La vita dal mare
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Membrane Filtranti (MF) per concentrazione, mediante filtrazione di aliquote su membrana con pori di 0,22 – 0,44 m.
La membrana viene posta successivamente su agar (m-Enterococcus Agar (detto anche Slanetz-Bartley).
Il terreno contiene azide come inibente e TTC (Trifenil Tetrazolio
Cloruro) come differenziale (produzione di precipitato insolubile che
conferisce colore rosso-rosa alle colonie).
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Requisiti qualità acque di balneazione - anno 2009 (allegato 1 al DPR)
PARAMETRI UNITÀ DI MISURA
VALORI
LIMITE
1-Coliformi totali ufc/100 mL 2000
2-Coliformi fecali ufc/100 mL 100
3-Streptococchi fecali ufc/100 mL 100
4-Salmonelle ufc/L 0
5-Enterovirus pfu/10 L 0
6-PH (*) unità di pH da 6 a 9
7-Colorazione (*) normale
8-Trasparenza (*) m 1
9-Oli minerali mg/L 0.5
10-Sostanze Tensioattive mg/L 0.5
11-Fenoli mg/L 0.05
12-Ossigeno disciolto (**) % saturazione ossigeno da 70 a 120
LA BALNEAZIONE
Su ogni punto di controllo è prevista la determinazione di parametri fisici, chimici e microbiologici indicatori di contaminazione.
D. Lgs. n.116/2008
Parametri Metodi di analisi Classi di Qualità
(ufc/100 ml) (ISO) Eccellente Buona Sufficiente Scarsa
Enterococchi Intestinali 7899-1 o 7899-2 100 (*) 200 (*) 185 (**) >185 (**)
Escherichia coli 9308-3 o 9308-1 250 (*) 500 (*) 500 (**) >500 (**)
REQUISITI E CRITERI DI VALUTAZIONE DELLA QUALITA’ ACQUE COSTIERE
(*) basato sulla valutazione del 95°percentile
(**) basato sulla valutazione del 90°percentile
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Il D.L.svo 530/92 prevede la ricerca dei metalli mercurio e piombo oltre alla ricerca di coliformi totali o di Escherichia Coli.
Reg. CE 2075/05
E.coli <230 MPN/100 g
Salmonella assenza in 25 g
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ANALISI SU MOLLUSCHI BIVALVI
I molluschi vengono puliti , lavati con acqua esciacquati con acqua distillata sterile.Successivamente vengono aperti sterilmente innumero adeguato ad ottenere circa 100 g di polpa eliquido intravalvare.
OMOGENEIZZATORE A LAME ROTANTI
produce una completa frammentazione e miscelazione del campione
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PLATE COUNT AGAR STANDARD (PCA)
Substrato per la numerazione dei microrganismi totali negli alimenti
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AZIDE DEXTROSE BROTHTerreno selettivo per la determinazione presuntiva degli streptococchi fecali nelle acque
ETHYL VIOLET AZIDE BROTHTerreno liquido selettivo per confermare la presenza degli streptococchi fecali
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Determinazione degli Enterococchi con il metodo MPN
L'intero procedimento prevede due stadi:
il test presuntivo viene effettuato in provette di Brodo Azidedestrosio (positive con intorbidamento)
la conferma in provette di EVA (Ethyl Violet Azide Broth): positivecon intorbidamento e precipitato violetto.
Azide ed etil violettosono inibenti per iGRAM- e cocchiGRAM+ diversi daglienterococchi
Brodo Azide Brodo EVA
Terreno crescita terreno crescitabase base
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BRILLIANT GREEN AGARTerreno selettivo per l’isolamento di Salmonella, e coliformi fecali da acqua ed altri prodotti alimentari.
BRODO LATTOSATOTerreno liquido per la ricerca presuntiva e la conferma dei coliformi
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Prova presuntiva per coliformi totali
Brodo lattosio in provette da 9 ml. Inoculare 3 – 5 serie di tubi con le opportune diluizioni del campioneIncubare per 24 ore 2 a 35°C 0,5.
Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore)
Prova confermativa per coliformi totali
Brodo lattosio verde brillante bile in provette da 9 ml. Trasferire 1 ml da ciascun tubo positivo in un tubo di BLVBBIncubare per 24 ore 2 a 35°C 0,5.
Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore)
Prova confermativa per coliformi fecali
EC broth oppure brodo lattosio verde brillante bile (BLVBB) tubi da 9 mlTrasferire 1 ml da ciascun tubo positivo di Brodo lauryl-solfatoIncubare per 24 ore 2 a 44,5°C.
Lettura: tubi positivi con intorbidamento (crescita) e gas (fermentazione del lattosio);tubi negativi limpidi o senza gas (reincubare per 24 ore)
E. coli produce indolo dal triptofano a 44°C
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Il test preliminare è quello della citocromo-ossidasi, per differenziare le
Enterobacteriaceae (-) dalle non Enterobacteriaceae (+).
Positivo: BLU
Vibrionaceae e Pseudomonadaceae
Negativo: ROSA
Enterobacteriaceae
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