INFORME DE LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA ALIMENTARIA

INTEGRANTES:DIANA LORENA FLOREZ GOMEZ - COD: 29683329 GRUPO: 211619_3RONI MARIE CORTES NOGUERA- COD: 1.113.628.912 GRUPO: 211619_12JUAN CARLOS MAZO - CODIGO: 16.886.390 GRUPO: 211619_ 2MIGUEL ANGEL MARIN CODIGO: GRUPO:

TUTOR PRESENCIAL: MARIA DEL CARMEN GONGORA

TUTOR VIRTUAL:GLAEHTER YHON FLOREZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNADESCUELA DE CIENCIAS BSICAS TECNOLOGIA E INGENIERIASINGENIERA DE ALIMENTOSmaYO DE 2014

INTRODUCCION

La biotecnologa se puede definir como un conjunto de tcnicas en que se utilizan organismos vivos, partes de ellos o molculas derivadas de organismos vivos para fabricar o modificar productos. Adems, comprende aquellas tcnicas de modificacin gentica de variedades de plantas, animales o microorganismos para su utilizacin con un propsito especfico.

La ingeniera gentica es un conjunto de tcnicas que permite manipular los genes. El descubrimiento de las enzimas de restriccin fue clave para poder desarrollar estos procedimientos.

En el siguiente informe que es el resultado de las practicas de la Cinetica de crecimiento microbiano donde observamos diversas fases de crecimiento del microorganismo E coli y cinetica enzimatica analizamos la metodologia establecida para la determinacion de la actividad enzimatica de la glucosa oxidasa.

PRACTICA 1: CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

MARCO TEORICOActividad enzimtica:

Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero de centros activos por molcula de enzima, las medidas de actividad enzimtica permiten calcular el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de reacciones elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parmetro cintico importante pr mltiples razones:

KM es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si KM = [S], la ecuacin de Michaelis-Menten se reduce a: v = Vmax/2.

El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este hecho tiene fcil explicacin si tenemos en cuenta que KM se define como (k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si KM es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequea, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si dos sustratos del mismo enzima tienen distinta KM, el que presente mayor KM tiene menor afinidad por el enzima, y la reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor KM, salvo a concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.

Los valores de KM de muchos enzimas son prximos a los de la concentracin fisiolgica de sus sustratos, de forma que pequeas variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metablica.

CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin (Figura de la derecha). Para evitar esta complicacin se procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Adems, en estas condiciones no es necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequea que la reaccin inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica como la de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En este punto, la reaccin e[footnoteRef:2]s de orden cero y la velocidad es mxima (Vmax).1 [2: ]

MATERIALES Y EQUIPOS

METODOLOGIA

Inoculacin y cintica enzimtica

1. Agitar y tomar en un tubo de ensayo, una alcuota de 2 ml en condiciones aspticas (utilizando un mechero) de cada medio de cultivo, el cual se utilizarComo blanco, marcar como B.

2. Inocular en condiciones aspticas 5 ml del inculo a cada medio de cultivo (medios del 1, 2, 3, 8, 9,10), agitar y tomar 2 ml de muestra en un tubo de ensayo marcado como tiempo cero 0. Agitar el medio e incubar a 37 C; tanto los tubos marcados como blanco (B), cero (0) y las dems muestras posteriores, deben ser almacenarlos rpidamente a 4 C para evitar el crecimiento del microorganismo en los mismos.

3. Repetir la toma de muestra en tubos de ensayo (tem 2) en los tiempos: 30, 60,90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 y 300 min, cada tubo debidamente marcadocon su respectivo tiempo, almacenarlos en la gradilla a 4 C hasta el final delcrecimiento (minuto 300).

4. Luego de la ltima toma (al minuto 300), agitar y leer cada muestra en unespectrofotmetro a una longitud de onda de: 600 nm, utilizando como blanco eltubo marcado como B, para cada medio. Luego de su medicin, las muestrasdeben ser desechadas en una solucin de hipoclorito de sodio.

TABLAS Y GRAFICAS DE RESULTADOS

Medido a 600mmGRUPOt=0t=30t=60t=90t=120

37c4c37c4c37c4c37c4c37c4c

SACAROSA 0.227-0,014-0,052-0,0510,1150,0780,770-0,0200,0920,093

GLUCOSA-0,100-0,0150,235-0,0380,051-0,014-0,0830,0640,0210,114

FRUCTOSA-0,0410,0450,1310,0130,214-0,0440,173-0,1000,198

SACAROSA 60%-0,018-0,400,119-0,0610,033-0,0240,022-0,018-0,004-0,029

SACAROSA 40%-0,002-0,043-0,026-0,0380,0160,004-0,0390,014-0,025-0,025

ANALISIS DE RESULTADOSEn la prctica se observa el crecimiento de los microorganismos, todo se resume en varias fases: Fase de latencia o retardo: dura pocas horas, ya que la clula se adapta al medio en el que se encuentra. Puede haber muerte de algunos microorganismos.En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan lasenzimas necesarias para la actividad metablica que deben llevar adelante.Cuando se hacen mediciones del nmero de clulas en distintos tiempos dentro de estafase, el valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las clulas trabajanactivamente adaptando el equipo enzimtico al medio de cultivo. La bacteria se preparapara hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto es la fase deadaptacin al medio, con aumento de la masa celular pero no del nmero de clulas. Fase logartmica: se lleva a cabo una multiplicacin exponencial de los microorganismos.La velocidad de crecimiento que alcanza un cultivo, depende del tipo de microorganismoque se trate y diversos factores ambientales como son la temperatura, el pH, oxigenacin,etc. Fase de aceleracin negativa: dada por la competencia del alimento. Fase estacionaria: consiste en el equilibrio entre la multiplicacin y muerte de los microorganismos.Esta fase se presenta por agotamiento del suministro de algn nutriente esencial o poracumulacin de productos metablicos que sean txicos. Tambin puede ser por ladisminucin de la oxigenacin o cambios en las condiciones de pH del medio de cultivo(acidificacin o alcalinizacin). Fase de Destruccin acelerada: debido a la muerte exponencial de los microorganismos, por falta de nutrientes y el aumento de sustancias de desecho. Fase de declive: causada por la muerte total de los microorganismos por la acumulacin de sustancias de desecho.

El tiempo de la fase de latencia puede variar debido a las condiciones del cultivo as como tambin por la edad del inculo, el tamao del inculo y los nutrientes contenidos en el medio de cultivo. 'La edad del inculo vara debido a la cantidad de materiales txicos en l y la falta de nutrientes que posea la clula durante su desarrollo, los inculos viejos prolongan ms la fase de latencia.

La fase de crecimiento microbiano dura 120 minutos y sta es logartmica.

CONCLUSIONESEl crecimiento bacteriano puede considerarse como el crecimiento de poblaciones de muchos millones de clulas cuyas caractersticas son esencialmente estadsticas, y el comportamiento de la clula individual es tomado como una frecuencia.El crecimiento de las bacterias en cultivo puede determinarse midiendo experimentalmente el incremento de la materia celular (protoplasma) o del incremento del nmero de clulas.Las posibilidades fisiolgicas de los microorganismos se relacionan inversamente con sus necesidades nutricionales, ya que, la sntesis de componentes celulares a partir de materia inorgnica o compuesto inorgnicos simples es obviamente un proceso ms complejo de lo que sera si los productos de partida fueran sustancias orgnicas complejas qumicamente ms parecidas a los constituyentes finales de la clula.Los microorganismos probiticos juegan un papel importante en el desarrollo de nueva flora intestinal y de sustancias capaces de disminuir los patgenos como bacterias, virus y parsitos.Desde el punto de vista microbiolgico, un microorganismo muere cuando pierde de forma irreversible la capacidad de dividirse. El fundamento de esta definicin es que si un microorganismo ha perdido la capacidad de dividirse no podr formar una colonia sobre un medio de cultivo y no ser posible detectar su presencia por los mtodos microbiolgicos tradicionales. Es decir, cuando no se produce aumento en el nmero de microorganismos no hay crecimiento. Sin embargo, un microorganismo puede estar muerto desde el punto de vista microbiolgico y continuar desarrollando una actividad metablica que se traduzca, por ejemplo, en liberacin de toxinas. Por otra parte, hay que considerar que la capacidad de multiplicacin (crecimiento) de un microorganismo puede verse transitoriamente afectada por lesiones o por las condiciones fsicas o qumicas del entorno. En estos casos, podramos considerar como muertos microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si las condiciones son de nuevo favorables.

BIBLIOGRAFIA

http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm

Universidad del Pas Basco.Cinetica enzimtica. Recuperado de: http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm

PRACTICA 4: CINETICA ENZIMATICA

INTRODUCCINLas clulas poseen compuestos qumicos que controlan las reacciones que ocurren en su interior. La sustancia que controla la velocidad a la que ocurre una reaccin qumica sin que la clula sufra dao alguno ni se destruya se conoce como catalizador. Las enzimas son sustancias (protenas) que actan como catalizadores en las clulas y hacen posibles las, reacciones que ocurren en las clulas disminuyendo la cantidad de energa de activacin que se necesita. Las enzimas tambin controlan la velocidad a la que ocurre la reaccin para que la energa se libere a una temperatura que no haga dao al organismo. Las miles de reacciones que constituyen el metabolismo de los seres vivos estn bajo control de miles de enzimas. Diferentes enzimas controlan diferentes reacciones. La sustancia sobre la cual acta una enzima se llama Sustrato: Al ocurrir una reaccin el sustrato se convierte en uno o ms productos nuevos.Las enzimas no se consumen en las reacciones y se pueden volver a utilizar. Sin embargo una enzima particular acta solo sobre un sustrato especfico, as que una enzima solo puede controlar un tipo de reaccin especfica. Una enzima recibe el nombre del sustrato sobre el cual acta; Ej. Anhidrasa carbnica, la cual acta en la conversin del CO2 en HCO3. Como nota, a una parte del nombre del sustrato sobre el cual acta la enzima se le aade el sufijo asa. Corno las enzimas son protenas; los factores que afectan la estructura de la protena, tambin afectan la funcin o actividad de las enzimas. La temperatura, el pH y la concentracin son algunos de los factores que influyen en la actividad de las enzimas.

JUSTIFICACINLas enzimas son molculas proteicas que catalizan reacciones qumicas, una enzima hace que una reaccin qumica que transcurre a una velocidad muy baja, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas. Las ENZIMAS son catalizadores biolgicos. Un catalizador es una sustancia que acelera las reacciones qumicas sin modificarse; esto significa que puede ser utilizado una y otra vez. Una Coenzima es la parte no proteica de una enzima. Las enzimas (E) son protenas que tienen uno o ms lugares llamados SITIOS ACTIVOS (Entidad tridimensional de una enzima donde ocurren los procesos de lisis, catlisis, hidratacin, des hidrogenacin) a los cuales se une al SUSTRATO (S), es decir la sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado y convertido en 1 o ms PRODUCTOS (P).

Dando la siguiente ecuacin:E + S (ES) E + P

Donde (ES) es un complejo ENZIMA - SUSTRATO intermedio. Las enzimas aceleran la reaccin hasta que alcanzan un equilibrio. Una caracterstica muy importante de la actividad enzimtica es su ESPECIFICIDAD de SUSTRATO, de manera que una enzima particular solo actuar sobre cierto sustrato y no aceptan molculas relacionadas o que tengan una forma ligeramente distinta. Se asemejan al modelo de la Llave con la Cerradura. La enzima tiene un sitio activo complementario para el sustrato. Presentan un Sitio ALOSTRICO. Algunas enzimas requieren cofactores para su actividad, por ejemplo los Citocromos contienen un grupo prosttico formado por un complejo metaloporfirnico. Otras enzimas emplean pequeas molculas no proteicas llamadas Coenzimas que se unen durante la reaccin para activar a la enzima. El NAD y el NADP son importantes coenzimas. O sea una enzima tiene un Sitio Activo, Sitio alostrico, cofactores enzimticos. Entre las Coenzimas se encuentra el NAD, FAD, FADP, FADPH, FADH, Co A, Etc. Toda Enzima se une al Sitio Activo y se ejemplifica mediante el modelo de la LLAVE con la CERRADURA, que consiste en la especificidad del SITIO ACTIVO, que depende no solo de la estructura primaria de la protena, sino tambin de sus estructuras secundarias y terciarias. La enzima tiene un sitio activo complementario para el sustrato y no aceptan molculas relacionadas o que tengan una forma ligeramente distinta y es por eso que la ENZIMA y el SUSTRATO tienen una interaccin semejante a la LLAVE con la CERRADURA. Otro modelo es del ENCAJE INDUCIDO, la interaccin entre la enzima y el sustrato produce cambios de conformacin en la Protena. El sustrato de une al SITIO ACTIVO mediante fuerzas no covalentes. Despus de la formacin del COMPLEJO ES, se produce el paso cataltico, en el que el Sustrato sufre Hidratacin, Deshidratacin, Oxidacin, Reduccin, Transferencia de grupos qumicos, etc. El SITIO ACTIVO es complementario del SUSTRATO solo despus que ste se une a la ENZIMA.En la prctica se realiz el estudio de la catlisis enzimtica para la enzima Glucosa Oxidasa.La glucosa oxidasa es ampliamente utilizada, acoplado a peroxidasa de reaccin que visualices colorimtricamente la formada H2O2, para la determinacin de glucosa libre en el suero o plasma de la sangre para el diagnstico, utilizando ensayos de espectrometra de forma manual o con procedimientos automatizados, y hasta el punto de utilizar ensayos rpidos. Ensayos similares permite para controlar los niveles de glucosa en la fermentacin, birreactores, y para controlar la glucosa en la materia prima vegetal y los productos alimenticios.

Biosensores electrodo enzimtico detectar los niveles de glucosa mediante el seguimiento del nmero de los electrones pasan a travs de la enzima mediante la conexin a un electrodo y la medicin de la carga resultante. Esto tiene una posible aplicacin en el mundo de la nanotecnologa cuando se utiliza junto con pequeos electrodos como sensores de glucosa para los diabticos.

En la fabricacin, GOx se utiliza como un aditivo gracias a sus efectos oxidantes: se solicita para la masa ms fuerte en panadera, en sustitucin de oxidantes tales como bromato. Tambin ayuda a eliminar el oxgeno de envases de alimentos, o D-glucosa a partir de clara de huevo para prevenir el pardeamiento.

La glucosa oxidasa se encuentra en la miel y acta como un conservante natural. GOx en la superficie de la miel reduce O2 atmosfrico al perxido de hidrgeno, que acta como una barrera antimicrobiana. GOx acta de manera similar como un bactericida en muchas clulas.

REVISIN BIBLIOGRFICAMarco Conceptual y Modelos MatemticosEl crecimiento microbiano es el aumento del nmero de microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no se refiere al crecimiento de un nico microorganismo (ciclo celular) sino al demogrfico de una poblacin. Denominamos ciclo celular al proceso de desarrollo de una bacteria considerada de forma aislada. A lo largo del ciclo celular, tiene lugar la replicacin del material de la bacteria, la sntesis de sus componentes celulares, el crecimiento para alcanzar un tamao doble del inicial y su divisin por biparticin de la bacteria para dar lugar a dos clulas hijas. La duracin del ciclo celular coincide con el tiempo de generacin y depende, en general, de los mismos factores de los que depende este. El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de todos sus individuos. Este crecimiento suele ser asincrnico puesto que cada microorganismo se encuentra en un punto diferente del ciclo celular. Por consiguiente, en un momento determinado en una poblacin se encuentran clulas que acaban de dividirse, otras que estn replicando su ADN y elongndose, otras que estn iniciando la divisin celular, etc.En un crecimiento sincrnico todas las clulas se encuentran simultneamente en la misma fase del crecimiento celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles de mantener por lo que su importancia est principalmente ligada a los estudios bsicos de biologa microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del suelo se encuentran en condiciones de crecimiento prximas a la fase estacionaria (en la que se produce una cierta sincronizacin del cultivo) y, por consiguiente, durante cierto tiempo las poblaciones naturales probablemente se comporten como relativamente sincrnicas. Las poblaciones de bacterias pueden crecer de una forma explosiva acumulando grandes nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto nocivo (infecciones o intoxicaciones) de los microorganismos depende de su nmero en la mayora de los casos, entender cmo se produce el crecimiento microbiano es importante para poder evitar o reducir dichos efectos nocivos.

Se denomina crecimiento equilibrado a aqul en el que toda la biomasa, nmero de clulas, cantidad de protenas, de ADN, etc., evolucionan en paralelo. El crecimiento equilibrado probablemente ocurra en muy contadas ocasiones en condiciones naturales. Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero de individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de generacin (). De esta forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N) al cabo de un nmero de generaciones (n) usando la ecuacin siguiente: N = No 2n Siendo No el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de generaciones se puede calcular de la siguiente forma:n = t /

Donde t es el tiempo transcurrido. Los tiempos de generacin de bacterias creciendo en ambientes favorables pueden ser muy cortos (valores de de 20 min). Esto lleva a que una nica clula (N0 = 1) creciendo con un = 20 min, llegue a poder producir 4.7 x 1021 clulas en 24 horas. Si la bacteria crece en un medio lquido, las clulas que se producen en cada divisin continan su vida independientemente en la mayora de los casos formando una suspensin de clulas libres. Cuando una clula aislada comienza a crecer sobre un substrato slido, el resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula viva y aislada que se encuentra en un substrato y en condiciones ambientales adecuadas y produce una colonia en un breve lapso de tiempo. Una UFC tambin puede corresponder a ms de una clula cuando stas forman parte de grupos unidos fuertemente (estreptococos o diplococos, por ejemplo) ya que cada grupo formar una sola colonia. Cuando algunos tipos de bacterias o de levaduras patgenas crecen sobre superficies forman biopelcuas (biofilms) en los que las clulas se asocian entre s mediante capas de polisacridos que forman una pelcula que recubre la superficie sobre la que se encuentran las clulas. Los biofilms son muy importantes porque los microorganismos que los forman resultan ms resistentes a antibiticos y al ataque de clulas del sistema inmune y, por consiguiente, las infecciones que producen son ms difciles de tratar. La presencia de biopelculas es un problema serio en los implantes ortopdicos, catteres, etc. El sarro de los dientes es un ejemplo de biofilm.

METODOLOGAPara la realizacin de esta prctica se requieren los equipos materiales y reactivos:

Con la ayuda de un baln aforado, preparar 10 ml de una solucin de glucosa a una concentracin de: 8.8 mg/ml. Pasar a un tubo de ensayo y marcar como: Tubo 1. En una gradilla ubicar seis (6) tubos de ensayo con cinco (5) ml de agua destilada cada uno; marcarlos como: tubo 2, tubo 3, tubo 4, tubo 5, tubo 6 y tubo 7.

Realizar diluciones sucesivas as: tomar 5 ml de la solucin de glucosa del tubo 1 y adicionarlo al tubo 2; agitar y mezclar con la ayuda de un vortex. De los diez mililitros del tubo 2, tomar cinco (5) ml y adicionarlo al tubo tres (3), agitar y mezclar con ayuda de un vortex; esta accin se repite hasta el tubo 7.

Las concentraciones esperadas se muestran en la tabla adjunta. En la celda de espectrofotmetro adicionar 1 ml de solucin del reactivo de GOD POD; Introducir la celda en el equipo, y programar este a una longitud de onda de 510 nm.

En la celda de espectrofotmetro con el reactivo adicionar 0.1 ml del sustrato correspondiente al tubo uno (1), agitar rpidamente con ayuda de la micropipeta e inmediatamente llevar a cero la absorbancia (digitar blanco); e igualmente iniciar conteo del tiempo con ayuda de un cronmetro. Ir tomando datos de la variacin de la absorbancia en el tiempo.

Repetir los numerales 2.9.5 y 2.9.6 con cada uno de los sustratos (Tubos de ensayo del 2 al 7). Los resultados anotarlos en la tabla adjunta.

Graficar concentracin de glucosa transformada a cido glucnico con respecto al tiempo. La concentracin de glucosa transformada a cido glucnico se puede determinar mediante la siguiente relacin: 0,320 Absorbancia equivale a 0,1 mg/ml de glucosa. Con lo anterior determinar la actividad enzimtica de cada concentracin (en total son siete 7 actividades) Una unidad de actividad enzimtica (U) se puede establecer como: cantidad de enzima necesaria para transformar un (1) mg de glucosa a cido glucnico por minuto. Realizar una grfica de actividad enzimtica con concentracin de sustrato y determinar la Vmax y Km de la enzima Glucosa oxidasa.UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIAEscuela de Ciencias Bsicas Tecnologas e IngenieraBiotecnologia Alimentaria

TABLAS DE RESULTADOS

Tabla de mediciones de cada una de las diferentes concentraciones de glucosa y la absorbancia obtenida en el espectrofotmetro

Calculo de concentracin de la Glucosa transformada en cido Gluconico

Grficas de CONCENTRACION DE GLUCOSA TRANSFORMADA A CIDO GLUCNICO CON RESPECTO AL TIEMPO

RESULTADOS Y ANLISIS DE LOS RESULTADOSCon lo anterior determinar la actividad enzimtica de cada concentracin (en total son siete 7 actividades) Una unidad de actividad enzimtica (U) se puede establecer como: cantidad de enzima necesaria para transformar un (1) mg de glucosa a cido glucnico por minuto.

Para ello Se determina la pendiente de cada grfica (Abs vs t). Nos dar cambio en absorbancia por segundo. sta pendiente Absorbancia/ tiempo se usa para calcular lacantidad de producto que se genera por segundo. La pendiente se calcula de la parte donde se ve la parte de ascendencia rpida, a partir del tiempo 0. No se toma en consideracin la parte donde las lecturas comienzan a estabilizarse.

Hallar U:U= 0,0134 para 8,8 mg/ml de glucosa

Realizar una grfica de actividad enzimtica con concentracin de sustrato y determinar la Vmax y Km de la enzima Glucosa oxidasa.

CURVA DE MICHAELIS-MENTEN

Sustrato (mg/mL)Velocidad (mg/seg/ml)

0,27500,001

0,55000,0009

1,10000,022

2,20000,0041

4,40000,0058

8,80000,0134

Sustrato (mg/mL)Velocidad (mg/seg/ml)

9,4922E+171,66667E-05

1,89845E+180,000015

3,79689E+180,000366667

7,59378E+186,83333E-05

1,51876E+199,66667E-05

3,03751E+190,000223333

CONCLUSIONES

Aprendimos a calcular el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin

Conocimos cual es el comportamiento de la enzima en el proceso al momento de su saturacion.

BIBLIOGRAFAPea A. (2004). Bioqumica (2004), Editorial LIMUSA S.A de CV. Grupo Editores. Mxico.Benintende, S. & Sanchez, C. Crecimiento Bacteriano. UNER. Recopilado de:http://www.fca.uner.edu.ar/academicas/deptos/catedras/microbiologia/unidad_3_crecimiento_bacteriano.pdfSosa Romero M, Galviz Franco P. caracterizacin de la enzima glucosa oxidasa (gox) (ec 1.1.3.4.) Libre e inmovilizada en dos soportes (alginato de Sodio y agarosa) para la produccin de cido glucnico UNAD. Bogot. 2010.

http://www.slideshare.net/yordi189/cintica-enzimatica