Sviluppo di metodi per la conferma di additivi vietati in...

1

Sviluppo di metodi per la conferma di

additivi vietati in alimenti ad uso

zootecnico

PASQUALE GALLO

Istituto Zooprofilattico Sperimentale del Mezzogiorno

Roma 16 novembre 2010

I Workshop Laboratorio Nazionale di Riferimento per gli

additivi nei mangimi

2

L’EVOLUZIONE DEI CONTROLLI

1999Parametri merceologici (umidità, ceneri, proteine,

grassi,fibra grezza )

Micotossine (AF B/G, OTA, ZEA)

Metalli pesanti (Pb, Cd, Hg, As)

Farmaci veterinari/additivi

Pesticidi / PCB

Prodotti di origine nazionale

2010Micotossine (AF B/G, OTA, ZEA, DON, FUM B, T2/HT-2,

ergotine)

Metalli pesanti (Pb, Cd, Hg, As, Sn, Zn, Cu, Cr, Mn, Mg, Fe)

Farmaci veterinari/additivi

Pesticidi / PCB

Diossine / PCB-dl

Prodotti nazionali, comunitari e di importazione extra-

comunitaria

3


METALLI

358

22%

MICOTOSSINE

412

26%

PESTICIDI e

PCB-ndl

59

4%

ALTRE PROVE

784

48%

METALLI

PESTICIDI e PCB

MICOTOSINE MANGIMI

ALTRE PROVE

2008

ALTRE PROVE

381

40%

PESTICIDI e

PCB

58

6%

MICOTOSSINE

319

33%

METALLI

205

21%

2009

4


Il Piano Nazionale Alimentazione Animale (PNAA)

il PNAA è finalizzato al raggiungimento di una maggiore

tutela della sanità pubblica ed a fornire ai consumatori

garanzie di salubrità, sicurezza e qualità dei prodotti di

origine animale

dal 2005

Indicazioni della Commissione Europea

Raccomandazioni delle missioni DG SANCO e FVO in

Italia

Aggiornamento normativo

Nuovi sviluppi scientifici

Emergenze sanitarie ed allerta comunitari

Monitoraggio

Analisi dei rischi

5

LA NORMATIVA DI RIFERIMENTO

Legge 15.02.1963 n. 281 e s.m.i. – Disciplina della

preparazione e del commercio dei mangimi

DM 20 aprile 1978 – modalità di prelevamento dei

campioni per il controllo ufficiale degli alimenti per gli

animali

DPR n. 433 del 2 novembre 2001 – Regolamento di

attuazione delle direttive 96/51/CE, 98/51/CE e

1999/20/CE in materia di additivi nell’alimentazione degli

animali

Regolamento 1831/2003/CE del 22 settembre 2003 sugli

additivi destinati all'alimentazione animale

6


Regolamento (CE) n. 178/2002 stabilisce i principi generali e i

requisiti per la normativa degli alimenti, istituisce EFSA, definisce i

meccanismi del sistema di allerta rapido per gli alimenti e i

mangimi

Regolamento (CE) n. 882/2004 relativo ai controlli ufficiali intesi a

verificare la conformità alla normativa in materia di mangimi e di

alimenti e alle norme sulla salute e sul benessere degli animali

i controlli siano periodici, con frequenza appropriata, in base alla

valutazione dei rischi e della specie animale di destinazione del

mangime, del numero e della tipologia delle aziende del settore

dei mangimi, delle caratteristiche e dell’uso del mangime o di

qualsiasi trasformazione, attività, operazione che possa influire

sulla sicurezza dei mangimi.

Regolamento (CE) n. 183/2005 che stabilisce requisiti per l’igiene

dei mangimi

sistema di “autorizzazione” degli operatori, compresi quelli della

produzione primaria, la programmazione dei controlli è funzione

dall’anagrafe degli operatori del settore dei mangimi

7

Regolamento 152/2009/CE del 27 gennaio 2009 che fissa i

metodi di campionamento e d'analisi per i controlli ufficiali

degli alimenti per gli animali

Direttiva 2009/8/CE della Commissione del 10 febbraio 2009

che modifica l'allegato I della direttiva 2002/32/CE del

Parlamento europeo e del Consiglio per quanto riguarda i

tenori massimi di coccidiostatici o istomonostatici presenti

per effetto di carry-over inevitabile in mangimi destinati a

specie non bersaglio


8

ALTRI CONTAMINANTI AMBIENTALI

Pesticidi organoclorurati, pesticidi organofosforati, toxafene

Diossine, PCB-ndl e PCB-dl

Radionuclidi (137Cs, 134Cs)

Ferro, Mercurio, Piombo, Cadmio, Arsenico

METALLI PESANTI e ADDITIVI

Rame, Zinco, Cromo, Selenio, Ferro

Melamina

Nitrati/nitriti

MICOTOSSINE

Aflatossine B/G, Ocratossina A, Zearalenone, Deossinivalenolo,

Fumonisine B, Tossine T2 e HT-2

ALTRE ANALISI

Istamina

BHA, BHT, Formaldeide, Solfiti, EDTA

Le prove chimiche per il controllo degli alimenti ad uso

zootecnico

9

FARMACI VIETATI e ADDITIVI

CAF, Decochinato, Diclauzuril, Nitrofurani,

Tetracicline, Avermectine, Avilamicina, Beta-agonisti,

Carbadox, Olaquindox, Chinolonici, Corticosteroidi,

AINS, Acido acetisalicilico, Flavomicina, Ionofori,

Macrolidi, Melamina, Metilclopidolo, Nicarbazina,

Robenidina, Alofuginone, Nifursol, Nitroimidazoli,

Penicilline, Sulfamidici, Levamisolo, Virginiamicina,

Zincobacitracina A, Amprolium

Le prove chimiche per il controllo degli alimenti ad

uso zootecnico

10

Gli additivi per alimenti ad uso zootecnico

Commission - List of authorised additives in feedingstuffs

published in application of article 97 (b) of Council

Directive 70/524/EEC concerning additives in feedingstuffs

(2004/C 50/01)

Antiossidanti (sorbati, acido ascorbico e ascorbati,

tocoferoli, gallati)

Emulsionanti (saccarina, lecitine, acido alginico e alginati,

gomma di guar, cellulosa)

Carotenoidi e xantofille

Coloranti

Vitamine

Iodio, cobalto, molibdeno

Enzimi (fitasi, xylanasi, galattosidasi)

microrganismi

11

Le prove chimiche per il controllo degli alimenti

ad uso zootecnico:

caratteristiche, limiti e criticità

Circa 50 metodi di prova

e 150 sostanze

Validazione intra-laboratorio

(Regolamento 882/2004/CE)

Controllo qualità interno

processo analitico

(carte di controllo)

Circuiti inter-laboratorio

Accreditamento

12

LO SVILUPPO DI UN METODO DI PROVA

OBIETTIVOMetodo di screening o conferma

Tipo di rischio associato

REQUISITI

APPLICABILITÀ

Livelli di contaminazione

Limiti di legge

Metodi ufficiali

Piani di controllo

Disponibilità di materiali e di

strumentazione adatta

Disponibilità di personale adeguato

Costi

Rilevanza ai fini dell’utenza

13

Le prove chimiche per il controllo degli alimenti

ad uso zootecnico:


PREPARAZIONE DEL CAMPIONE

Estrazione con solventi

Ripartizione liquido-liquido

Cromatografia SPE

Cromatografia IAF

Derivatizzazione chimica o fotochimica

Mineralizzazione

SEPARAZIONE

Cromatografia in fase liquida

Cromatografia in fase gassosa

14

METODI DI SCREENING (qualitativi)

ELISA

TLC

colorimetria

METODI DI CONFERMA (quantitativi)

Spettrofotometria di assorbimento atomico (AAS)

HPLC-DAD, HPLC-FLD

GC-ECD, GC-NPD

GC/MS, GC/MS/MS

LC-MS/MS

L’analisi degli additivi in alimenti ad uso zootecnico:


15



Farmaci e additivi sono presenti a concentrazioni non

residuali

I limiti massimi sono in genere più alti che negli alimenti

Le acque di abbeveraggio non richiedono, in genere,

processo di estrazione/purificazione

VANTAGGI

Possibilità di ridurre gli interferenti di matrice per

diluizione

Metodi multi-residuo

16

Matrici molto variabili in composizione

Difficoltà di reperire i materiali di riferimento (es.

avoparcina)

Elevata sensibilità di alcune tecniche analitiche (LC-MS,

HPLC-FLD)PUNTI CRITICI

Necessità di metodi robusti

Impossibilità di sviluppare il metodo di prova

Possibilità di rivelazione di piccole quantità (contaminazioni

crociate)

Problema dei livelli farmacologicamente significativi di

farmaci/additivi

Tolleranze ammesse per i tenori di additivi consentiti

Limiti di quantificazione dei metodi per la revisione di analisi



17

Alcuni metodi sono gli stessi pubblicati 10 anni

fa (amprolium, diclauzuril, carbadox,

olaquindox)

Alcune colonne HPLC non sono in produzione

Alcuni metodi possono essere più semplici,

rapidi, economici

Non è prevista la spettrometria di massa

Regolamento 152/2009/CE

Oligoelementi

Non è previsto l’uso di mineralizzazione a microonde

I Metodi prova della EU - limiti e criticità

Alofuginone LOQ = 1 mg/kg

Robenidina LOQ = 5 mg/kg

Diclauzuril LOQ = 0.5 mg/kg

Lasalocid A LOQ = 10 mg/kg

altri ionofori Non previsti

Nicarbazina Non prevista

Inadeguati

Anacronistici

Inapplicabili

18

DIRETTIVA 2009/8/CE DELLA COMMISSIONE

che modifica l'allegato I della direttiva 2002/32/CE del Parlamento

europeo e del Consiglio per quanto riguarda i tenori massimi di

coccidiostatici o istomonostatici presenti per effetto di carry-over

inevitabile in mangimi destinati a specie non bersaglio

coccidiostatici e istomonostatici sono additivi consentiti per alcuni

alimenti ad uso zootecnico

possibilità di contaminazione crociata (carry-over) in altri mangimi

per uso delle stesse linee di produzione

si può verificare nelle fasi di produzione, stoccaggio e trasporto

sono stabiliti i tenori massimi di coccidiostatici e istomonostatici

presenti, per effetto di carry-over inevitabile, in mangimi destinati

a specie non bersaglio

coccidiostatici e istomonostatici presenti per effetto di carry-over

inevitabile in mangimi destinati a specie non bersaglio sono

considerati sostanze indesiderabili (Direttiva 2002/32/CE)

la loro presenza non deve costituire un rischio per la salute degli

animali, la salute umana o l'ambiente.

19

Regolamento 152/2009/CE

I Metodi prova della EU - limiti e criticità

Regolamento 152/2009/CE Direttiva 2009/8/CE

(27.01.2009) (10.02.2009)

Alofuginone LOQ = 1 mg/kg LOQ < 0.030 – 0.090 mg/kg

Robenidina LOQ = 5 mg/kg LOQ < 0.7 – 2.1 mg/kg

Diclauzuril LOQ = 0.5 mg/kg LOQ < 0.01 – 0.03 mg/kg

Lasalocid A LOQ = 10 mg/kg LOQ < 1.25 – 0.090 mg/kg

altri ionofori Non previsti LOQ < 0.050 – 3.75 mg/kg

Nicarbazina Non prevista LOQ < 0.5 – 1.5 mg/kg

CONTAMINAZIONI CROCIATE

20

DIRETTIVA 2009/8/CE DELLA COMMISSIONE

Ionofori (lasalocid A, narasin, salinomicina, monensin,

semiduramicina, maduramicina )

< 0.05 – 3.75 mg/kg al 12% umidità

Robenidina < 0.7 – 2.1 mg/kg al 12% umidità

Decochinato < 0.4 – 1.2 mg/kg al 12% umidità

Alofuginone < 0.03 – 0.09 mg/kg al 12% umidità

Nicarbazina < 0.5 – 1.5 mg/kg al 12% umidità

Diclauzuril < 0.01 – 0.03 mg/kg al 12% umidità

Reperire i materiali di riferimento

Sviluppare nuovi metodi di prova

Ri-validare i metodi di prova esistenti

Usare tecniche di rivelazione MS

21

METODI DI PROVA PER COCCIDIOSTATICI ED

ISTOMONOSTATICI

Robenidina

Nicarbazina

HPLC-DAD

LC-MS/MS

Ionofori

Decochinato

Alofuginone

Diclauzuril

LC-MS/MS

MIGLIORAMENTO DELLE PRESTAZIONI

Colonne mid-bore (id 2.1 e 3.0 mm)

Colonne con particelle di 1.7 e 2.6 m

Nuove fasi stazionarie

22

VALIDAZIONE DEI METODI DI PROVAAllegato III Regolamento 882/2004/CE

1. I metodi di analisi devono essere caratterizzati dai seguenti criteri

a) Esattezza

b) Applicabilità (matrice e gamma di concentrazione)

c) Limite di rivelazione

d) Limite di determinazione

e) Precisione

f) Ripetibilità

g) Riproducibilità

h) Recupero

i) Selettività

j) Sensibilità

k) Linearità

l) Incertezza delle misurazioni

m) Altri criteri a scelta

2. I valori di precisione di cui al punto 1 lettera e) sono ottenuti in seguito ad

una prova inter-laboratorio conforme ad un protocollo internazionalmente

riconosciuto, oppure, qualora siano stati stabiliti criteri di efficienza per i

metodi analitici, sono basati su criteri di conformità ai criteri. I valori di

ripetibilità e riproducibilità sono espressi in forma internazionalmente

riconosciuta (per esempio intervalli di confidenza del 95%)

23

VALIDAZIONE DEI METODI DI PROVA

E CONTROLLO DEL PROCESSO

Ripetibilità Recupero

Alofuginone 0.5 mg/kg 80%

Robenidina ≤ 10% 85%

Diclauzuril ≤ 15-30%, 0.75 mg/kg 80%

Lasalocid A ≤7.5-15%, 15 mg/kg 90%

LOQ, LOD

Parametri del regolamento 152/2009/CE

Criteri non omogenei

Nessuna indicazione circa l’incertezza di misura e la

specificità, correzione per il recupero

Identificazione basata su spettro DAD e co-cromatografia

24

VALIDAZIONE DEI METODI DI PROVA

E CONTROLLO DEL PROCESSO

Criteri di prestazione simili a quanto riportato nelle linee

guida degli IIZZSS per i residui di farmaci veterinari negli

alimenti

Criteri di identificazione MS e MS/MS come da Decisione

2002/657/CE

Ampio intervallo di validazione

Carte di controllo

Correzione per il recupero

Calcolo dell’incertezza di misura come da linea guida

degli IIZZSS

25

L’ANALISI DI CONFERMA DEGLI IONOFORI

0 10 20

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 9.89MA: 11183316SN: 96

400 500 600

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 595.1

613.1577.1

0 10 20 30

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 9.88MA: 22244233SN: 496

17.36 24.74

400 500 600

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 595.1

577.1

0 10 20

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 11.96MA: 370840881SN: 743

660 680

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 675.2

693.2657.1

0 10 20 30

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 12.31MA: 701243981SN: 1199

22.169.07

660 680

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 675.2

693.1657.2

0 10 20

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 15.22MA: 161991453SN: 459

600 700

m/z

0

50

100R

ela

tive A

bundance 755.2

773.1

0 10 20 30

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 15.49MA: 307987097SN: 503

600 700

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 755.2

0 10 20

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 14.85MA: 84314398SN: 96

860 870

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 859.3

860.1 877.3

0 10 20 30

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 14.97MA: 173195733SN: 114

860 870

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 859.3

860.0 877.4

0 10 20

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 16.82MA: 126510078SN: 447

500 600 700

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 769.2

531.1

0 10 20 30

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 17.27MA: 253095532SN: 541

500 600 700

m/z

0

50

100

Rela

tive A

bundance 769.2

531.0

613.1

773.1

SALINOMICINA

MADURAMICINA

NARASIN

MONENSIN

LASALOCID A

Standard mix a 0.010 mg/kg Mangime a 5 mg/kg dil 1:20

377.0 377.0

531.1 531.1

431.0 431.0787.4 787.4

26

L’ANALISI DI CONFERMA DEGLI IONOFORI

Omogenazione

Estrazione con solvente

Diluizione 1:20 oppure 1:100

Analisi ion trap LC/ESI-MS/MS, eluizione isocratica

Intervallo di validazione fino a 150 – 200 mg/kg (monensin)

LOQ

- Narasin 0.50 mg/kg

- Monensin 1.0 mg/kg

- Maduramicina 0.050 mg/kg

- Lasalocid A 1.0 mg/kg

- Salinomicina 0.50 mg/kg

27

L’ANALISI DI CONFERMA DELLA FLAVOMICINA

Additivo e promotore di crescita

Usato per polli, tacchini, suini, bovini (1 – 25 mg/kg)

Vietato dal 2006 nella UE

È disponibile solo metodo di screening microbiologico (LOQ

0.5 -1.0 ppm)

Cooperazione LNR

Dipartimento di

Chimica IZS ME

Reperimento MR

Informazioni sulla disponibilità di MP

Sviluppo metodo di conferma LC-

MS/MS

Validazione del MP

Esecuzione delle prove per la rete

degli II.ZZ.SS.

28

Studio dello spettro ion trap

ESI-MS e ESI-MS/MS della

flavomicina

tune positivo LC-MS-MS-MS FLAVO 10 ppm in LC flowNL:4.43E5

+ c ESI Full ms [155.00-2000.00]

1300 1320 1340 1360 1380 1400 1420 1440 1460 1480 1500 1520 1540 1560 1580m/z

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rela

tive A

bundance

[M+H] +

1581.91

1421.32

1436.82

1404.271389.89

1503.82 1567.761443.371497.821458.291332.80 1517.611361.71 1494.321310.06 1475.47 1535.451550.841337.70

LC-MS-MS FLAVO 10 ppm in LC flowNL 2.21E6T:

- c ESI Full ms [215.00-850.00]

500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800 820 840m/z

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rela

tive A

bundance

[M-H] 2-

789.90

701.12782.98694.13

797.89709.44 736.39 768.48 820.78666.27528.57 577.55 842.05551.19502.79 626.08651.53607.89

12 13 14 15 16 17 18

Time (min)

0

50

100

Rela

tive A

bundance

RT: 15.54

MA: 1811519

SN: 663

17.15

NL: 5.35E4

m/z= 575.30-576.30 F: - c ESI

SRM ms2 [email protected]

[553.40-555.40, 574.90-576.90]

MS 22-10-09std125ppb

554 556 558 560 562 564 566 568 570 572 574 576

m/z

0

20

40

60

80

100

Rela

tive A

bundance

575.72

576.39554.23

12 13 14 15 16 17 18

Time (min)

0

50

100R

ela

tive A

bundance

RT: 15.59

AA: 696287

SN: 295

NL: 1.97E4

m/z= 1151.70-1152.70 F: - c ESI SRM

ms2 [email protected]

[1108.40-1110.40, 1151.30-1153.30]

MS ICIS 22-10-09std250ppb

1110 1115 1120 1125 1130 1135 1140 1145 1150

m/z

0

20

40

60

80

100

Rela

tive A

bundance

1152.17

1109.01

1110.05

Ion trap LC-MS/MS IONI NEGATIVI

STD 100 ppb m/z 790 575.8

STD 100 ppb SRM m/z 1580.9 1152.2


29

Analisi di conferma della FLAVOMICINA

STUDIO DELLE CARATTERISTICHE CHIMICO-FISICHE E MOLECOLARI

PURIFICAZIONE DA MANGIME

Estrazione con solvente

Purificazione SPE

Analisi ion trap LC-MS/MS

livello,

mg/kg

Recupero

medio %

(n = 12),

riproducibilità

intermedia

(n = 12), RSD

Ripetibilità

(n = 6), RSD

I II

0.50 83.9 15.5 13.8 18.2

1.0 94.2 16.0 12.0 20.5

30.0 88.4 20.0 22.4 19.3

ACQUA DI ABBEVERAGGIO

Filtrazione, centrifugazione

Analisi ion trap LC-MS/MS

LOQ = 0.050 g/ml (acqua)

LOQ = 0.20 mg/kg

(mangime)

3 IP (conferma)

Linearità 0.050–1.0 g/ml

Comunicazione al LNR

Comunicazione alla rete degli

IIZZSS

Analisi di controllo in routine


30

Indagine NAS per uso di un additivo incognito (2008)

Mangime composto contenente una polvere grigia

(Umbria)

Sospetto di uso illecito di un additivo

Nessuna indicazione sull’identità della sostanza

Arricchimento del miscuglio nella frazione additivata

Prove di solubilità (acqua, metanolo, acetonitrile, TBME,

soluzione acida e basica)

Analisi UV-visibile (cromofori caratteristici)

Prove mediante spettrometria di massa ION TRAP ESI / MS

31

Studio dello spettro ion trap ESI-MS full scan, ioni positivi

Studio dello spettro ion

trap ESI-MS /MS ioni positivi

0.07-0.28 AV: 13

NL:2.48E6T: + c ESI Full ms [50.00-430.00]

50 100 150 200 250 300 350 400

m/z

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rela

tive A

bund

ance

205.2

178.2

206.3391.3 146.3207.30103.29 117.34 179.29

150.2477.19 409.28309.28 331.39285.07233.26 393.28355.90265.0961.03

0.91-1.92 AV: 72

NL:3.49E3T: + c ESI Full ms [400.00-430.00]

400 402 404 406 408 410 412 414 416 418 420 422 424 426 428 430

m/z

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rela

tive A

bund

ance

428.9

409.2418.7

407.3

411.28

425.29

429.61427.28

410.37

405.28415.13

412.34408.36420.90 424.48416.14 426.37417.17

423.11401.22 406.35

402.26 414.15 428.28404.21

LEVAMISOLO C11H12N2S

204.28 g/mol

0.43-0.62 AV: 10

NL: 1.84E5T: + c ESI Full ms2 [email protected] [55.00-430.00]

100 150 200 250 300 350 400

m/z

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rela

tive A

bundance

178.14

145.33

188.3088.21

205.20129.25117.46 162.2587.41 385.49248.70


32

29-07-08prmangime100ppmextractdil1-10 7/29/2008 12:37:12 PM

RT: 2.44 - 6.48 SM: 15G

3 4 5 6

Time (min)

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

RT: 5.21

MA: 19407071

SN122

RT: 3.87

AA: 2715170

SN : 26 RMS

NL: 6.52E5m/z= 177.60-178.60 F: + c ESI SRM


[144.00-146.00, 177.00-179.00,

204.00-206.00] MS

29-07-

Prova recupero

100 ppm

Dil 1-10

RT: 3.30 - 6.66 SM: 15G

4 5 6

Time (min)

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

RT: 5.11

AA: 25491167

SN: 901

RT: 3.89

AA: 4853556

SN : 197

NL: 1.31E6

m/z= 177.60-178.60 F: + c ESI SRM


[144.00-146.00, 177.00-179.00,

204.00-206.00] MS ICIS

Std levamisolo

1 ppm

RT: 2.76 - 7.29 SM: 15G

3 4 5 6 7

Time (min)

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

RT: 5.19AA: 25866896

SN

:

627

RT: 3.90

AA: 4862277

SN : 183RT: 6.87

AA: 593880

SN : 16

NL: 1.06E6m/z= 177.50-178.50 F: + c ESI SRM


[144.00-146.00, 177.00-179.00,

204.00-206.00] MS ICIS

Campione

Dil 1-20.0000

29-07-08prmangime100ppmextractdil1-10 # 136-151 RT: 5.03-5.30 AV: 16 NL:

F: + c ESI SRM ms2 [email protected] [144.00-146.00, 177.00-179.00, 204. ...

150 160 170 180 190 200

m/z

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

178.00

145.06

178.80145.81 204.84

177.29

29-07-08stdlevamextract1-0ppm # 137-150 RT: 4.95-5.16 AV: 14 NL: 1.22E6


150 160 170 180 190 200

m/z

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

178.01

145.01

178.81145.80

205.13177.29

29-07-08mangimedil1-200000 # 141-161 RT: 5.01-5.34 AV: 21 NL: 9.96E5


150 160 170 180 190 200

m/z

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Rela

tive

Ab

un

da

nce

178.00

145.01

178.80145.80

204.99177.32

Analisi IT LC/ESI-MS/MS

LEVAMISOLO C11H12N2S

(tetramisolo) circa

3000 ppm nel miscuglio

5 g di miscuglio sciolti in

MeOH

Centrifugare

Diluire con fase mobile

HPLC

Colonna Synergi MAX

SRM m/z 205 178 m/z 205 145


33

Il supporto all’azione giudiziaria

Indagine NAS su uso illecito di promotori di crescita

Esame di 2 campioni di acqua di abbeveraggio

Analisi HPLC-DAD con metodo validato e riconosciuto ORL (LOQ =

5 ppm)

Presenza e conferma del promotore di crescita a 15 ppm

(campione 1) e 32 ppm (campione 2)

Revisione di analisi (ISS) :

solo campione 2 confermato

a 29 ppm

Comunicazione

all’autorità

giudiziaria

34

Conclusioni

Settore in evoluzione (normativa, controlli)

Normativa recente ma a volte inadeguata

Tutelare la sicurezza degli alimenti e il benessere animale

Protezione delle specie non target di trattamenti

farmacologici

Estensione del campo dei controlli (nuovi contaminanti

ambientali e additivi)

Potenziamento tecnico e scientifico dei laboratori di

controllo

Uso delle tecniche con rivelazione MS

Scarso supporto tecnico e scientifico dai CRLs

Sviluppo di metodi per la conferma di additivi vietati in...

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Transcript of Sviluppo di metodi per la conferma di additivi vietati in...