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HIV – HCV - HBV
EPIDEMIOLOGIA,
PREVENZIONE E PROFILASSI
Diagnostica di Laboratorio
6 GIUGNO 2012
M. BONGERA
I° parte
Virus EPATITI HBV HCV epatotropi
Virus AIDS HIV 1 -2 linfotropi
Definizione di virus Luria e Darnell (1968)
I virus sono entità, il cui genoma è un elemento di acido nucleico, DNA o RNA,
il quale si riproduce all’interno di cellule viventi usandone i sistemi enzimatici
per dirigere la sintesi di particelle specializzate, i virioni, che contengono il
genoma virale e lo trasferiscono ad altre cellule.
PCR : procedure generali
campione Estrazione
DNA/RNA
Se RNA
retrotrascrizione
amplificazionerivelazione
immunoenzimatica
Gel elettroforesi
altro
Polymerase Chain Reaction : principio
CICLI TERMICI
1) denaturazioone
94-95°C
2) annealing
50-65°C
3) extension
72°C
Numero di cicli123456789
101112131415161718192021222324252627282930
Numero di molecole di amplificati
248
163264128256512
1.0242.0484.0968.192
16.38432.76865.536131.072262.144524.288
1.048.5762.097.1524.194.3048.388.608
16.777.21635.544.43267.777.216134.217.728268.435.456536.870.912
1.073.741.724
Resa teorica di una reazione di PCR a partire
da una singola copia di DNA
la PCR real time
E’ un’amplificazione di acidi nucleici durante la quale
i prodotti di PCR vengono rivelati e quantificati man
mano che si formano, in tempo reale.
Vengono quindi prodotti dati qualitativi e quantitativi
in contemporanea, attraverso la lettura di un segnale
fluorescente.
La fluorescenza viene emessa dal DNA in via di
formazione
Real time PCR
DNA amplificato
CARICA VIRALE ANALISI GENOTIPICHE
quantità di virus presente nel sangue
viremia
Real time PCR
Direttamente proporzionale al grado
di attività replicativa del virus .
UNITA’ DI MISURA : UI/ml (S.I. WHO) copie/ml genomi eq/ml
Es. 1.000 UI/ml = 1X10^3 = 3 log UI/ml10 UI/ml = 1x10^1 = 1 log UI/ml
CARICA VIRALE VIRAL LOAD.
CARICA VIRALE = riduzione PERIODO FINESTRA
• PERIODO DI TEMPO CHE INTERCORRE TRA L’INFEZIONE E LA
COMPARSA DEL PRIMO MARCATORE RILEVABILE CON I TEST
DI LABORATORIO
• Periodo finestra anticorpale
• Periodo finestra antigenico
TEST BIOMOLECOLARI HVB HCV HIV
• Approccio terapeutico : carica virale, genotipi
• Monitoraggio terapeutico: valutare la risposta alla
terapia
• Diagnosi : differenziare malattia/non malattia
• Screening : identificare soggetti con malattia/evento
in una popolazione di “ sani”
- donatori da sangue
terapia a base di interferone, nonché a un suo differente decorso e al
gradseverità (anche se questo aspetto non è ancora del tutto chiarito): il 2 e il 3
sono i genotipi più facili da trattare, mentre l'1 e il 4 sono i più resistenti; il
genotipo 1b, in particolare, è legato a una forma di infiammazione del fegato più
acuta dal decorso particolarmente aggressivo.