Tesi Sperimentale -Corso di Laurea Magistrale in Biotecnologie per le Industrie e la Ricerca...

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PALERMO

SCUOLA DELLE SCIENZE DI BASE E APPLICATE

LAUREA MAGISTRALE BIOTECNOLOGIE PER L’INDUSTRIA E LA RICERCA SCIENTIFICA

Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biologiche Chimiche e Farmaceutiche

“Metodologie atte a individuare la funzione di alcuni fattori di

sopravvivenza/morte in cellule del cumulo ooforo, di pazienti che si

sottopongono a procedure di procreazione medicalmente assistita.”

Tesi di laurea di:Dott.ssa Valeria Prestigiacomo

Relatore:Prof.ssa Maria Carmela RoccheriCorelatore:Dott.ssa Liana Bosco

ANNO ACCADEMICO 2013-2014

Valeria Prestigiacomo-UNIPA

APOPTOSI FOLLICOLARE

Per un follicolo è più facile morire

piuttosto che ovulare!


COMUNICAZIONE OOCITA E COMPLESSO CUMULO OOFORO (COC)

Giunzioni gap


Induzione della crescita follicolare multipla

Prelievo ovocitario o pick-up

Fecondazione

Trasferimento embrionario

TECNICHE DI PROCREAZIONE MEDICALMENTE ASSISTITA


MARCATORI DI SOPRAVVIVENZA E DI MORTE

AKT Signali

ngValeria Prestigiacomo-UNIPA

https://www.youtube.com/watch?v=hcGrpd0CRV0

MARCATORI DI SOPRAVVIVENZA E DI MORTE

ERK1/2 Signali

ng


https://www.youtube.com/watch?v=oDjDUUhGVsI

ERK, possibile marcatore di morte

Cagnal e , Chambrad, 2009

Evan e Littlewood, , 1998


SCOPO DEL LAVORO

Marcatori di qualità oocitaria

pAKT

pERK1/2 colocalizzat

e con Caspasi-3

Frammentazione

DNA


Materiali e MetodiLo studio è stato condotto su 15 pazienti che rispondono ai criteri di inclusione:

• Normo-responder con normale livello basale di FSH;

• Normale indice di massa corporea;• Età inferiore ai 38 anni.

Preparazione del campione


Saggio TUNEL

Saggio Immunofluorescenza

% di frammentazione del DNA

Livelli di espressione delle proteine pAKT e

pERK1/2

Materiali e Metodi


RISULTATI

a)

b)

c)

Saggio TUNEL in situ


Saggio Immunofluorescenza in situ di pERK1/2 in colocalizzazione con Cleaved-Caspasi-3



Saggio Immunofluorescenza in situ di pAKT

a)

b)

c)

RISULTATI

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 160

4,000,000

8,000,000

12,000,000

16,000,000

20,000,000

24,000,000

pERK1/2 -caspasi3

pERK nucleare-caspasi3

Densitometria

Pz

Pz

Densitometria

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 160

2,000,000

4,000,000

6,000,000

8,000,000

10,000,000

12,000,000

14,000,000

16,000,000

pAKT

pAKT


Conclusioni

Valutazione delle proteine pAKT & Cleaved-Caspasi-3 /pERK1/2 in cellule del cumulo ooforo umano

Relazione fra la molecola Cleaved-Caspasi-3 e la percentuale di frammentazione del DNA Possibile uso di questi marcatori oocitari per la scelta di migliori oociti da fecondare nei cicli di ICSI

pAKT , Apotposi

pERK1/2 Apotposi

da singolo ovocita

da pool ovocitiValeria Prestigiacomo-UNIPA

Ringrazio il Centro di Biologia della Riproduzione nella

figura del Dott. Ruvolo per averci fornito il materiale di ricerca e di aver contribuito alla stesura di questa tesi


Grazie per l’attenzione! Valeria Prestigiacomo-UNIPA


Controllo negativo Immunofluorescenza


Controllo negativo TUNEL

Controllo positivo TUNEL

a)

b)

c)

a)

b)

c)

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