screening G6PD

Screening della G6PDHnei Donatori di Sanguedr. Enrico Bianchini

Centro Trasfusionale e Laboratorio di EmatologiaOspedale di Magenta

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Legnano H nuovo Legnano H storico Cuggiono Magenta Abbiategrasso

8° UKNEQAS Italian Users Meeting

Bologna 7 Aprile 2016

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• Secondo l’antropologo Levy-Strauss le fave erano considerate connesse con il mondo dei morti

noto il divieto per i pitagorici di cibarsi di fave

Dolci tipici nel centro e sud Italia :”fave dei morti”

Favismo

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Deficit di G6PDH - Aspetti Biologici e Clinici

•G6PDH: Enzima necessario alla produzione di NADPH, sistema antiossidante

•Nelle emazie, che sono prive di nucleo, è inserito nell’unica via metabolica possibile.

• Difetto enzimatico ereditario, X-linked, recessivo. •Gli affetti sono in maggioranza maschi. Femmine di solito portatrici

sane, e malate solo se omozigoti. Note oltre 200 diverse mutazioni. • Presentazione usuale: a) Ittero neonatale aggravato/prolungato b) episodi di anemia emolitica acuta per esposizione a ossidanti.

• Un’elevata percentuale di soggetti rimane tuttavia asintomatica ocon una modesta anemia emolitica Coombs-negativa non-sferocitica.

• Episodi emolitici acuti, anche molto severi, 6-72 ore dopo esposizionead una vasta serie di ossidanti, farmaci, o ingestione di fave.

• L’emolisi si risolve spontaneamente in 8-14 giorni, con la produzionecompensatoria di emazie giovani, più ricche in G6PDH e per questomotivo non è corretto eseguire il test dopo la crisi emolitica.

• Sembrerebbe una mutazione per resistere alla penetrazionedel parassita malarico

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Deficit di G6PDH - Aspetti Epidemiologici

• Varianti genetiche hanno diversa distribuzione geografica:G6PDA-: Africa, Europa meridionale, Americhe (deficit moderato)G6PD Mediterranea: Medio ed estremo oriente (Favismo, severa)G6PD Canton: CinaG6PD Union: Tutto il mondo

• Classificate da WHO 5 Classi cliniche in funzione del grado di deficitenzimatico e del livello/gravità di emolisi:Classe I: Deficit severo, con anemia non-sferocitica cronica.Classe II: Deficit severo,<10% attività residua, crisi intermittenti.Classe III: Deficit moderato, 10-60% attività residua, crisi lievi.Classe IV: Difetto genico ma attività normale,60-150%,non emolisi.Classe V: Variante genica (G6PDA+), attività >150%, non emolisi

• Prevalenza: >400 Milioni di persone affette nel mondo (4-9% dellapopolazione), variabile in funzione delle diverse aree geografiche.

•In Italia la prevalenza media è ~ 3%,con picco in Sardegna (7.5% media,25-33% in alcune province), e maggioranza di soggetti di Classe II.

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-Raccomandano lo screening per deficit di

G6PDH nei pazienti HIV+ a rischio in vista dell’impiego di chemioprofilassi per

Toxoplasma ( Dapsone, Pirimetamina) o terapia con Bactrim.

-Prima di intraprendere un trattamento antimalarico con primachina

-Richiesto nella batteria di esami per le adozioni

-Per la partecipazione alle selezioni per arruolamento esercito, marina, aeronautica e accademie militari

-Per la selezione del donatore di midollo osseo

Quando viene richiesta la ricerca della carenza G6PDH -

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I test di screening

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Test per ricerca G6PDH QUALITATIVO

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Test per ricerca G6PDH QUALITATIVO

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Test per ricerca G6PDH QUANTITATIVO

-Trinity Biotech Srl, G6PDH Biochemical Enterprisesono determinazioni spettrofotometriche con lettura a 340

nm della produzione di NADPH durante la reazione G6P + NADP 6PGA + NADPH + H

in rapporto alla Hb

-Eseguito sotto forma di rapporto tra attività enzimatica e concentrazione emoglobinica rilevabile dallo stesso campione ((UI / g Hb)

Specificità 95,5% Sensibilità 95%

PCR

L’utilizzo della diagnosi molecolare delle mutazioni sul gene della G6PD è molto complessa a causa delle numerose

varianti

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NOTE AI TEST

Variabilità individuale dei livelli enzimatici: è strettamente legata alla vita media eritrocitaria (la G6PD diminuisce con l’invecchiamento dell' eritrocita) per cui, in seguito a lievi modificazioni dell' indice reticolocitario, si assiste ad un aumento della G6PD. Variazioni dei livelli di G6PD si riscontrano con maggiore frequenza nelle donne (dovuto alle lievi oscillazioni dell' indice reticolocitario riscontrabili durante il ciclo mestruale).

I traits alfa e beta microcitemici si associano ad aumentata attività della G6PD.

Altra frequente causa di sovradosaggio della G6PD sono le anemie sideropeniche e le leucocitosimarcate

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NEQAS

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Numero partecipanti

NEQAS G6PD

87

108

128

0

20

40

60

80

100

120

140

apr-09 giu-11 genn-16

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NEQAS G6PDDAL GENN 2010 AL GIU 2011

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Andamento Cv partecipanti

22.2

16.815.8

10.4

0

5

10

15

20

25

cv aprile 2011 cv giugno 2013 cv febbr 2015 cv genn 2016

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© UK NEQAS (H) 2013

UK NEQAS for General Haematology

Annual Report

January – December 2012 5.8 Red Cell G6PD

•

……1203G6 ……where there seems to be greater number of ‘equivocal’ results reported when both specimens in a survey are deficient.”….

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Deficit di G6PDH - E’ Utile lo Screening nei Donatori?• Essendo il deficit di G6PDH per lo più asintomatico, il donatore

maschio può non essere a conoscenza del suo stato.

• Il rischio legato alla trasfusione di un’unità di emazie da donatorecon deficit di G6PDH riguarda soprattutto neonati, prematuri,soggetti politrasfusi e pazienti falcemici.

• L’unità di emazie da un donatore affetto va incontro a emolisiaccelerata principalmente durante la conservazione a +4°C.

• Decreto 2/11/2015 All. IV punto 1.6 considera portatori di trait talassemico compatibili con la donazione “nell’ambito di protocolli definiti dal Servizio Trasfusionale” e con Hb ≥ 13 g/dL.

•Il Decreto 2/11/2015 non contempla esplicitamente il deficit diG6PDH come causa di esclusione: ci si comporta di solito in analogia con i casi di Talassemia minor (specie in aree ad alta endemia).

•Decreto 2/11/2015 esclude dalla donazione di cellule cordonalii feti maschi con genitori affetti o portatori.

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RISULTATI.CENTRO TRASFUSIONALE

ASST OVEST MILANESE

• Dal giugno 2006 al dicembre 2015abbiamo testato 1822 aspiranti donatoridi età compresa tra i 18 ed i 55 anni, 1095 maschi e 728 femmine.

• 20 di questi sono risultati portatori del deficit (12 maschi e 8 femmine). Nessuno di loro riferiva reazioni emolitiche nell’anamnesi personale o familiare

• Tutti sono stati avviati alla plasmaferesi produttiva

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considerazioni

• Utile possedere la metodica

oppure poter disporre di un Centro a cui fare riferimento

• Il metodo spettrofotometrico

appare il più indicato perché fornisce informazioni qualitative e quantitative

• Nuovi donatori : considerata la popolazione

di riferimento sarebbe opportuno inserirlo tra gli esami di ammissione

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Grazie!

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• Sostanze e Farmaci da evitare

• Acetanilide (Analgesico e antipiretico –

• non più usato)

• Acido acetilsalicilico (Analgesico e antipiretico)

• Acido nalidixico (Chemioterapico, antibatterico): betaxina,

• nalidixim, naligram, nalissina, neg gram, uralgin,

• uriflor, urogram, uropan

• Blu di metilene (Terapia metaemoglobinemia; Evidenziatore

• fistole; In pazienti con metaemoglobinemia):

• methylene bleu, panatone, desmoid jilleu, desmoid pillen,

• urolene bleu, vitablue

• Blu di toluidina (Evidenziatore tumori)

• Cloramfenicolo (Antibiotico)

• Doxorubicina (Antitumorale): adriblastina

• Fenazopiridina (Analgesico urinario): pyridium

• Fenilidrazina (Anti-policitemia – non più utilizzato)

• Furazolidone (Chemioterapico, antibatterico): furazone,

• ginecofuran, tricofur

• Naftalina (Antitarme; Usata in passato come antielmintico

• e nel trattamento della pediculosi e della scabbia): scent.

• off.

•

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• Niridazolo (Antielmintico): ambilhar

• Nitrofurantoina (Chemioterapico, antibatterico): cistofuran,

• furadantin, furedan, furil, nitrofur, urolisa, macrodantin,

• neofuradantin

• Primachina (Antimalarico): primaquine, primachina,

• plasmachina, clorochina

• Sulfacetamide (Chemioterapico, antisettico astringente,

• sedativo): minims sulfacet, prontamid, sulfacetamide sod,

• brumeton, visublefarite, aureomix, chemyterral, cosmiciclina

• Sulfametoxazolo (Chemioterapico, antisettico, sedativo):

• gantanol, abacin, bacterial, bactrim, chemitrim, eusaprim,

• gantrim, isotrim, medixin, streptoplus, suprin valeas,

• trim, pulmotrim

• Sulfanilamide (Chemioterapico): exoseptoplix, solfanilamide,

• otocaina

• Sulfapiridina (Chemioterapico; pazienti non responsivi al

• dapsone nelle dermatiti erpetiformi; la sulfapiridina è un

• componente della sulfasalazina): salazopyrin en, salisulf,

• dagenan

• Tiazole sulfone (Antilebbra)

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