CROMATOGRAFIA

Tecniche di purificazione

La cromatografia è tra i metodi fisici più impiegati per la separazione e la purificazione dei composti organici.

Principio base

(valido per tutte le tecniche cromatografiche)

interazione tra una fase mobile (gas o liquido) ed unafase stazionaria (liquida o solida).

Se la fase stazionaria è solida la separazione è basata su un processo di adsorbimento, se la stessa è liquida parliamo di un processo di ripartizione.

CROMATOGRAFIA DI ADSORBIMENTO

Si basa sull’adsorbimento selettivo dei

componenti una miscela sulla superficie di una

fase solida.

cromatografia su strato sottile

cromatografia solido/liquido su colonna.

CROMATOGRAFIA SU STRATO SOTTILE

(T.L.C. THIN LAYER CHROMATOGRAPHY)

E’ una cromatografia di adsorbimento usata

per l’analisi qualitativa.

Il solido adsorbente in questo caso viene

disposto in uno strato sottile su supporti inerti

di vario genere, come vetro, plastica e

alluminio.

I materiali adsorbenti più usati sono il gel di

silice e l’allumina.

La fase mobile viene anche denominata

eluente e viene scelta in parte in base alle

caratteristiche dei prodotti da separare e in

parte effettuando dei tentativi.

La cromatografia è di tipo ascendente e può

essere mono o bidimensionale.

Indicazioni dalla serie eluotropa, di seguito

riportata.

SERIE ELUOTROPA

Etere di petrolio

Cicloesano

Tetracloruro di carbonio

Cloruro di metilene

Cloroformio

Etere etilico

Tetraidrofurano

Acetato di etile

Acetone

n-Butanolo

Etanolo

Metanolo

Acqua

Acido acetico glaciale

Piridina

PRINCIPALI APPLICAZIONI DELLA TLC

Identificazione di sostanze (stesso R.f.)

R.f.= Dx/Dy

Dx = Distanza percorsa dalla sostanza

Dy = Distanza percorsa dal solvente

Saggiare la purezza dei prodotti di reazione

Per il controllo qualitativo dell’andamento di

una reazione

PRINCIPALI APPLICAZIONI DELLA TLC

Per scegliere le migliori condizioni per una

cromatografia su colonna.

Per controllare la composizione delle frazione

eluite dalla colonna stessa.

ESECUZIONE

La soluzione contenente la miscela daseparare viene deposta con un capillare alladistanza di circa 1 cm dal bordo della lastrina.

La lastrina viene collocata in un contenitorecon coperchio a perfetta tenuta, in cui è statopreventivamente introdotto l’eluente.

Alla fine della corsa la lastrina viene tolta dallavaschetta e lasciata asciugare all’aria.

ESECUZIONE

La rivelazione delle sostanze eluite viene

effettuata con varie tecniche:

Irradiazione con luce U.V.

Esposizione ai vapori di iodio

Reazioni cromatiche con reattivi specifici (acido

solforico conc., FeCl3 per fenoli, 2,4-

dinitrofenilidrazina per composti carbonilici,

ecc.)

ESECUZIONE

CROMATOGRAFIA SU COLONNA

E’ una cromatografia di adsorbimento solido/liquido in cui la miscela dei composti da separare,sciolta in un solvente adatto, viene fatta eluire permezzo di una fase mobile attraverso un solidofinemente polverizzato (fase stazionaria),introdotto all’interno di una colonna di vetro.

Si creano così delle interazioni tra le sostanze daeluire e ciascuna delle due fasi, interazioni chedipendono dalle proprietà chimico-fisichedell’adsorbente, dell’eluente e delle sostanzestesse.

ESECUZIONE

Scelta dell’adsorbente e dell’eluente

Preparazione della colonna

Separazione della miscela

Analisi delle frazioni eluite

ESECUZIONE

CROMATOGRAFIA DI RIPARTIZIONE

Gascromatografia

Cromatografia su carta

HPLC e UPLC

La Cromatografia HPLC (high pressure -performance liquid cromatography) rappresental’evoluzione strumentale della cromatografia infase liquida su colonna e delle tecniche ad essacollegate.

Questo tipo di tecnica consente di effettuare, inpochi minuti, separazioni di miscele anche moltocomplesse e di determinare automaticamente lacomposizione quantitativa in modo da otteneredecisive informazioni sulla natura delle sostanzeanalizzate.