folículo dominante con concentraciones muy altas de estradiol,

46

que provocan el estro y a nivel endocrino inducen finalmente el pico de LH que es

seguido por la ovulación Bó (1995). Para que todo esto sea posible, es necesaria

la aplicación de estrógenos al inicio del tratamiento para provocar la atresia de

todos los folículos presentes e impedir de esta forma la formación de folículos

persistentes que interfieren negativamente en la fertilidad Bó y col. (1994, 1995, 1998). Se puede concluir que los mecanismos de crecimiento para el folículo

dominante y el subordinado de mayor diámetro son similares entre el provocado

artificialmente por un protocolo de sincronización de la ovulación y los eventos

fisiológicos normales.

4.2 TASA DE PREÑEZ La tasa de preñez a los 70 días para el tratamiento 3 fue del 50 %, seguida por

el tratamiento 1 con un 45% y por ultimo, el tratamiento 2 alcanzo un 31.6%,

donde se puede observar que existe una diferencia significativa entre los

tratamientos. Aunque estos resultados son similares a los encontrados por Cutaia (2001) y Aviles (2004), con tasas de preñez que oscilan en un rango entre el 44%

- 55% para dispositivos nuevos y 57.6% - 61.9% para dispositivos usados en

vacas y novillas cruce B. taurus x B. indicus, pero mayores a los encontrados por

Baruselli y col (2001) que desarrolló un estudio en Novillas Nelore (Bos indicus)

sometiéndolas a un protocolo de sincronización de la ovulación con dispositivos

intravaginales de liberación de progesterona CIDR® que presentaron una baja

tasa de ovulación (34%) y por consiguiente, una baja tasa de preñez al final del

tratamiento, lo que indica una reducida eficiencia de esta metodología de

sincronización en esta especie. No obstante, novillas Bos taurus han presentado

satisfactorias tasas de preñez (60%) cuando han sido sincronizadas con

dispositivos intravaginales de Progesterona (Cutaia, 2003).

47

Tabla 9. Descriptiva del Porcentaje de Preñez

Total TTO 1 TTO 2 TTO 3 Valor de p χ2 GL

25/59 (42%) 9/20 (45%) 6/19 (31.6%) 10/20 (50%) 0.4869 1.44 2 TTO: tratamiento. χ2: Chi cuadrado GL: Grados de Libertad.

Aunque los resultados de este estudio concluyen en tasas de preñez mas bajas a

las reportadas por otros autores, es importante resaltar que existen diferencias

entre la fisiología reproductiva entre Bos taurus y Bos indicus, lo que puede

determinar la respuesta a los tratamientos de sincronización de la ovulación. Una

de las diferencias marcadas entre especies está relacionada con los niveles de

progesterona durante el ciclo estral. Randel (1977) citado por Baruselli (2005) determino mediante un estudio, que las hembras de razas Bos indicus presentan

niveles de progesterona circulantes menores a hembras Bos taurus, además, altas

concentraciones de progesterona disminuyen la frecuencia de liberación de LH y

por consiguiente pueden retrasar o disminuir el crecimiento folicular Burke (1996), Analizando los resultados encontrados individualmente, esto establecería que las

vacas y novillas Brahman (Bos indicus), son mas sensibles a los niveles

circulantes de progesterona liberados por los dispositivos intravaginales de primer

uso, por lo tanto la utilización de dispositivos usados por tercera vez es una

alternativa confiable para la realización de protocolos de sincronización de la

ovulación. Una opción viable para disminuir el efecto de la progesterona sobre

animales Bos indicus, es la utilización de dispositivos intravaginales con una

menor dosis de P4 (DIB Syntex® de 0.5 g de P4), disponibles actualmente en el

mercado.

La posible presencia de folículos dominantes persistentes puede estar relacionada

con la baja tasa de preñez encontrada en el proyecto. Las concentraciones

subluteales de progesterona durante un protocolo de sincronización de la

ovulación, inducen el incremento en la frecuencia pulsátil de LH resultando en la

48

persistencia del folículo dominante (Bridges y Fortune, 2003). En vacas tipo

carne, los folículos preovulatorios de gran tamaño que mantuvieron la dominancia

por un largo periodo de tiempo (5 días antes del incremento de concentraciones

circulantes de LH y con un crecimiento lento) fueron asociados a grandes

concentraciones de estrógenos y descenso en la tasa de concepción (36%),

comparados con folículos preovulatorios de menor tamaño (91%) (Breuel 1993). La exposición del oocito a incrementos frecuentes de LH, lo levan a la reanudación

temprana de la meiosis (Revah y Butler, 1996) y los cambios bioquímicos y

morfológicos en oocitos provenientes de folículos persistentes disminuyen la

fertilidad en el ganado bovino debido a mortalidad embrionaria antes del estadío

de 16 células (Ahmad y col. 1995). La presencia de folículos persistentes no

produce alteraciones en el desarrollo potencial de oocitos provenientes de

folículos pequeños; cuando el folículo persistente desaparece, el desarrollo

folicular vuelve a la normalidad (Smith y Stevenson, 1995).

Un hallazgo común fue la presentación de exudados mucopurulentos en algunas

de las hembras sometidas al tratamiento (22%). No se colectaron hisopados de

estas secreciones debido a que no se contaban con los materiales necesarios

para su recolección; aun así, fue posible realizar la fijación de muestras en

laminas portaobjetos en las que se realizó una tinción de Gram, y posteriormente

fueron enviadas a un laboratorio local (Laboratorio Clínico del hospital de Tame)

para su análisis microscópico, el cual determinó la presencia de bacilos Gram (-)

en bajas proporciones (1+) y la presencia abundante de células

polimorfonucleares (4+). El diagnóstico emitido por la microbióloga Margery Zorro

fue Leucorrea de carácter no inflamatorio, con la advertencia de dicho diagnóstico

era presuntivo debido a la ausencia de cultivo e incubación de la bacteria

encontrada en medios adecuados, lo que imposibilita su aislamiento y

clasificación. Debido a la manifestación de este fenómeno en algunos de los

animales indistintamente del número de usos, se decidió el uso de fundas

sanitarias en el momento de la inseminación.

49

Baruselli (2005) realizo un estudio para determinar si la vaginitis provocada por la

presencia de los dispositivos intravaginales podría disminuir la tasa de concepción

de vacas inseminadas a tiempo fijo, utilizando fundas sanitarias en uno de los

grupos experimentales, esperando encontrar un incremento en la tasa de preñez

en este grupo. La tasa de concepción para los animales en los que se utilizaron

fundas sanitarias en el momento de la inseminación fue del 60,4% y en las vacas

en las que inseminó sin utilizar fundas sanitarias fue del 54,3% (p>0.05). Se puede

concluir que el exudado presente en las vacas inseminadas a tiempo fijo en este

estudio no afecto el éxito del protocolo, independientemente del uso o no uso de

fundas sanitarias en el momento de la inseminación.

Los animales seleccionados para el proyecto se encontraban en una Condición

Corporal (CC) de 6.5 a 7 (escala de 1 a 9), ideal para la respuesta al tratamiento

de sincronización, pero debido a la intensa temporada de calor y escasez de

lluvias en los meses siguientes a la realización del protocolo, la disponibilidad de

forraje disminuyó y como consecuencia del bajo consumo de forraje, los animales

disminuyeron de CC entre 2 y 2.5 puntos hacia el día de la realización del

diagnóstico de gestación (día 70 post – inseminación). Moura y col (2002) determinaron el efecto de la CC sobre la tasa de preñez de vacas Nelore lactantes

y cruces (Bos indicus x Bos taurus), tratadas con CRESTAR y eCG asociados a

una dosis de Benzoato de estradiol 24 horas después de retirar el implante; las

tasas de concepción para animales con una CC ≥ 3 fueron mas bajas (31,7%;

20/63) comparados con animales con CC de 3.5 (46,8%; 88/188) y CC de 4

(56%; 42/75), demostrando que el estado nutricional – manifestado por el

indicador de CC - influye directamente en la tasa de preñez. Aun así, se encontró

que existe una tasa de preñez menor a la encontrada en el estudio mencionado.

Silke y col. (2002) observaron que las vacas que perdieron 1 unidad de CC desde

el día 28 a 56 de gestación presentaron un grado de asociación entre estas

variables (Odds Ratio (OR) = 3.2) para la perdida de la preñez en este periodo.

50

Por lo tanto, el estado metabólico de la vaca, como evidencia de los cambios en

CC, afecta la supervivencia embrionaria.

La CC es uno de los parámetros más utilizados para estimar el estado nutricional

de los bovinos, esta consiste en una evaluación subjetiva de la grasa subcutánea

que el animal posee y que por lo tanto, constituye una reserva energética para el

animal en un momento determinado Randel (2002). El tejido graso es considerado

un órgano endocrino, y uno de sus principales productos de secreción es la

leptina; se ha determinado que es la hormona de la saciedad, la concentración de

leptina puede cambiar como respuesta a la ingestión de calorías y disminuir el

apetito, aumentar la tasa metabólica, regular la ganancia de peso y deposición de

tejido graso Spicer (1997). A nivel central, la leptina produce estímulos para la

secreción de LH, mediados por la liberación primaria de Neuropeptido Y (NPY) en

el Hipotálamo, que a su vez generan un estimulo directo sobre GnRH para la

secreción de LH, lo cual es dependiente del estado fisiológico del animal Williams (2002). En condiciones de estrés nutricional la expresión de RNAm para leptina es

suprimida y el NPY se eleva a nivel central, resultando en la disminución de la

secreción de LH y estimulando el consumo de alimento. La activación del sistema

NPY aparece como consecuencia de cambios fisiológicos crónicos como los

provocados por disminución en el consumo normal de forraje (estrés nutricional)

Barb (2004). La disminución en el consumo de alimento de los animales

involucrados en este estudio pudo desencadenar los fenómenos fisiológicos

descritos anteriormente, desatando posiblemente el descenso en la secreción

pulsátil de LH con la consecuente incapacidad para mantener el cuerpo luteo y a

su vez la producción de Progesterona necesaria para el desarrollo normal de la

gestación y conllevando a la perdida de la misma, razón por la cual podría

justificarse el diagnógstico de preñez negativo hacia el día 70 post – inseminación

y un 30% de animales anéstricos (sin estructuras ováricas detectables por

palpación rectal y ultrasonografía). Por consiguiente, una buena CC es el indicador

51

ideal para determinar la adecuada secreción de leptina que contribuya al

mantenimiento adecuado de niveles de LH circulantes durante la gestación. La literatura reporta en varios estudios la presencia de muerte embrionaria como

una de las causas de las bajas tasas de peñez en animales sometidos a

protocolos de sincronización de la ovulación. Lucy (2001) afirma que existen

estudios que han evaluado la presentación de muerte embrionaria temprana en

Vacas de leche, posteriormente a la realización de protocolos de inseminación a

tiempo fijo. Smith y Stevenson (1995), observaron que las vacas inseminadas

después de desarrollar estro espontáneamente, tuvieron menores tasas de

supervivencia embrionaria (81.8%) en comparación con las vacas que fueron

inseminadas a tiempo fijo (93.3%). Los tratamientos de sincronización de celos

que involucran el uso de progestágenos en periodos de tiempo prolongados,

reducen la tasa de concepción e incrementan la perdida embrionaria, lo que se

atribuye a la persistencia prolongada de el folículo ovulatorio (Ahmad y col. 1995). Los protocolos de sincronización de celos realizados en animales Bos taurus con

un folículo dominante desarrollándose en un ambiente de bajas concentraciones

de progesterona, pueden manifestar una baja tasa de concepción, posiblemente

como resultado de muerte embrionaria (Santos 2004). Macmillan (2003) indicó

que en los protocolos de inseminación a tiempo fijo en vacas lecheras, utilizando

dosis habituales de GnRH (100 μg de gonadorelina) para inducir la ovulación,

puede disminuir la tasa de concepción, debido a la ineficacia del cuerpo luteo

cuando folículos pequeños son inducidos a ovular y sugiere que vacas

inseminadas en el desarrollo de protocolos Ovsynhc tienen una alta incidencia de

desarrollar ciclos estrales cortos. A pesar de la falta de evidencias respecto al

incremento de la perdida embrionaria como resultado de protocolos de

inseminación a tiempo fijo, es posible que dichos protocolos limiten la longitud del

proestro, dando como resultado la presentación de folículos incompetentes que

comprometen la fertilidad, incrementando las perdidas en la preñez; siendo

52

necesaria la profundización de investigaciones posteriores en este aspecto para

poder determinar las causas exactas de este suceso.

53

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1 CONCLUSIONES

La utilización del DIB® nuevo fue igualmente eficiente a los usados por segunda y

tercera vez sobre el control del desarrollo de ondas foliculares ya que el día de

emergencia promedio de la primera onda folicular para el tratamiento 1 fue el 3

±1.0954, en el tratamiento 2 el día 4 ± 2.0736 y en el tratamiento 3 el día 3 ±

0.8944; para la segunda onda folicular en el tratamiento 1, el día de emergencia

de la onda folicular fue en promedio el 6 ± 1.4142, para el tratamiento 2 el día 6 ±

0 y para el tratamiento 3 fue el día 7 ± 0.5774, sin una diferencia estadísticamente

significativa.

La reducción o ampliación del intervalo en la emergencia de la onda folicular

observado en este estudio para los distintos tratamientos pudo deberse a

diferencias en las concentraciones circulantes de estradiol en los animales de los

tres tratamientos, y un retraso en la aparición de concentraciones plasmáticas de

FSH después de la inyección de de 2 mg de BE.

La inyección de BE puede resultar en elevadas concentraciones circulantes de BE

hasta por 96 horas, las concentraciones de FSH comienzan a incrementarse

alrededor de 60 horas después de la aplicación de los estrógenos (Martínez, 2002). Según Duffy (2004), esto parece indicar que existen otros factores ser

responsables de la emergencia de un nuevo folículo dominante con la

subsiguiente emergencia de una onda folicular; este nuevo folículo dominante

crece bajo influencia del aumento en la frecuencia de pulsos de LH después del

retiro del dispositivo intravaginal. Es necesaria la realización de futuras

54

investigaciones acerca de los factores que influyen en la aparición de las

concentraciones circulantes de FSH.

Los intervalos en la emergencia de la segunda onda folicular en esta investigación

son mucho menores que en estudios anteriores – 3 días en promedio, durante el

periodo de inserción del dispositivo - no obstante, el mecanismo que involucra la

menor duración de este periodo no está totalmente claro y amerita investigaciones

ulteriores.

Los mecanismos de crecimiento para el folículo dominante y el subordinado de

mayor diámetro son similares entre el provocado artificialmente por un protocolo

de sincronización de la ovulación y los eventos fisiológicos normales debido a que

en un protocolo, la fisiología reproductiva es manipulada a partir de hormonas que

imitan el desarrollo normal del proestro durante el ciclo estral.

Altas concentraciones de progesterona disminuyen la frecuencia de de liberación

de LH y por consiguiente pueden retrasar o disminuir el crecimiento folicular; esto

establecería que las vacas y novillas Brahman (Bos indicus), son mas sensibles a

los niveles circulantes de progesterona liberados por los dispositivos

intravaginales, por lo tanto, la utilización de dispositivos usados por segunda y

tercera vez son una alternativa confiable para la realización de protocolos de

sincronización de la ovulación, con tasas de preñez favorables.

El exudado vaginal presente en las vacas días antes a ser inseminadas en este

estudio, no afecto el éxito del protocolo, independientemente del uso de fundas

sanitarias en el momento de la inseminación.

La presencia de folículos persistentes pudo estar relacionada con la baja tasa de

preñez del proyecto, debido a que tienen una alta relación con bajas tasa de

concepción, como consecuencia del envejecimiento de oocitos provenientes de

55

estos folículos que son expuestos a picos frecuentes de LH y sufren cambios

morfológicos y bioquímicos que provocan la muerte del embrión antes del estadio

de 16 células.

A pesar de la falta de evidencias respecto al incremento de la perdida embrionaria

como resultado de protocolos de inseminación a tiempo fijo, es posible que dichos

protocolos limiten la longitud del proestro, dando como resultado la presentación

de folículos incompetentes que comprometen la fertilidad, incrementando las

perdidas en la preñez; siendo necesaria la profundización de investigaciones

posteriores en este aspecto para poder determinar las causas exactas de este

suceso.

5.2 RECOMENDACIONES Es necesario realizar un mayor número de investigaciones de este tipo en

diferentes lugares del país y con un número mayor de animales, para recolectar

más datos acerca del comportamiento de la dinámica folicular de hembras bovinas

cebuínas de raza Brahman.

Los estudios en el área de fisiología reproductiva con énfasis en dinámica folicular

son importantes para determinar las características y el comportamiento

reproductivo de las distintas razas bovinas en esta parte del trópico, por ende, la

facultad debe impulsar proyectos de investigación relacionados con el tema.

En trabajos futuros se recomienda utilizar animales en otros estados fisiológicos

sin importar grupos etáreos que relacionen edad y número de partos, ya que el

presente estudio se vio limitado por estas variables y es necesario determinar

parámetros fisiológicos para este tipo de animales.

56

Implementar planes de manejo nutricional en épocas de baja disponibilidad de

forraje para evitar el descenso brusco de la CC, que pueden tener efectos

negativos durante la preñez de los animales en los primeros 50 días post servicio,

aunque es necesario investigar mas acerca de este fenómeno para determinar la

causa exacta que tiene sobre el mantenimiento de la gestación.

La utilización de protocolos de sincronización de la ovulación e inseminación a

tiempo fijo utilizando dispositivos intravaginales DIV - B Syntex® nuevos y usados

por segunda y tercera vez es una alternativa viable para el manejo reproductivo de

ganaderías de carne en el país.

57

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ANEXOS Gráficas De Dinamica Folicular De Los Animales Del Tratamiento 1

Dinámica Folicular Animal 718

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m) FS

FD

Lineal (FD)

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Dinámica Folicular Animal 740

0

2

4

6

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10

12

14

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

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FDFSFD2FS2Lineal (FS2)Lineal (FS)Lineal (FD)Lineal (FD2)

77

Dinámica Folicular Animal 783

0

2

4

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8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

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FDFS

FD2

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Lineal (FD2)

Lineal (FD)Lineal (FS)

Lineal (FS2)

Dinámica Folicular Animal 786

0

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2

3

4

5

6

7

8

9

0 2 4 6 8 10

Dia

Dia

met

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FD

Lineal (FD)

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78

Dinámica Folicular Animal 794

0

2

4

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12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

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Lineal (FD)

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Dinámica Folicular Animal 799

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m) FD

FSLineal (FS)Lineal (FD)

79

Gráficas De Dinámica Folicular De Los Animales Del Tratamiento 2

Dinámica Folicular Animal 743

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m) FD

FS

Lineal (FD)

Lineal (FS)

Dinámica Folicular Animal 762

0

1

2

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4

5

6

7

8

9

10

0 2 4 6 8 10

Día

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FD2

FS2

Lineal (FD)Lineal (FD2)

Lineal (FS)

Lineal (FS2)

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Dinámica Folicular Animal 763

0

2

4

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12

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0 2 4 6 8 10

Día

Diá

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Lineal (FD)

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Dinámica Folicular Animal 765

0

2

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0 2 4 6 8 10Día

Diá

met

ro (m

m)

FD

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Lineal (FD)

Lineal (FS)

81

Dinámica Folicular Animal 766

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro

FD

FS

FD2FS2

Lineal (FD)

Lineal (FD2)

Lineal (FS)Lineal (FS2)

82

Gráficas De Dinámica Folicular De Los Animales Del Tratamiento 3

Dinámica Folicular Animal 715

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10Día

Diá

met

ro (m

m)

FDFSFD2FS2Lineal (FD)Lineal (FS)Lineal (FD2)Lineal (FS2)

Dinámica Folicular Animal 735

0

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4

6

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10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m)

FD

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FD2FS2

Lineal (FD)Lineal (FS)

Lineal (FS2)

83

Dinámica Folicular Animal 738

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m) FD

FSLineal (FD)Lineal (FS)

Dinámica Folicular Animal 759

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m)

FD

FS

FD2

FS2

Lineal (FD)Lineal (FS)

Lineal (FD2)

Lineal (FS2)

84

Dinámica Folicular Animal 761

0

2

4

6

8

10

12

14

16

0 2 4 6 8 10Día

Diá

met

ro (m

m)

FD

FS

Lineal (FD)

Lineal (FS)

Dinámica Folicular Animal 805

0

2

4

6

8

10

12

0 2 4 6 8 10

Día

Diá

met

ro (m

m)

FD

FS

Lineal (FD)

Lineal (FS)

85