Paolo Chiarugi

U.O. Analisi Chimico-Cliniche

AOUPPisa

VEQ Proteine SpecificheVEQ Proteine SpecificheCiclo 2016Ciclo 2016

Proteine Specifiche o Aspecifiche ?Proteine Specifiche o Aspecifiche ?PROTEINAPROTEINA Val.Rif. (g/L)Val.Rif. (g/L) SintesiSintesi

Alfa 1 Alfa 1 -- AntitripsinaAntitripsina 0,9 0,9 -- 2,02,0 FegatoFegato

Alfa 1 Glicoproteina AcidaAlfa 1 Glicoproteina Acida 0,5 0,5 -- 1,21,2 FegatoFegato

Alfa 2 Alfa 2 -- MacroglobulinaMacroglobulina 1,3 1,3 –– 3,03,0 FegatoFegato

AptoglobinaAptoglobina 0,3 0,3 –– 2,02,0 FegatoFegato

Beta 2 Beta 2 -- MicroglobulinaMicroglobulina 0,0008 0,0008 –– 0,00250,0025 UbiquitariaUbiquitaria

C3C3 0,9 0,9 –– 1,81,8 FegatoFegato

C4C4 0,1 0,1 –– 0,40,4 FegatoFegato

CeruloplasminaCeruloplasmina 0,2 0,2 –– 0,60,6 FegatoFegato

Cistatina CCistatina C 0,0006 0,0006 –– 0,00140,0014 UbiquitariaUbiquitaria

Fattore ReumatoideFattore Reumatoide <10 UI/mL<10 UI/mL S.I.S.I.

IgAIgA 0,7 0,7 –– 4,04,0 S.I.S.I.

IgEIgE <0,00043<0,00043 S.I.S.I.

IgGIgG 7 7 –– 1616 S.I.S.I.

IgMIgM 0,4 0,4 –– 2,32,3 S.I.S.I.

KappaKappa--Catena LeggeraCatena Leggera 2 2 -- 44 S.I.S.I.

LambdaLambda--Catena LeggeraCatena Leggera 1 1 –– 2,42,4 S.I.S.I.

Proteina C ReattivaProteina C Reattiva < 0,005< 0,005 FegatoFegato

PrealbuminaPrealbumina 0,2 0,2 –– 0,40,4 FegatoFegato

Proteina Legante il RetinoloProteina Legante il Retinolo 0,03 0,03 –– 0,060,06 FegatoFegato

Recettore Solubile TransferrinaRecettore Solubile Transferrina 0,0008 0,0008 –– 0,00180,0018 UbiquitariaUbiquitaria

TransferrinaTransferrina 2,0 2,0 –– 3,63,6 FegatoFegato

VEQ Proteine SpecificheVEQ Proteine Specifiche

4,7

6,8

8,8

8,8

8,8

9,1

27,6

28,5

35,3

37,1

37,1

39,1

43,8

55,9

69,1

69,1

76,2

82,6

83,2

83,2

88,8

98,2

87,1

0 20 40 60 80 100 120

Proteina Legante Retinolo

Recettore Solubile Transferrina

Alfa 2 - Macroglobulina

Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG

Cistatina C

Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG

Prealbumina

Ceruloplasmina

Alfa 1 - Antitripsina

Kappa - Catena Leggera

Lambda - Catena Leggera

Aptoglobina

IgE

Beta 2 - Microglobulina

C3

C4

Alfa 1 Glicoproteina Acida

IgM

IgA

IgG

Fattore Reumatoide

Transferrina

PCR

Frequenza Frequenza di dosaggiodi dosaggio

340 CENTRI PARTECIPANTI, 18 REGIONI:Lombardia: 46%Toscana: 21%Piemonte: 7,5%Abruzzo: 6,6%Marche: 5%

Metodi usati 20538 test, campioni 7 su 8Metodi usati 20538 test, campioni 7 su 8

METODO % VARIANTI

STRUMENTO e/o REAGENTE + STRUMENTO e/o REAGENTE +

USATOUSATO

AGGLUTINAZIONE 0,4 11 SIEMENS

CARD 0,1 4 I-CHROMA BODITECH

CHEMILUM. 1,2 12 IMMULITE 2000 MEDICAL SYSTEM

COLORIMETRICO 0,004 2 CHEMACOMP 100 G.D.

DRY CHEMISTRY 0,4 4 VITROS ORTHO

ELFA 1,13 2 VIDAS BIOMERIEUX

IMMUNODIFF. 1,7 13 LIOFILCHEM

IMMUNOENZ. 0,15 7 CHORUS DIESSE

IMMUNOFLUOR. 0,2 4 AIA TOSOH

IMMUNOPREC. 0,005 1 NYCOCARD SENTINEL

IMMUNOTURB. 64,4 167 COBAS ROCHE

MEIA 0,07 2 AXSYM ABBOTT

NEFELOMETRICO 28,5 34 B.N. SIEMENS

% Metodi usati per analisi% Metodi usati per analisi

TURBIDIM. NEFELOM. RID ALTRO

Alfa 1 - Antitripsina 42 58 0 0

Alfa 1 Glicoproteina Acida 68 27 4 1

Alfa 2 - Macroglobulina 13 86 0 1

Aptoglobina 55 45 0 0

Beta 2 - Microglobulina 47 23 0 30

C3 68 29 3 0

C4 68 29 3 0

Ceruloplasmina 34 64 2 0

Cistatina C 15 85 0 0

Fattore Reumatoide 76 18 0 6

IgA 74 22 4 0

IgE 10 19 0 71

IgG 73 23 4 0

IgM 74 22 4 0

Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG 9 91 0 0

Kappa - Catena Leggera 40 60 0 0

Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG 8 92 0 0

Lambda - Catena Leggera 40 60 0 0

PCR 86 8 0 6

Prealbumina 55 45 0 0

Proteina Legante Retinolo 0 98 0 2

Recettore Solubile Transferrina 0 86 0 14

Transferrina 83 14 2 1

CRM 470: la nuova era delle proteine specificheCRM 470: la nuova era delle proteine specifiche

Cause Cause d’inaccuratezzad’inaccuratezza

Trasferimento dei valori da CRM a calibratori e controlli

Eterogeneità delle proteine

Effetto matrice

ERMERM--DA470k/IFCCDA470k/IFCC

%% VARIANTIVARIANTI STRUMENTO e/o STRUMENTO e/o REAGENTI + USATIREAGENTI + USATI

IMMUNODIFFUSIONE IMMUNODIFFUSIONE RADIALERADIALE

1,71,7 1313 SIEMENSSIEMENS

LIOFILCHEMLIOFILCHEM

MEDICMEDIC

HUMATECHHUMATECH

BIODEVICEBIODEVICE

NEFELOMETRIANEFELOMETRIA 28,528,5 3434 VISTAVISTA SIEMENSSIEMENS

BN II BN II SIEMENSSIEMENS

IMAGE IMAGE BECKMANBECKMAN

ARRAY 360ARRAY 360 BECKMANBECKMAN

TURBIDIMETRIATURBIDIMETRIA 64,464,4 167167 COBAS/MODULARCOBAS/MODULAR ROCHEROCHE

ARCHITECT ARCHITECT ABBOTTABBOTT

ADVIAADVIA SIEMENSSIEMENS

AU, LX, CX, DXAU, LX, CX, DX BECKMANBECKMAN

ILABILAB IL/BIOKITIL/BIOKIT

KONELABKONELAB SCLAVOSCLAVO

Principali Principali metodi metodi usatiusati

Immunodiffusione RadialeImmunodiffusione Radiale

NefelometriaNefelometria

TurbidimetriaTurbidimetria

Curva di HeidelbergerCurva di Heidelberger--KendallKendall

0 5 10 15 20 25 30 35

Fattore Reumatoide

Cistatina C

Ceruloplasmina

C4

C3

Beta 2 - Microglobulina

Aptoglobina

Alfa 2 - Macroglobulina

Alfa 1 Glicoproteina Acida

Alfa 1 - Antitripsina

2005

2006

2007

2008

2009

2010

2011

2012

2013

2014

2015

2016

CVCV(media)(media)

0 5 10 15 20 25

Transferrina

Recettore Solubile Transferrina

Proteina Legante il retinolo

Prealbumina

PCR

Lambda - Catena Leggera

Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG

Kappa - Catena Leggera

Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG

IgM

IgG

IgE

IgA

2005

2006

2007

2008

2009

2010

2011

2012

2013

2014

2015

2016

CVCV(media)(media)

CVCV20162016

Analita Media Min MaxAlfa 1 - Antitripsina 5,2 2,8 10,3Alfa 1 Glicoproteina Acida 6,8 4,3 10,3Alfa 2 - Macroglobulina 15,8 15,0 16,6Aptoglobina 5,0 2,2 11,3Beta 2 - Microglobulina 9,0 4,5 22,2C3 4,6 2,4 7,6C4 5,5 3,7 10,7Ceruloplasmina 7,9 2,7 13,7Cistatina C 11,7 6,4 18,2Fattore Reumatoide 8,3 3,0 20,3IgA 4,8 2,2 23,4IgE 9,3 3,9 19,7IgG 4,4 1,8 18,7IgM 5,1 1,6 21,9Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG 5,0 4,3 6,5Kappa - Catena Leggera 6,3 4,3 9,2Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG 4,9 3,2 10,8Lambda - Catena Leggera 6,5 4,7 8,8PCR 6,0 3,2 16,5Prealbumina 6,7 2,8 12,1Proteina Legante Retinolo 6,3 6,3 6,3Recettore Solubile 8,2 0,4 11,1Transferrina 4,8 1,7 13,9

CVCV20162016

Metodo Media Min MaxCHEMILUM. 11,4 7,6 20,0CHEMILUM. LIAISON 22,2 22,2 22,2DRY CHEMISTRY 10,8 7,7 16,5ELETTROCHEMIL ROCHE 6,8 5,3 8,6ELFA 13,4 6,0 22,2IMMUNODIFF. 19,1 9,7 23,4IMMUNOT.ROCHE COBAS 6-8000/MODULAR 4,0 2,2 9,1IMMUNOTURB SIEMENS 5,1 3,2 6,5IMMUNOTURB ADVIA SIEMENS 3,9 2,6 6,0IMMUNOTURB SIEMENS 8,6 5,4 14,0IMMUNOTURB ABBOTT ARCHITECT 5,2 3,1 10,0IMMUNOTURB BECKMAN RF LATEX 4,9 4,1 5,5IMMUNOTURB. 7,6 3,5 16,7IMMUNOTURB. ABBOTT ARCHITECT 3,5 2,1 6,0IMMUNOTURB. ADVIA SIEMENS 4,9 2,7 7,1IMMUNOTURB. BECKMAN AU 4,5 3,2 5,8IMMUNOTURB. BECKMAN AU 4,1 3,0 6,0IMMUNOTURB. BECKMAN LX/CX/DX 3,5 1,6 10,1IMMUNOTURB. I.L./BIOKIT 5,2 2,4 8,9IMMUNOTURB. INTEGRA 9,9 4,3 16,4IMMUNOTURB.ABBOTT ARCHITECT 7,7 4,3 11,4IMMUNOTURB.BECKMAN AU 3,5 2,3 4,0IMMUNOTURB.ROCHE COBAS 6- 3,4 2,9 3,7NEFEL. BECKMAN IMAGE 4,9 4,2 6,5NEFELOM .BECKMAN IMAGE 5,0 4,1 6,7NEFELOM. BECKMAN 5,6 3,3 7,6NEFELOM. BECKMAN IMAGE 5,3 3,1 6,5NEFELOM. SIEMENS 5,8 0,4 11,1NEFELOM. SIEMENS BN 7,7 3,6 20,3NEFELOMET.- BECKMAN 6,8 2,8 10,3NEFELOMETRICO 5,9 2,8 18,7NEFELOMETRICO BECKMAN 4,7 2,7 6,9NEFELOMETRICO/BECKMAN 10,1 8,3 13,7

CV 2016CV 2016

Prestazione Metodo MaxIgA IMMUNODIFF. 23,4Beta 2 - Microglobulina CHEMILUM. LIAISON 22,2Beta 2 - Microglobulina ELFA 22,2IgM IMMUNODIFF. 21,9Fattore Reumatoide NEFELOM. SIEMENS BN 20,3Beta 2 - Microglobulina CHEMILUM. 20,0IgE ELFA 19,7Alfa 1 - Antitripsina (Nefelom. Siemens) NEFELOMETRICO 18,7IgG IMMUNODIFF. 18,7Cistatina C NEFELOM. SIEMENS BN 18,2Fattore Reumatoide IMMUNOTURB. 16,7Alfa 2 - Macroglobulina NEFELOM. SIEMENS BN 16,6PCR DRY CHEMISTRY 16,5PCR IMMUNOTURB. INTEGRA 16,4IgE CHEMILUM. 14,1Fattore Reumatoide IMMUNOTURB SIEMENS 14,0Transferrina IMMUNOTURB. 13,9Fattore Reumatoide NEFELOMETRICO/BECKMAN 13,7Ceruloplasmina NEFELOMETRICO 13,7Prealbumina NEFELOM. SIEMENS BN 12,1

VEQ ImmunoglobulineVEQ Immunoglobuline

IgGIgGm

g/d

L 1Campione:

600

1200

1800

2400

NEFELOM. TURBIDIM. RID

2Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. RID

3Campione:

600

1200

1800

2400

NEFELOM. TURBIDIM. RID

4Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. RID

Media±DS

IgGIgG

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

CV

%

1 2 3 4 5 6 7

Nefelom.

Turbidim.

RID

CVB

PCRPCRm

g/L 1

Campione:

10

30

50

70

90

NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM.

2Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM.

3Campione:

10

30

50

70

90

NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM.

4Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM.

Media±DS

PCRPCR

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

CV

%

1 2 3 4 5 6 7

Nefelom.

Turbidim.

Dry Chemistry

0,5.CVB

PCR PCR ultrasensibileultrasensibile

Fattore ReumatoideFattore Reumatoide

Fattore ReumatoideFattore ReumatoideU

I/m

L 2Campione:

30

60

90

NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN.

3Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN.

4Campione:

30

60

90

NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN.

5Campione:

NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN.

Media±DS

Fattore ReumatoideFattore Reumatoide

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

CV

%

1 2 3 4 5 6 7

Nefelom.

Turbidim.

Agglutinaz.

CVB

Fattore Reumatoide (Turbidim.)Fattore Reumatoide (Turbidim.)U

I/m

L 1Campione:

30

60

90

ROCHE SIEMENS BECKMAN

2Campione:

ROCHE SIEMENS BECKMAN

3Campione:

30

60

90

ROCHE SIEMENS BECKMAN

4Campione:

ROCHE SIEMENS BECKMAN

Media±DS

Fattore ReumatoideFattore Reumatoide

Standardizzazione non ERMStandardizzazione non ERM--DA470DA470

Non dosabile come Non dosabile come IgMIgM in unità di in unità di massamassa

Persistenza di metodi qualitativi Persistenza di metodi qualitativi --semiquantitativisemiquantitativi

Recenti esordientiRecenti esordienti

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

CV

%

1 2 3 4 5 6 7

Recettore SolubileTransferrina

Cistatina C

CVB

NEFELOMETRICO SIEMENS

Leggere le catene leggereLeggere le catene leggere

LIBEREK(3-19)mg/L(6-26)mg/L

LEGATEK(2-4)g/L(1-2,4)g/L

MONOCLONALI

POLICLONALI

MONOCLONALI

POLICLONALI

CATENE LEGGERE

ANTISIERI ANTI-CL TOTALI

ANTISIERI ANTI-CL LIBERE

Leggere le catene leggereLeggere le catene leggere

LIBERE

LEGATE

MONOCLONALI

POLICLONALI

MONOCLONALI

POLICLONALI

CATENE LEGGERE ANTISIERI ANTI-CL TOTALI

Dosaggio CL totali k o λ come se fossero tutte libere

Dosaggio immunoglobuline che montano CL k o λ

Fattore di conversione = 150 (PMIgG) / 46 (2xPMCL) 3

Leggere Leggere le catene le catene leggereleggere

Kappa catena leggeraKappa catena leggera

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

CV

%

1 2 3 4 5 6 7

K(nefelom.)

K(turbidim.)

K(rif.IgG)

CVB

Lambda catena leggeraLambda catena leggera

0

2

4

6

8

10

12

CV

%

1 2 3 4 5 6 7 8

L(nefelom.)

L(turbidim.)

L(rif.IgG)

CVB

CL totaliCL totali

Dosaggio CL totali. Utilità clinica:

Rapporto k/ come indizio di monoclonalità

Parametro di follow-up per CM già tipizzate

CL libereCL libere

CL libereCL libere

CL libereCL libere

CL libere: discrepanza CL libere: discrepanza tra letteratura e tra letteratura e praticapratica

Nonostante il crescente numero di pubblicazioni in materia e l’adattabilità del metodo sui principali strumenti, la maggior parte dei laboratori ignora il dosaggio delle CLL nel siero continuando ad utilizzare il dosaggio di CL totali, equivoco e destinato ad obsolescenza.

CL libere: CL libere: VEQVEQ

Variabilità fra strumenti

Problema dell’eccesso di antigene

Coming soon (?): Coming soon (?): HevyliteHevylite

Proteine specifiche: conclusioniProteine specifiche: conclusioni

Variabilità inter- e intra-metodo:

Limiti di standardizzazione

Metodi manuali

Vecchie e nuove proteine:

Nuove esigenze cliniche

Svecchiamento del repertorio