Determinación de valores hematológicos y bioquímicos en ...
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Determinación de valores hematológicos y bioquímicos en ratas Wistar macho del bioterio accesorio de la Universidad Industrial de Santander Mayra Angélica Leal Quintero Tesis para lograr el título de Médico Veterinario Universidad de Santander Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Agropecuarias Programa de medicina veterinaria Bucaramanga 2020
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Determinación de valores hematológicos y bioquímicos en ratas
Wistar macho del bioterio accesorio de la Universidad Industrial
de Santander
Mayra Angélica Leal Quintero
Tesis para lograr el título de Médico Veterinario
Universidad de Santander
Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Agropecuarias
Programa de medicina veterinaria
Bucaramanga
2020
Determinación de valores hematológicos y bioquímicos en ratas
Wistar macho del bioterio accesorio de la Universidad Industrial
de Santander
Mayra Angélica Leal Quintero
14351047
Msc. John Jaime Quimbaya Ramírez
Tutor
Msc. Erika Marcela Moreno Moreno
Co-Tutora
Universidad de Santander
Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y Agropecuarias
Programa de medicina veterinaria
Bucaramanga 2020
IV
AGRADECIMIENTOS
Al Doctor John Jaime Quimbaya Ramírez y la Doctora Erika Marcela Moreno
Moreno por su apoyo incondicional, su orientación para la formación de científicos y
paciencia para enseñarme durante estos meses de arduo trabajo investigativo.
A la Doctora Liliana Torcoroma García por su apoyo y acompañamiento para el correcto manejo y procedimiento de la investigación.
Al Dr. Fabián Jiménez por su invaluable colaboración y orientación en el diseño y
análisis estadístico de los datos recolectados por este estudio.
A la facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad de Santander por la
oportunidad de crecer personal e intelectualmente a lo largo de todos estos años de
formación académica.
Al laboratorio Neurotrauma de la Universidad de Santander UDES y al laboratorio
central de la facultad de salud de la Universidad Industria de Santander UIS en cabeza de
la Doctora Clara Isabel González por el espacio y el apoyo científico y logístico que nos
brindó para llevar a cabo este trabajo de investigación, a su vez por la prestación de espacio
del bioterio accesorio de la UIS a cargo de la Dra. Martha Lucia Díaz por el
acompañamiento y guía en el cuidado y manejo de los animales.
A mi familia, Padres y hermanos por ese gran apoyo y esfuerzo a lo largo de todos
estos años, por creer en mis capacidades y por estar siempre a mi lado en esta etapa de mi
vida.
A Dios, por habernos iluminado siempre, por la fortaleza que nos ha dado, por esa
guía espiritual, y por habernos puesto en el camino a personas tan especiales y de buen
corazón para guiarme en este largo camino, por cuidar de mi familia y darles fortaleza de
espíritu y permitir me hayan brindado esta gran oportunidad de ser profesional.
V
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Rata Wistar. Vargas et al., 2018 .......................................................................... 8
Figura 2. Alojamiento de las ratas macho Wistar, en el bioterio accesorio de la Universidad
industrial de Santander Fuente: Propia ..................................................................... 10
Figura 3. Flujograma de la determinación de valores hematológicos y bioquímicos en rata
Wistar macho. Fuente Propia .................................................................................... 17
Figura 4. Ratas Wistar macho de la población del estudio, Fuente Propia ....................... 19
VI
LISTA DE TABLAS
Tabla 1 Parámetros hematológicos en ratas, en dos lugares diferentes de muestreo. .... 15
Tabla 2 Valores bioquímicos en ratas y dos lugares diferentes de muestreo .................. 17
Tabla 3 Resumen de las cepas de ratones y ratas utilizadas en las investigaciones, y el
número de publicaciones que se citan dichos biomodelos ....................................... 18
Tabla 4 Parámetros hematológicos fisiológicos en ratas macho Wistar ......................... 23
Tabla 5 Parámetros hematológicos (línea blanca) fisiológicos en ratas macho Wistar. 24
Tabla 6 Parámetros hematológicos fisiológicos de ratas macho Wistar ......................... 24
Tabla 7 Parámetros fisiológicos de transaminasas en ratas macho Wistar .................... 25
Tabla 8 Parámetros bioquímicos fisiológicos de función renal en ratas macho Wistar 26
Tabla 9 Parámetros bioquímicos fisiológicos de ratas macho Wistar ............................ 26
VII
TABLA DE CONTENIDO
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................ IV
TABLA DE CONTENIDO .................................................................................. VII
INTRODUCCION ..................................................................................................X
1. Planteamiento del problema ............................................................................ 1
2. Pregunta de Investigación ............................................................................... 2
3. Justificación .................................................................................................... 3
4. Objetivos ......................................................................................................... 4
4.1 Objetivo general ...................................................................................... 4
4.2 Objetivos específicos .............................................................................. 4
5. Estado del arte ................................................................................................. 5
6. Marco Referencial ........................................................................................... 8
6.1 Rata Wistar.............................................................................................. 8
6.2 Bioterios .................................................................................................. 9
6.2.1 Condiciones ambientales .................................................................. 11
6.3 Parámetros hematológicos .................................................................... 11
6.3.1. Línea roja ............................................................................................ 12
6.3.2. Línea blanca ........................................................................................ 13
6.3.3. Plaquetas ............................................................................................. 14
6.4 Parámetros bioquímicos ........................................................................ 15
6.4.1. Nitrógeno ureico en sangre ................................................................. 15
6.4.2 Creatinina ............................................................................................. 16
6.4.3. Alanina aminotransferasa (ALT) ........................................................ 16
6.4.4. Aspartato aminotransferasa (AST) ..................................................... 16
6.5 Modelo animal en la investigación biomédica ..................................... 17
7. Materiales y Métodos .................................................................................... 17
7.1 Materiales .............................................................................................. 17
7.1.1. Animales ............................................................................................. 18
7.1.2 Mantenimiento de Animales ................................................................ 18
7.1.3. Insumos ............................................................................................... 19
7.2 Métodos................................................................................................. 19
7.2.1. Mantenimiento .................................................................................... 19
7.2.2. Sacrificios ........................................................................................... 20
7.2.3. Parámetros Hematológicos ................................................................. 20
7.2.4. Parámetros Bioquímicos ..................................................................... 21
7.2.5. Análisis De Los Resultados ................................................................ 21
7.2.6. Consideraciones Éticas y Bioéticas .................................................... 21
8. Resultados ..................................................................................................... 23
8.1 Rango de valores hematológicos .......................................................... 23
8.1.1. Línea roja ............................................................................................ 23
8.1.2. Línea blanca ........................................................................................ 23
VII
I
8.2 Rangos de valores bioquímicos ............................................................ 25
8.2.1. Función Hepática ................................................................................ 25
8.2.2. Función Renal ..................................................................................... 25
9. Discusión....................................................................................................... 23
10. Conclusión ................................................................................................ 26
11. Referencias Bibliográficas ........................................................................ 26
Apéndices .............................................................. ………………………………30
IX
RESUMEN
Título: Determinación de valores hematológicos y bioquímicos en ratas Wistar
macho del bioterio accesorio de la Universidad Industrial de Santander.
Autor: Mayra Angélica Leal Quintero
Palabras claves: Bioterio, ratas Wistar, parámetros hematológicos, parámetros bioquímicos, metabolismo
Actualmente las condiciones en las que se mantienen los bioterios pueden variar según su
localización y finalidad, siendo influenciados por la temperatura y el medio ambiente, lo
que produce variaciones en los valores normales de referencia de los animales empleados
para investigación. El objetivo de este proyecto fue determinar los rangos hematológicos
y bioquímicos en ratas Wistar macho sometidas a condiciones ambientales específicas.
Para ello se utilizaron 17 ratas macho de 60gr (±5gr), procedentes del bioterio de
la Facultad de Salud de la Universidad Industrial de Santander, las cuales fueron
anestesiadas con una mezcla Ketamina-Xilacina, y se tomaron muestras de sangre de la
vena yugular, para analizar parámetros hematológicos y bioquímicos. Los valores
obtenidos se analizaron bajo un paquete estadístico de Microsoft Excel, realizando tablas
de distribución de frecuencias y estadística descriptiva.
El valor promedio de hematocrito en los animales fue de 51,64%, el valor de la
hemoglobina de 15,00 g/dl, el conteo de glóbulos rojos fue de 9,07 106/µl y para las
plaquetas de 491,99 106/µl. El valor obtenido para el conteo de glóbulos blanco fue de
12,02 103 /µl, para la discriminación de la línea blanca se reportó así: para los granulocitos
15,13%, para los monocitos 6,47 % y para los linfocitos (LIN) fue de 78,09 %. Con
respecto a los valores obtenidos de los parámetros bioquímicos, el nitrógeno ureico obtuvo
un valor de 15,70 mg/dL, la urea mostró un valor de 30,39 mg/dL y la creatinina reporto
valores de 0,58 mg/dL. Las enzima hepática alanina aminotransferasa (ALT) obtuvo una
media de 89,43 ul y aspartato aminotransferasa (AST) un valor de 110,69 ul. En conclusión
la determinación de estos valores bioquímicos y hematológicos en ratas macho Wistar, son
de máxima importancia para ser usados como valores de referencia y así favorecer la
validación de posteriores estudios.
X
ABSTRACT
Title: Determination of hematological and biochemical values in male Wistar rats of the
accessory bioterium of the Universidad Industrial de Santander.
Author: Mayra Angelica Leal Quintero
Keywords: Bioterium, Wistar rats, hematological parameters, biochemical parameters,
metabolism.
Currently the conditions in which the bioterium are maintained can vary according to their
location and purpose, being influenced by the temperature and environment, which
produces variations in the normal reference values of the animals used for research. The
objective of this project was to determine the hematological and biochemical ranges in
male Wistar rats subjected to specific environmental conditions.
17 male rats of 60gr (± 5gr) were used, coming from the bioterium of the Faculty
of Health of the Industrial University of Santander were anesthetized with a ketamine-
Xylazine mixture, and blood samples were taken from the jugular vein, to analyze
hematological and biochemicals parameters. The obtained values were analyzed under a
Microsoft Excel statistical package, making frequency distribution tables and descriptive
statistics.
The average hematocrit value in animals was 51.64%, the hemoglobin value of
15.00 g / dl, the red blood cell count was 9.07 106 / ul and for platelets 491.99 106 / ul .
The value obtained for the white blood cell count was 12.02 103 / ul for the discrimination
of the white line was thus reported; for granulocytes 15.13%, for monocytes 6.47% and for
lymphocytes (LIN) it was 78.09%. Observe the values obtained from the biochemical
parameters Urea nitrogen where a value of 15.70 mg / dL was obtained, in the case of urea
values of 30.39 mg / dL, creatinine reported values of 0.58 mg / dL. The liver enzymes
alanine aminotransferase (ALT) obtained an average of 89.43 ul and aspartate
aminotransferase (AST) a value of 110.69 ul. In conclusion, the determination of these
biochemical and hematological values in male Wistar rats are of the utmost importance to
be used as reference values and thus favor the validation of subsequent studies.
Introducción
X
INTRODUCCION
Actualmente el uso de animales de laboratorio se considera fundamental en el
desarrollo de la ciencia experimental; no obstante, se requiere de un control riguroso de
variables y datos de la colonia involucrada (Maldonado & Aquilino 2016; Lima et al.,
2018). Los biomodelos en investigación favorecen establecer valores de referencia para
evaluar el estado de una especie, a través de la determinación de variables como la edad,
raza o cepa, condiciones ambientales del bioterio, técnica de muestreo, entre otros
(Aleman, 1998; Balkaya et al., 2001; Marshall et al., 2010). Esta determinación favorece
la credibilidad en la interpretación de los datos, ya que se pueden comparar los cambios
hematológicos, bioquímicos, fisiológicos, digestivos, entre otros inducidos por la
administración de fármacos o sustancias en experimentación sobre el biomodelo animal
(He et al., 2017). Las ratas Wistar empleadas en investigación comparten el 95% del ADN
humano y son susceptibles a enfermedades similares (Delwatta et al., 2018; Cossio et al.,
2013).
En este contexto, es sumamente importante la obtención de valores de referencia
en las ratas de experimentación (Seibel et al., 2010), a través de la categorizarización de
algunos factores que pueden inducir grandes cambios metabólicos. Entre estos factores se
incluyen la alimentación, condiciones ambientales, ubicación y método de extracción de la
muestra (Roe, 1993). Se debe resaltar, que las condiciones ambientales son importantes,
puesto que afectan los valores hematológicos en la concentración de componentes de la
sangre, directa e indirectamente (Balkaya et al., 2001).
Los valores hematológicos abarcan la determinación de hematocrito (Hto),
hemoglobina (Hb), recuento total de glóbulos rojos (GR), recuento total y diferencial de
glóbulos blancos (GB) (neutrófilos (GRAN), linfocitos (LIM), eosinófilos, monocitos
(MON) y basófilos) y recuento de plaquetas (PLQ), parámetros indispensables para el
manejo y el control fisiológico de las ratas. Por su parte, los parámetros bioquímicos
comprenden la determinación de las transaminasas Aspartato aminotransferasa (AST),
Alanino aminotransferasa (ALT), la creatinina (CRT) y el nitrógeno ureico en sangre
(BUN) entre otros, para un examen más riguroso del funcionamiento de los principales
órganos. Estos parámetros son de vital importancia para medir el estado de salud del
biomodelo y a su vez en futuras investigaciones tener un control y manejo de las
experimentaciones.
En las secciones siguientes a esta introducción, se presenta una breve descripción
de los fundamentos teóricos de interés para esta investigación. La primera sección aborda
la taxonomía y parámetros básicos de las ratas Wistar; así mismo, aspectos del cuidado y
parámetros hematológicos y bioquímicos en esta especie animal utilizada para la
investigación in vivo.
Introducción
XI
En la sección de Materiales y Métodos, se describen las aproximaciones
metodológicas del mantenimiento de los animales, toma y almacenamiento de las muestras.
Además, los procedimientos realizados para procesamiento de la sangre extraída.
En las últimas secciones, se presentan los resultados obtenidos, su análisis
estadístico y la discusión generada a partir de los mismos. Finalmente se concluye con la
determinación de los valores bioquímicos y hematológicos en ratas macho Wistar,
mantenidos a condiciones medioambientales controladas y resaltando la importancia que
estos datos tendrán para servir de base en futuras investigaciones.
Planteamiento del problema
1
1. Planteamiento del problema
En la actualidad, aunque existen diversas investigaciones de los valores
hematológicos y de los perfiles bioquímicos en ratas y animales de laboratorio a nivel
nacional y mundial (Arcila et al., 2010; Sousa et al., 2017; Goñi et al., 2011) es necesario
que cada bioterio estandaricé sus propios valores de referencia, teniendo en cuenta la
variabilidad de factores que influyen en las condiciones de crianza y mantenimiento de los
animales. Arcila et al., 2010 realizaron una investigación en el bioterio accesorio de la
Universidad Industrial de Santander (UIS) de la ciudad de Bucaramanga, con la finalidad
de determinar rangos hematológicos en ratas Wistar macho y hembra de diferentes edades.
Sin embargo para este estudio no se identificaron parámetros bioquímicos y por lo tanto,
se requiere complementar estos estudios en ratas Wistar. Estas ratas, se mantienen en un
ambiente controlado, lo cual genera una adquisición de datos básicos iniciales y
primordiales para estudios médicos y manejo de patologías de importancia en salud
pública. (Hernández 2006)
Las condiciones ambientales juegan un papel muy importante en la obtención y
credibilidad de los resultados. El investigador puede determinar de acuerdo a las
necesidades, dónde ubicar a los animales, teniendo en cuenta que el lugar brinde las
condiciones y manejos óptimos, con el fin de asegurar la salud y la comodidad de
especímenes, de modo que sus patrones metabólicos y de comportamiento se mantengan
normales y estables. (Fuentes et al., 2008)
Fuentes y colaboradores en el año 2008, determinaron dos ambientes: el
microambiente definido como el ambiente físico inmediato que rodea al ratón, también
llamado confinamiento o encierro primario, y el cual, está limitado por el perímetro de la
jaula o caja, cama, alimento y agua de bebida. Este microambiente debe cumplir con
parámetros que contribuyan a la salud de los animales, evitarles todo estrés, por lo que se
debe asignar a cada uno, un espacio adecuado que le permita movimientos y posturas
normales, preservando a su vez las mínimas condiciones de higiene y de protección contra
insectos, roedores y otras plagas. Y en segundo lugar, el macroambiente, el cual es definido
como el espacio inmediato al microambiente y es la sala de alojamiento en su ámbito
general (Fuentes et al., 2008). La alteración de alguno de los factores del macroambiente
puede producir cambios en el modelo animal, y su vez, la modificación del tipo de
respuesta y aumento de la variabilidad de los resultados entre o dentro de los laboratorios
de experimentación (Fuentes et al., 2008).
Debido a su pequeño tamaño las ratas son muy susceptibles a cambios ambientales,
puesto que una variación de la temperatura entre 2 a 3°C, puede afectar su temperatura
corporal y modificar su fisiología (Fuentes et al., 2008). Además, los ambientes que son
destinados a la producción de animales para investigación, en su interior deben tener una
ventilación con presión positiva de aire respecto a los pasillos o áreas exteriores, con el fin
Planteamiento del problema
2
de mantener los gradientes de presión, de tal forma que se evita el ingreso de patógenos desde el exterior que pueden alterar los resultados de las muestras (Fuentes et al., 2008).
El alimento es otro factor que es de suma importancia, es el insumo primario a partir
del cual se van a formar y renovar los tejidos y estructuras corporales de las ratas. La
nutrición es determinante en los estados sucesivos de crecimiento y producción de los
animales, de ahí que haya alimentos específicos para cada especie y cada etapa de su vida.
(Fuentes et al., 2008)
Las ratas Wistar han sido empleadas a nivel mundial, para diversas líneas de
investigación, usándose como biomodelos, y los rangos de referencia son una herramienta
indispensable para la experimentación animal por que permiten evaluar el estado higiénico
y sanitario de los animales ayudando a establecer diferencias en el comportamiento de los
parámetros de la fisiología animal durante la experimentación. (León et al., 2011)
Pregunta de investigación
2
2. Pregunta de Investigación
¿Cuáles son los rangos de valores hematológicos y bioquímicos de ratas Wistar
macho en el bioterio accesorio de la Universidad Industrial de Santander?
Justificación
3
3. Justificación
Evidenciando la necesidad de la estandarización de parámetros hematológicos y
bioquímicos, estos datos son fundamentales como referencia en estudios de
experimentación, tanto para estudiantes como profesionales, que requieran la utilización
de estos biomodelos en un centro de investigación en el área metropolitana de
Bucaramanga o en lugares con condiciones similares a la región y mantenidos con los
mismos criterios de cuidado.
Obtener indicadores bioquímicos y hematológicos en animales de laboratorio,
genera parámetros de estandarización en los valores de referencia para ensayos biológicos
(Lima et al., 2018). La determinación de estos valores en ratas Wistar, se disponen para
investigaciones futuras y son de gran valor como punto de partida para diversos estudios
(Melo, 2012).
Por otro lado, el ADN de las ratas presenta una similitud del 95% con el del ser
humano, por tanto, son susceptible a enfermedades o patógenos similares (Delwatta et al.,
2018). Las ratas de la cepa Wistar son predisponentes a infecciones de diferentes
microorganismos, entre estos el Trypanosoma cruzi en condiciones naturales y
experimentales, generan gran semejanza con el cuadro evolución con la enfermedad de
Chagas en humanos (Moreno et al., 2007). Por ello, es fundamental determinar los valores
de referencia, para lograr detectar si existen alteraciones hematológicas y bioquímicas ya
que esta cepa de rata es un buen biotipo para extrapolar los resultados al modelo humano
(Delwatta et al., 2018).
En este contexto, en Colombia y puntualmente en Santander, estos datos y valores
de referencia aún son limitados. Por lo cual, la importancia y la necesidad de conocer los
valores de referencia de cada bioterio, se hace indispensable, teniendo en cuenta que
existen modificaciones por la diversidad de condiciones ambientales, alimentación, cama,
hora luz, y mantenimiento de los animales en general. (Balkaya et al., 2001; Roe, 1993)
Objetivos
4
4. Objetivos
4.1 Objetivo general
Determinar los valores hematológicos y bioquímicos en ratas Wistar macho del
bioterio accesorio de la Universidad Industrial de Santander.
4.2 Objetivos específicos
Identificar el rango de los valores hematológicos en ratas Wistar macho, mantenidas en condiciones específicas en el bioterio de la Universidad Industrial de Santander.
Establecer el rango de valores bioquímicos en ratas Wistar macho, mantenidas en
condiciones específicas en el bioterio de la Universidad Industrial de Santander.
Estado del arte
5
5. Estado del arte
Kampfmann, et al., (2012), reportaron diferencias en variables hematológicas en
ratas de la misma cepa, pero de dos bioterios diferentes. Para ello emplearon 75 ratas de
10–13 semanas de edad (machos, n = 38; hembra, n = 37) del bioterio 1 y 60 ratas (macho,
n = 30; hembra, n = 30) del bioterio 2 se analizó usando un analizador de hematología
Sysmex XT-2000iV. Indicaron que se encontraron diferencias significativas para el GB,
recuentos de glóbulos rojos, plaquetas, linfocitos, monocitos, eosinófilos y reticulocitos. Y
volumen corpuscular medio (MVC), Hemoglobina corpuscular media (MHC), volumen
plaquetario medio (MPV) y plaquetas para ambos sexos. Concluyendo que se obtuvieron
diferencias en la los valores hematológicos entre las ratas Wistar de diferentes criadores,
subrayan la necesidad de evaluar y obtener datos de grupos control para una mejor
seguridad en los estudios clínicos.
Delwatta et al., (2018), reportaron valores de referencia para perfiles hematológicos
y bioquímicos en ratas, el propósito de este trabajo fue establecer una base de datos de
referencia para los parámetros sanguíneos y bioquímicos en animales aparentemente sanos.
Las ratas fueron criadas en el bioterio de la Facultad de Medicina de la Universidad de
Colombo (UCFM). Se compararon los valores entre los géneros de hembras y los machos
determinando que los valores medios del volumen celular empaquetado (PCV), el volumen
corpuscular medio (MCV) y la concentración media de hemoglobina corpuscular, los
niveles de creatinina sérica y glucosa en sangre entre los dos géneros fueron
estadísticamente significativos. Las mediciones del perfil lipídico no difirieron
significativamente entre los géneros. En relación con las enzimas hepáticas reportaron que
la fosfatasa alcalina (AP), alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa
(AST) también fueron estadísticamente significativamente diferentes entre los sexos.
Concluyendo que es evidente que los parámetros hematológicos, bioquímicos y
fisiológicos medidos de ratas pueden verse afectados por diferentes factores y condiciones
como es el caso del sexo.
Filho et al., (2017), reportaron referencias de valores hematológicos en ratas en
crecimiento, indicando que los valores cambiaban según la fase de vida de las ratas.
Utilizaron machos y hembras de 1, 2, 3, 6, 12,18 y 24 meses de edad. Indicaron que luego
del tercer mes comenzaban a observarse cambios en los parámetros hematológicos, en los
niveles de hematocrito y hemoglobina no existieron diferencias entre la edad. Este trabajo
es de importancia médica y científica porque aporto los valores normales para ratas Wistar
entre los 2 y 24 meses de edad.
León et al., (2011), reportaron parámetros normales de perfiles hematológicos y
bioquímicos en ratas de un centro de investigación en Cuba. Se usaron 780 ratas macho y
hembras, entre las 5 a 22 semanas edad, analizando valores de hematocrito, hemoglobina
y plaquetas; perfiles de enzimas hepáticas, encontrando que existían diferencias entre
género y entre los grupos de edades.
Estado del arte
6
De Sousa Barbosa et al., (2017) reportaron Perfiles hematológicos y bioquímicos
en ratas de bioterio. Se utilizaron un total de 50 ratones machos y hembras en edad
reproductiva. Se estandarizaron los procedimientos para recolectar, procesar y analizar las
muestras. Las muestras de sangre recolectadas se transfirieron inmediatamente en tubos
Eppendorf que contenían heparina, y destinados a la evaluación hematológica y
bioquímica. La evaluación hematológica consistió en recuento de glóbulos rojos (RBC),
recuentos de leucocitos (WBC), recuentos de plaquetas (PLT), hematocrito (HCT),
Concentración de hemoglobina (HGB), volumen corpuscular medio (MCV) y
concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC) Los parámetros bioquímicos
cuantificados fueron : urea, creatinina, Alanino aminotransaminasa, aspartato
aminotransaminasa y fosfatasa alcalina (FAL). Se logró determinar que los resultados
obtenidos para estos parámetros analizados se encontraban en las variaciones descritas por
la literatura, concluyendo que los datos analizados se pueden utilizar como datos de
referencias para futuros estudios.
He et al., (2017) analizaron parámetros hematológicos y bioquímicos en ratas y la
influencia del sexo sobre estos. Se manejaron 500 ratas Sprague-Dawley divididos en
hembras y machos, determinando que la mayoría de los analitos estudiados estaban bajo la
influencia del género. Indicaron que los animales macho presentaron mayores valores de
los parámetros hematológicos, exceptuando a los valores del hematocrito, plaquetas y urea
donde se apreció que en las hembras fueron mayores. Concluyeron que los parámetros
estudiados generaron diferencias significativas en ratas Sprague-Dawley machos y
hembras.
A nivel local, en la Universidad Industrial de Santander, existe un trabajo sobre
parámetros y mediciones hematológicas en ratas Wistar, sin embargo, es de 9 años de
antigüedad y está contemplado en los animales del bioterio central, mas no involucra el
bioterio accesorio. Arcila et al., (2010), determinaron valores de referencia hematológicos
de la cepa Wistar/UIS. Los resultados permitieron observar diferencias entre variables de
la cepa, determinadas por sexo y edad. Las variables Hto. (49,80%), Hb (14,62 gr/dL) y
recuento de glóbulos rojos (GR) (6,07x106/mm3), mostraron una diferencia significativa
determinada por el sexo, siendo mayor en los machos que en las hembras la variable VCM,
que también mostró una diferencia significativa por el sexo (84,67 fL), pero que fue mayor
en hembras que en machos Arcila et al., (2010).
Las variables GB (10,50x103/mm3), (linfocitos 8,82x103/mm3), plaquetas (361,80
103/mm3), granulocitos (1,45x103/mm3). Mostraron una diferencia significativa
determinada por la edad, siendo mayor en los anímalos menores de 16 semanas,
hemoglobina corpuscular media (HCM) (25,28 Pg.) muestran también una diferencia
significativa determinada por la edad, pero siendo mayores en los animales de más de 16
Estado del arte
9
semanas. En conclusión, determinaron que las variables analizadas generaban cambios en los perfiles hematológicos en los animales estudiados (Arcila et al., 2010).
Marco referencial
8
6. Marco Referencial
El modelo animal es muy importante en la investigación biomédica. Antes de
aplicar estudios en humanos u otros primates, se deben realizar experimentos con modelos
de animales inferiores, como roedores (estudios preclínicos) (Wilber et al., 2016). Las ratas
Wistar (Rattus norvegicus) se usan ampliamente para estudios in vivo, particularmente en
fisiología (Fitria & Sarto, 2014). Sin embargo, el perfil hematológico y bioquímico normal
para la línea de base o el control, no está disponible localmente. Muchos investigadores
adoptan datos de referencias generales como clínicas o manuales de laboratorio, diarios,
libros de texto u otros recursos, que pueden afectar la validez de sus resultados (Fitria &
Sarto, 2014).
6.1 Rata Wistar
Este modelo animal es de la clase mamífera, se encuentra dentro del orden Rodentia
Suborden Miomorfa, pertenece a la familia Muridae y subfamilia Murinae y corresponde
al género Rattus especie norvegicus (Romero & Medellín 2005). La rata de laboratorio es
originaria de las zonas de Asia meridional (Fuentes et al., 2008). La rata Wistar es albina,
tiene orejas más largas y cabeza más ancha sobre todo en el macho y la longitud de su cola
es menor a la longitud de su cuerpo, y posee la característica de ser dócil (Fuentes et al.,
2008). (Figura 1).
Figura 1. Rata Wistar. Vargas et al., 2018
Este tipo de ratas es uno de los animales de laboratorio de mayor uso en la
investigación, debido a sus características como: un tamaño pequeño, ciclo de vida y
Marco referencial
9
períodos de gestación cortos, con camadas de 9 a 10 crías y facilidad de manejo (Aparicio,
2013). Usadas ampliamente como biomodelos en oncología, toxicología, teratogénesis,
nutrición, entre otras (Mourelle et al., 2013)
El periodo de vida de las ratas en un ambiente controlado, aportando las
condiciones óptimas requeridas, se aproxima entre 2 y 3 años. Sin embargo, existen
diferencias de longevidad de acuerdo con la cepa (Fuentes et al., 2008). Este modelo de
roedores es originario del Instituto Wistar de Filadelfia, Pensilvania, Estados Unidos, de
aquí el nombre de la cepa. Posee como características primordiales que es prolífera y
resisten a ciertos patógenos (Vargas, et al., 2018).
Fuentes et al., (2008), describe algunos parámetros fisiológicos normales, como
son la temperatura 37°C, frecuencia respiratoria 83 – 113 respiración/min, cardiaca 373-
392 latidos/min, y también indica algunos valores hematológicos de referencia; Eritrocitos
7.2-9.6 x 1012/L Hematocrito 35-45% Hemoglobina 12-18 g/dL (Aparicio, 2013). Uno de
los parámetros etológicos de las ratas de laboratorio, es que se alimentan comúnmente en
la noche (Johnson, 2012). Su madurez sexual se presenta a los 72 días y la ovulación en
hembras se puede dar desde los 77 días (Fuentes et al., 2008).
6.2 Bioterios
Se conoce como bioterio al lugar donde se cría y se mantienen animales para ser
utilizados en los laboratorios para diversas investigaciones, en este espacio se da un
ambiente adecuado y controlado a la especie que se están manteniendo (Wilber et al.,
2016). La manutención de los animales generalmente se da en múltiples jaulas, cajas o
raks, donde los animales se encuentran alojados y rotulados. Los raks son el lugar más
importante del bioterio, debido a que es el microambiente donde se mantienen los animales
e influir directamente en los estudios (Montenegro y Ríos 2014). Las características de
estas jaulas de alojamiento son importantes y se debe tener en cuenta el material y diseño
de las mismas, por la influencia de luz, sonido, aire, calor, humedad y gases formados que
recibe el animal (Vargas et al., 2018).
El tamaño de los raks dependerá del número de animales que se alojen, este lugar
es importante para el desempeño de sus funciones vitales, los aspectos a tener en cuenta
son: la densidad de población, porque esta puede influir drásticamente en los parámetros
fisiológico y etológicos, otro aspecto a tener en cuenta es la introducción de nuevos
animales a las jaulas, ya que esta acción modifica los microambientes de las jaulas. La
cama por lo general es de viruta de madera libre de gérmenes y es fundamental su cambio
frecuentemente para evitar el exceso de orina y con ello la modificación de la humedad y
temperatura. (Cardozo et al., 2007)
Marco referencial
10
En la figura 2, se aprecia el alojamiento de los animales, estos pueden ser individuales o grupales.
Figura 2. Alojamiento de las ratas macho Wistar, en el bioteri
accesorio de la Universidad industrial de Santander Fuente:
Propia
Un aspecto fundamental es que en el bioterio se pueda controlar la calidad y
cantidad de horas luz, y se puede hacer renovaciones de aire por hora, controlar la
temperatura y la humedad entre otros factores que puede influir en el desempeño de los
animales que se encuentren en el bioterio. Arcila et al., (2010), indico que a nivel mundial
Marco referencial
11
los laboratorio de investigación han trabajado para caracterizar todos los aspectos
fisiológicos de los animales que mantienen, teniendo registrados datos básicos pero
fundamentales como son el ambiente microbiológico de los bioterios, el peso de los
órganos, la calidad microbiológica de los biomodelos, su condición genética, curvas de
crecimiento, entre otros, esto ha favorecido a obtener animales específicos y con
características específicas para la necesidad de cada área de investigación.
6.2.1 Condiciones ambientales.
Los valores de los perfiles bioquímicos y hematológicos son diversos y varían,
debido a que pueden ser afectados por factores genéticos y no genéticos, dentro de los
genéticos los cuales no son modificables encontramos la cepa, el sexo, la edad,
enfermedades de base estos factores son propios un ejemplo en el sexo algunos parámetros
son diferentes como la concentración de hemoglobina y hematocrito es mayor en ratas
macho. (Arcila et al., 2010). También están los factores no genéticos los cuales son
modificables podemos evidenciar: el macro y microambiente, temperatura, la alimentación
descritos anteriormente en planteamiento del problema y el manejo, considerado uno de
los más importantes, ya que pueden influir directamente sobre ellos (Fuentes et al., 2008).
Estos valores son de gran utilidad para trabajos de investigación, según las condiciones en
las que se mantienen los bioterios (Arcila et al., 2010).
6.3 Parámetros hematológicos
La hematología comprende el estudio del paquete celular. Los estudios
hematológicos determinan características morfológicas y químicas ayudando a crear
valores en torno a las condiciones ambientales y manejo de los animales de
experimentación (Arcila 2010). Dentro de una clasificación: recuento de eritrocitos y valor
del hematocrito, hemoglobina, recuento total y diferencial de leucocitos y determinación
de plaquetas (Coles 1989).
Se expresa que el hemograma es el procedimiento más común a nivel de laboratorio
con requerimientos mínimos de equipo y de mayor importancia, ya que la información
obtenida proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud del animal
(Hernán 2010).
Para le evaluación de los parámetros sanguíneos en ratas, se debe iniciar
conociendo los valores y datos básicos para lograr el entendimiento puntual de las muestras
obtenidas y que estas sean adecuadas y con el volumen ideal para realizar las pruebas de
laboratorio. (Schalm et al., 1981), indican que el volumen sanguíneo puede variar entre los
5.6 a 7.1 ml por cada 100gr de peso corporal de la rata. (Bolant et al., 1989), reportaron
valores de eritrocitos en ratas, indicando que existían tamaños diversos relacionados
fuertemente a la edad. En su investigación dividieron grupos de tamaños de glóbulos rojos.
Marco referencial
12
Los primeros grupos (I, II Y III), se encontraban al momento del nacimiento de la rata. Los
grupos IV y V, que se pueden encontrar en las muestras hasta el día 20-24 de vida. En los
animales con 84 días de vida se puede encontrar un grupo que estos autores denominaron
grupo IV desaparece el día 84, después de esto; la población V constituye en definitiva de
eritrocitos.
6.3.1. Línea roja.
6.3.1.1. Eritrocitos.
Los eritrocitos, también denominados hematíes o glóbulos rojos, son células
redondeadas, bicóncavas y anucleadas (excepto en aves y reptiles). Están formados por un
60% de agua, 35% de hemoglobina y 5% de matriz orgánica; se caracterizan por ser
altamente deformables, propiedad que les permite pasar a través de capilares estrechos.
Son producidos en la médula ósea a nivel del compartimiento hematopoyético. La
biometría hemática o hemograma es uno de los procedimientos de rutina a nivel de
laboratorio con requerimientos mínimos de equipo y de mayor importancia, ya que la
información obtenida proporciona una idea muy confiable del estado general de la salud
del paciente, para el conteo de eritrocitos se cuantifica el número de glóbulos rojos por
volumen y este proceso se puede realizar manual o automatizados. (Arcila et al., 2010)
El recuento eritrocitario normal puede diferir mucho, pero estos autores manifiestan
que se puede manejar un rango entre 7 y 9.7 (x 106/µl). La cuantificación de los eritrocitos
consiste en determinar el número de glóbulos rojos por volumen (Delwatta et al., 2018).
6.3.1.2. Hemoglobina.
La hemoglobina es una proteína globular que se encuentra en grandes cantidades
dentro de los glóbulos rojos y es de vital importancia fisiológica para el aporte normal de
oxígeno a los tejidos (Brandan et al., 2008).
Para la hemoglobina en ratas se puede determinar un rango de concentraciones de
11.4-19.2 g/dL, sin embargo, este parámetro varía según la cepa de rata evaluada, el sexo,
la edad y el estatus de salud. Al igual que en el hombre, el hematocrito es aproximadamente
tres veces el valor de la Hb, con medias de entre el 40.5 y 53.9%. g. (Delwatta et al., 2018)
Marco referencial
13
6.3.2. Línea blanca.
La denominada “línea blanca” determina los parámetros relacionados con los
leucocitos (también llamados glóbulos blancos), son un conjunto heterogéneo de células
sanguíneas que son los efectores celulares de la respuesta inmune, de manera que
intervienen en la defensa del organismo contra sustancias extrañas o agentes infecciosos
(antígenos). Se originan en la médula ósea y en el tejido linfático. Son células con núcleo,
mitocondrias y otros orgánulos celulares, siendo capaz de moverse libremente mediante
seudópodos. Su tamaño oscila entre los 8 y 20 μm. (Arcila et al., 2010)
El conteo diferencial de leucocitos incluye: conteo de neutrófilos (N), linfocitos
(L), monocitos (M), eosinófilos (E) y basófilos (B) Bolant et al., (1989; y los resultados se
expresaron en % y en valor absoluto. (Goñi et al., 2011).
6.3.2.1. Neutrófilos.
Los neutrófilos derivan de células madre pluripotenciales localizadas en la médula
ósea. Constituyen junto con los basófilos y los eosinófilos la denominada serie
granulocítica, un grupo celular con núcleos multilobulados, numerosos gránulos
citoplasmáticos de tinción característica y un lugar de acción tisular específico; Los déficits
cuantitativos y funcionales de los neutrófilos pueden ser congénitos o secundarios a
factores etiológicos extrínsecos, y se traducen en procesos infecciosos recurrentes de
severidad variable. (Diz et al., 2002)
Estas células presentan un diámetro aproximado de 11 ~m. El núcleo es helicoidal
o torcido, y la lobulaci6n nuclear no es muy marcada. Los gránulos citoplasmáticos se tiñen
de forma característica, si bien son menos densos que los gránulos específicos en los
neutr6filos humanos. Son positivos frente a la fosfatasa alca1ina y la peroxidasa. (Bolant
et al., 1989)
6.3.2.2. Linfocitos.
Los linfocitos son un tipo de leucocito (glóbulo blanco) comprendidos dentro de
los agranulocitos. Los linfocitos son células de alta jerarquía en el sistema inmunitario,
principalmente encargadas de la inmunidad específica o adquirida. Estas células se
localizan fundamentalmente en los órganos linfoides. Tienen receptores para antígenos
específicos y, por tanto, pueden reconocer y responder al que se les presente. Por último,
los linfocitos se encargan de la producción de anticuerpos y de la destrucción de células
anormales. (Tizard 2018)
Marco referencial
14
Al igual que el equivalente en humanos, los linfocitos de rata pueden variar de
tamaño desde unos 6 a 15 µm, pero al contrario que en los humanos, donde la mayoría de
los linfocitos son grandes, la rata posee una mayor proporción de células pequeñas. El
núcleo del linfocito se compone de cromatina grumosa. El citoplasma puede ser escaso o
abundante, y variar desde oscuro a un azul pálido. Al igual que el monocito, los linfocitos
contienen gránulos azurófilos. (Bolant et al., 1989)
6.3.2.3. Monocitos.
El mayor de todos los leucocitos, el monocito, presenta un núcleo abollonado,
abundante citoplasma, y cierta granulación azurofila o rojo-púrpura. Puede darse cierta
dificultad a la hora de distinguir los monocitos de los linfocitos de mayor tamaño. No
obstante, los monocitos de rata poseen las mismas características generales que los
monocitos de otras especies. (Bolant et al., 1989)
6.3.3. Plaquetas
Las plaquetas son partículas celulares esenciales para el normal desarrollo de la
hemostasia y cumplen un rol protagónico en los desórdenes tanto trombóticos como
hemorrágicos (Castex 2017).
Para el recuento de las plaquetas, el valor puede variar por la edad y el género; se
reporta que el promedio de plaquetas para machos menores a 16 meses de edad es de 270-
584 (103/mm3), mientras que para machos mayores de 16 meses de edad el promedio de
plaquetas es de 102-662 (Arcila et al., 2010). Los mismos autores han reportado que para
las hembras menores de 16 meses los rangos de plaquetas son de 228-656, y 176-460 fue
el promedio de hembras mayores de 16 meses y el promedio encontrado en ratas que
estaban entre los 15 a 22 meses fueron de 474 – 895 (Goñi et al., 2011); esto indica que los
valores de las plaquetas varían según sea el estudio y la cepa utilizada.
La determinación de los parámetros hematológicos es importante de la evaluación
preclínica. Sin embargo, el método de muestreo de sangre empleado debe evitar o
minimizar el estrés y lesiones en animales de laboratorio. Comparando resultados
hematológicos, recolectadas de la vena cava (VC) inmediatamente antes de la necropsia
con muestras tomadas de la vena sublingual (VS), en trabajos realizado por (Seibel et al.,
2010) y reportaron valores hematológicos en rata de la cepa Sprague–Dawley, utilizando
dos lugares de muestreo, el primero, VC y el segundo VS. Esta información se puede
detallar en la tabla 1.
Marco referencial
15
Tabla 1
Parámetros hematológicos en ratas, en dos lugares diferentes de muestreo.
VC (n 5
23)
VS (n 5 23)
Rangos
Normales
Históricos
Parámetro Unidades Media±
DS CV Media
±DS CV Medida
± DS
Recuento de
Glóbulos x1012/L 8.11 ±
0.300 3.7 8.35 ±
0.331 4.0 8.39 ±
0.389
Rojos (RBC)
Hemoglobina mmol/L 9.5 ± 3.7 9.9 ± 3.5 9.8 ±
(HGB) 0.35 0.35 0.42
Hematocrito L/L 0.422 ± 3.3 0.437 ± 3.6 0.404 ±
(HCT) 0.0140 0.0155 0.0164
Plaquetas x109/L 1184 ± 16.7 18.0 162 1013 ±
197.8 176.7
Nota. DS: Desviación estándar CV: coeficiente de variación, vena cava (VC) and vena sublingual
(VS) (Seibel et al., 2010)
6.4 Parámetros bioquímicos
6.4.1. Nitrógeno ureico en sangre.
En la rata, el BUN (Nitrógeno ureico en sangre), mide la cantidad de nitrógeno en
sangre que proviene de un producto de desecho, llamado urea; no cambia con el sexo ni la
edad, y las medias normales varían de 15 a 22 mg/dl, (Bolant et al., 1989). (Kaneko, J.
1989). Este análisis se hace para ver la funcionalidad renal, es decir, si no se elimina la
urea por vía renal, el BUN aumenta. Algunos de los factores que pueden afectar estos
niveles son: insuficiencia cardiaca, deshidratación o una dieta con alto contenido de
proteínas incrementa e BUN, en algunas situaciones un daño hepático puede disminuir su
nivel de BUN (Bolant et al., 1989). La urea se produce cuando se descompone la proteína
en el cuerpo y esta se produce en el hígado y se excreta por la orina; se valora para medir
el grado de filtración glomerular renal. Puede disminuir por insuficiencia hepática crónica,
dietas hipoproteicas y hiperadrenocorticismo; Reportaron rangos de Urea entre 11.42-
19.28 con promedios de 14.64 mg/dl (Bolant et al., 1989).
Marco referencial
16
6.4.2 Creatinina.
La creatinina es el principal producto de desecho del metabolismo de la creatina
por parte del músculo y se excreta por vía renal sin sufrir reabsorción tubular; así, aparece
creatinina libre en sangre (Bolant et al., 1989). La muestra ideal para la determinación de
creatinina es el suero o plasma heparinizado. Sus valores se pueden aumentar por una
insuficiencia renal, incremento en la actividad muscular e hipotiroidismo; Hay que resaltar
que los niveles de creatinina sérica son más altos en machos jóvenes (2-4 meses) que, en
hembras jóvenes, pero para la edad de 8 meses, estas diferencias desaparecen. La
concentración media normal de creatinina en suero en la rata varía de 0.4 a 1.5 mg/dl. (Goñi
et al., 2011). Debemos tener en cuenta que existe una relación entre urea y creatinina
6.4.3. Alanina aminotransferasa (ALT).
La alanina aminotransferasa se da a altas concentraciones en el hígado, y a dosis
relativamente bajas en otros tejidos. En ratas se emplean extensamente para experimentar
con la hepatotoxicidad de diversas sustancias, y en la rata no varía significativamente con
el sexo ni la edad (Seibel et al., 2010). González y Vicuña (2002), reportan valores
normales de 1422.30 U/L ± 15.90.
6.4.4. Aspartato aminotransferasa (AST).
Aspartato aminotransferasa, es una enzima que mide la acción hepática de
transformar el alimento en energía. Los rangos que reportan González y Vicuña (2002),
son de 1096.00 u/L y también autores como Seibel et al., (2010), indican trabajos con
rangos de la enzima del 100.9 u/L, sin embargo, reportan que estos valores pueden cambiar
según el vaso sanguíneo de donde se tome la muestra. En la tabla 2, se muestran diferencias
entre los parámetros bioquímicos y dos lugares de venopunción el primero la VC y el
segundo la VS.
Marco referencial
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Tabla 2
Valores bioquímicos en ratas y dos lugares diferentes de muestreo
VC (n 5
VS (n 5
Rangos
Normales
Parámetro Unidades Media
± DS
CV Media ±
SDS
Medida ± DS
Alanina U/L 47.6 ± 28.8 46.5 ± 7.1 48.3 ± 8.20
aminotransferasa 13.73
(ALT)
Aspartato U/L 100.9 ± 19.0 99.8 ± 99.8 ± 21.51
aminotransferasa 19.12 21.51
(AST)
Fosfatasa U/L 140 ± 16.7 157 ± 172.9 ± 36.61
alcalina (AP) 23.3 31.9
Creatinina Mmol/L 24.5 ± 17.3 28.6 ± 28.8 ± 4.53
(CREA) 4.25 4.44
Nitrógeno ureico Mmol/L 7.44 ± 16.3 7.23 ± 5.65 ± 0.939
en sangre (BUN) 1.211 1.019
Nota. SDS Desviación estándar; CV coeficiente de variación vena cava (VC); vena sublingual (VS)
Fuente: Seibel et al., (2010).
6.5 Modelo animal en la investigación biomédica
En las ciencias biomédicas, los animales de laboratorio son una herramienta
fundamental para las investigaciones y el entendimiento de las causas, diagnóstico y
tratamiento de enfermedades que afectan al ser humano y a los animales (Fernández, 2007).
El empleo de este tipo de animales favorece el desarrollo de importantes avances en la
prevención y tratamiento de las enfermedades transmisibles y no transmisibles. Zúñiga et
al., (2001), indicaron que uno de los avances importantes gracias a los biomodelos se ha
visto reflejado en el desarrollo de las vacunas de la rabia, viruela, tétanos, difteria y
poliomielitis; el desarrollo de diversos antibióticos, la insulina, y el conocimiento de las
bases genéticas de la herencia. Fernández (2007) también indica la importancia de las
investigaciones para el cáncer, cardiología, enfermedad de Alzheimer y síndrome de
inmunodeficiencia adquirida con biomodelos.
Los animales de experimentación son indispensables para el desarrollo científico a
nivel mundial (Maldonado et al., 2016). Según Fernández (2007), establece el término
reactivo biológico para los animales que se usan como biomodelos en la investigación,
indicando que estos animales poseen unas características ideales, desde el nacimiento como
lo son, animales libres de patógenos, la cual se deberá vigilar, controlar y contrastar,
Marco referencial
18
evitando cualquier contaminación. Morales, (2015) afirma que para realizar la elección y
estudio de investigación del biomodelo animal se debe considerar un aspecto ético
relacionado con el bienestar del animal. Este modelo sirve de prototipo para elaborar una
copia, imitación o representación preliminar del plan objeto de estudio.
Johnson (2012), reporta una selección de estudios en roedores y ratas, indicando
que todas las publicaciones se relacionan entre los años del 2008 y el 2011. Los resultados
indicaron que el ratón es el animal de laboratorio de mayor preferencia; las cepas de ratón
y rata, más utilizadas son los ratones C57BL/6, los ratones BALB/c, las ratas Sprague-
Dawley, y las ratas Wistar. Otras cepas, tales como los ratones A/J, CD1, e ICR, también
han sido utilizadas. La mayoría de estos animales son suministrados por cuatro proveedores
principales: The Jackson Laboratory, Charles River Laboratories, Taconic Farms y
Harlan Laboratories. Los animales mencionados anteriormente son mayormente
utilizados en investigaciones de inmunología, oncología, fisiología, patología y cada vez
más en neurociencia. En la tabla 3 se referencia un resumen de la publicación de
Johnson (2012), que indican las cepas de ratones y ratas utilizadas en las investigaciones,
y el número de publicaciones que se citan dichos biomodelos.
Tabla 3
Resumen de las cepas de ratones y ratas utilizadas en las investigaciones, y el número de
publicaciones que se citan dichos biomodelos.
Animal Cepa Numero
publicaciones
Proveedor
Ratón C57BL/6 133 The Jackson Laboratory
Ratón BALB/C 31 The Jackson Laboratory
Ratón CD-1 9 -
Rata Sprague- Dawley
10 -
Rata Wistar 7 -
Nota. Fuente: Johnson, 2012
Materiales y Métodos
17
7. Materiales y Métodos
Se realizó un diseño descriptivo experimental, llevado a cabo en el Bioterio
accesorio de la Universidad Industrial de Santander de la ciudad de Bucaramanga, ubicada
a 959 metros sobre el nivel del mar, la precipitación media aproximada de 1159 mm y una
humedad relativa de 82%.
Figura 3. Flujograma de la determinación de valores hematológicos y bioquímicos en rata Wistar macho. Fuente Propia
7.1 Materiales
Se utilizaron tubos con anticoagulante (EDTA) para la recolección de muestras de
sangre entera, tubos tapa roja (sin aditivos), Para la rotulación de las muestras se realizó
con un marcador sharpie de color negro de la siguiente manera: El número asignado a la
rata, la caja en la cual está ubicada (Ejemplo: R1 (rata 1) – 11b (caja 11 b), fecha de toma
de la muestra. Se utilizaron láminas portaobjetos y se realizó un deslizamiento con una
lámina extensora en un ángulo de 45 grados para los extendidos de sangre.
Materiales y Métodos
18
Los racks de alojamiento se limpiaban con jabón y desinfectaban con hipoclorito.
El mantenimiento de los biomodelos se llevaba a cabo con pino de patula y alimento Rodent
lab diet 5010. Se utilizaba una báscula para llevar el control del pesaje de los animales.
Se emplearon las instalaciones de la Universidad de Santander y del Laboratorio de
bacteriología y de biología celular para el procesamiento de los parámetros bioquímicos y
hematológicos. De igual forma los animales fueron mantenidos en las instalaciones de la
Universidad industrial de Santander en el Laboratorio central y bioterio accesorio.
7.1.1. Animales.
Se trabajaron 17 ratas Wistar macho de 60gr (±5gr), provenientes del bioterio
accesorio de la Universidad Industrial de Santander (UIS) recibidas a los 22 días de
nacidos.
7.1.2 Mantenimiento de Animales.
Se utilizó un termómetro para medir la temperatura ambiental la cual estaban
expuestos los animales y un hidrómetro para determinar la humedad relativa. El
mantenimiento será en camas de viruta de pino patula (madera sin tratar químicamente, no
toxica, cernida, absorbente, mínimo olor, sin puntas ni objetos extraños o punzantes). La
limpieza y el cambio de camas, agua, y alimento se realizará cada tres días. (Figura 4).
Materiales y Métodos
19
Figura 4. Ratas Wistar macho de la población del estudio, Fuente Propia
7.1.3. Insumos.
Tubos tapa lila (con EDTA) para la recolección de muestra de sangre entera y poder
realizar hemograma, Tubos tapa roja (SIN aditivos) para la recolección de muestra de
sangre entera y poder realizar muestras bioquímicas, laminas portaobjeto y tinción de
wright para realizar los extendidos de sangre periférica. Para realizar el procedimiento de
recolección de sangre se tuvo que anestesiar las ratas con Xilacina al 2% y Ketamina
inyectándose intraperitoneal, para continuar con el procedimiento se tuvo instrumental
estéril (pinzas traumáticas y atramauticas, tijeras metzenbaum, jeringas 2ml) con el fin de
verificar el estado anestésico deseado (profundo), la venodiseccion y posteriormente la
recolección de la muestra y transporte de las mismas en cavas refrigeradas.
Para la realización de los exámenes hematológicos se utilizó un equipo URIT-
3000Vet-Plus, el cual se encontraba en el laboratorio Clínico Neurotrauma de la
Universidad de Santander. Para el análisis de las pruebas bioquímicas equipo URIT-8030
el cual se encontraba en el mismo laboratorio.
7.2 Métodos
7.2.1. Mantenimiento.
Se suministraron 15 gramos animal/día para roedores diet rodent 5010,
autoclavable, hasta llegar a 30 gramos animal/día según su crecimiento. Los animales se
Materiales y Métodos
20
mantuvieron en cubículos de aislamiento (Rack), donde se les controlo la humedad relativa
(70%-75%) y la temperatura ambiental (22-24 grados centígrados) y las camas de estos
animales fueron de viruta de pino patula (madera sin tratar químicamente, no toxica,
cernida, absorbente, mínimo olor, sin puntas ni objetos extraños o punzantes). La limpieza
y el cambio de camas, agua, y alimento se realizó cada tres días. En estos Rack fueron
mantenidos desde los 22 hasta los 109 días de vida, y sometidos a periodos de luz y
oscuridad controlada (12 horas luz/12 horas noche).
7.2.2. Sacrificios
Para los sacrificios se realizó anestesia utilizando ketamina a (90mg/kg) con
Xilacina a (7.5mg/kg) mezclados en una misma jeringa, se realizó la punción
intraperitoneal en el cuadrante inferior izquierdo del abdomen en un ángulo de 45°,
posteriormente se posiciono el animal en el Rack y se dieron 10 minutos para verificar el
plano anestésico por reflejo patelar y corneal. Una vez verificado el plano anestésico
deseado, se procede a realizar una incisión en la región lateral izquierda del cuello para
realizar venodisección de la yugular interna izquierda. Posteriormente se realiza un corte
transversal de la vena y con una micropipeta (DragonLAB) se recolectaron 1000µl de
sangre entera para depositarla en un tubo tapa lila (con EDTA), la cual se homogenizó
suavemente. A continuación, se colecto la mayor cantidad de sangre posible y se almaceno
en un tubo tapa lila (Sin aditivos) y se almacenaron a 4°C en una nevera de icopor portátil
para ser transportadas
7.2.3. Parámetros Hematológicos.
Para evaluar los parámetros hematológicos, hematocrito (Hto), hemoglobina (Hb),
recuento total de Glóbulos rojos (GR), Plaquetas (PLQ) y el recuento diferencial de
Glóbulos Blancos (Segmentados, Linfocitos, Eosinófilos, Monocitos, Basófilos), se
empleó el método automatizado usando para ello el equipo URIT-3000Vet-Plus para estos
análisis. Primero se iniciaba con una gota de sangre que se posicionaba en una lámina
portaobjetos alrededor de 10 microlitros, se ubicaba otra lamina de manera horizontal sobre
la anterior lamina a un ángulo de 45 grados y se deslizaba horizontalmente, se deja secar a
temperatura ambiente y posterior se realiza una tinción de Wright durante 7 minutos para
luego ser observada en microscopia óptica utilizando aceite de inmersión con el objetivo
de 100x para evaluar la cantidad total y diferencial de leucocitos.
El equipo fue manejado de la siguiente forma una vez encendida y calibrada se
posiciona la muestra que antes habría pasado por el agitador mecánico y se da inicio al
examen para que la maquina haga la lectura adecuada.
Materiales y Métodos
21
7.2.4. Parámetros Bioquímicos.
Para la determinación de los parámetros bioquímicos las muestras se recolectaron
en tubo tapa roja (sin aditivos). Posteriormente se centrifugaron a 2500 rpm x 10 min para
la obtención del suero sanguíneo. Los analitos de enzimas Alaninatransaminasa (ALT),
Aspartatoaminotransferasa (AST), Nitrógeno ureico (BUN) y la Creatinina, se
cuantificaron mediante el método automatizado usando el equipo URIT-8030 para
determinar estos los valores. El equipo fue manejado de la siguiente manera inicialmente
la muestra pasa por centrifuga para la recolección de suero y este se posiciona en las copas
para bioquímicas (en la cual se superaba la cantidad mínima), luego se rotulaban las copas
y a su vez en el computador, se seleccionaban las muestras que se iban a realizar y se
procesaban, aproximadamente demoraba unas 4 horas y luego el equipo arrojaba los
resultados del estudio.
7.2.5. Análisis De Los Resultados.
Se utilizó un paquete de datos de Microft Excel, y se utilizó estadística descriptiva,
este tipo de estadística permitió determinar los valores mínimos y máximos de las muestras,
así como los medias y desviación estándar de los analitos estudiados para con ello
determinar un rango de los datos obtenidos y se generó una tabla de análisis distribución
de Frecuencias, que permite observar entre que rangos se encuentra los diferentes
parámetros estudiados; y como a todas las ratas se le determinara los mismos parámetros,
la distribución de frecuencia nos permite la agrupación de datos en categorías excluyentes
que nos indicara el número de observaciones en cada categoría.
7.2.6. Consideraciones Éticas y Bioéticas.
Se solicitó el aval para la utilización del modelo animal Ratas Wistar macho en el
proyecto denominado “Terapia antichagásica in vivo basada en mezclas sinergísticas de
terpenos de aceites esenciales de Lippia alba” para lo cual se tuvo visto bueno del comité
de ética de la Universidad de Santander por medio del acta 001-18 con código del proyecto
PIFE0118493828601EJ. Los animales fueron eutanasiados por un Médico Veterinario
quien se basó en los métodos aceptables estipulados en el capítulo 5 del manual “La
responsabilidad y la ética en el ejercicio de la medicina veterinaria en pequeñas especies
animales” establecido por el consejo profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia de
Colombia (COMVEZCOL, tribunal nacional de ética profesional). Todos, los
procedimientos se llevaron a cabo con el aval del comité de ética de la Universidad
Industrial de Santander y el comité de ética de la Universidad de Santander, debido a que
se encontraba anidado a un proyecto de interés institucional de la Universidad de
Santander.
Resultados
23
8. Resultados
Se analizaron los resultados de valores hematológicos y bioquímicos de rata macho
Wistar. Su manipulación se realizó bajo la supervisión del comité de ética y bioética, bajo
el acompañamiento de personal entrenado. Estos resultados se describen a continuación.
8.1 Rango de valores hematológicos
Los valores hematológicos obtenidos en este estudio se realizaron a partir de un
examen automatizado que dieron como resultados unos valores para determinar el rango
normal en ratas.
8.1.1. Línea roja.
Dentro de los resultados del estudio en la línea roja se obtuvieron valores promedios
de cada variable, se determinó para el hematocrito (hto) el valor de los animales fue 51,64
%, el valor de la hemoglobina (hb) fue 15,0 g/dl, el conteo de glóbulos rojos (GR) fue 9.07 106 /µl y para las plaquetas (PLQ) fue 491,99 106/µl.
En la tabla 4 se presenta de manera resumida los resultados obtenidos de los rangos
mínimos a máximos a partir del estudio con la finalidad de determinar los rangos
hematológicos de la línea roja.
Tabla 4
Parámetros hematológicos fisiológicos en ratas macho Wistar.
HEMATOLÓGICOS RANGO UNIDAD DE MEDIDA
HTO 32,9 – 67,89 %
HB 11,0 – 18,49
g/dl
GR 5,82 – 12,31 106 /µl
PLQ 37 – 886,99 106 /µl
Nota. Abreviaturas: HTO: Hematocrito HB: Hemoglobina GR: Glóbulos rojos PLQ: Plaquetas.
Fuente Propia
8.1.2. Línea blanca.
En los estudios realizados a la línea blanca se obtuvieron resultados de los valores
y un promedio de estas variables, para el conteo de glóbulos blancos fue de 12,02 103 /µl,
y en el conteo diferencial encontramos que el promedio para los granulocitos fue de 15,13
103 /µl, para los monocitos fue de 6,47 µL y el de los linfocitos fue de 78,09 103 /µl.
Resultados
24
En la tabla 5 se presenta de manera resumida los resultados obtenidos de los rangos
mínimos a máximos a partir del estudio con la finalidad de determinar los rangos
hematológicos de la línea blanca.
Tabla 5
Parámetros hematológicos (línea blanca) fisiológicos en ratas macho Wistar.
HEMATOLÓGICOS RANGO UNIDAD DE MEDIDA
GB 1,8 – 21,79 106 /µl
GRAN 8 – 22,99 106 /µl
MON 0 – 17,49 µL
LIM 72 – 84,49 x10ˆ9/L
Nota. Abreviaturas: GB: Glóbulos blancos GRAN: Granulocitos MON: Monocitos LIM:
Linfocitos. Fuente Propia
En la tabla 6 podemos evidenciar todo el paquete celular tanto línea celular roja y
blanca expuesta de manera específica anteriormente. En esta tabla observamos los valores
en rangos y en unidades de medida los diferentes parámetros o indicadores de las líneas
celulares que componen un hemograma.
Tabla 6
Parámetros hematológicos fisiológicos de ratas macho Wistar.
HEMATOLÓGICOS RANGO N° ANIMALES UNIDAD DE
MEDIDA
HTO 32,9 – 67,89 17 % HB 11,0 – 18,49 17 g/dl
GR 5,82 – 12,31 17 106 /µl
GB 1,8 – 21,79 17 106 /µl
PLQ 37- 886,99 17 106 /µl
GRAN 8 – 22,99 17 106 /µl
MON 0 – 17,49 17 µL
LIM 72 – 84,49 17 x10ˆ9/L
Nota. Abreviaturas: HTO: Hematocrito HB: Hemoglobina GR: Glóbulos rojos GB: Glóbulos
blancos PLQ: Plaquetas GRAN: Granulocitos MON: Monocitos LIM: Linfocitos. Fuente Propia
Resultados
25
8.2 Rangos de valores bioquímicos
Los valores bioquímicos obtenidos en este estudio se realizaron a partir de un
examen automatizado que dieron como resultados unos valores para determinar el rango
normal en ratas en las diferentes variables evaluadas.
8.2.1. Función Hepática.
En el estudio realizado, se evaluaron transaminasa (Alanina aminotransferasa y
Aspartato aminotransferasa) que arrojaron rangos de valores fisiológicos, con un promedio
de: ALT 89,43 U/L y AST de 110,69 U/L.
En la tabla 7 se pueden observar de manera resumida los resultados obtenidos, de
los rangos del estudio con la finalidad de determinar los valores bioquímicos, función
hepática.
Tabla 7
Parámetros fisiológicos de transaminasas en ratas macho Wistar.
HEMATOLÓGICOS RANGO UNIDAD DE MEDIDA
ALT 49 – 173,99 U/L
AST 46 – 245,99 U/L
Nota. Abreviaturas: ALT: Alaninotransferasa AST: Aspartatoaminotransferasa. Fuente Propia
8.2.2. Función Renal.
En los estudios nitrógeno ureico en sangre se obtuvo un promedio de 15,70 mg/dL.
Por otra parte, se realizaron mediciones de Urea, donde se determinó un promedio de 30,39
mg/dL. Otro parámetro evaluado dentro de este grupo fue la creatinina, en la cual se
evidenció un promedio de 0,58 mg/dL.
En la tabla 8 se podrá observar de manera resumida los resultados obtenidos, de los rangos del estudio con la finalidad de determinar los valores bioquímicos de función renal.
Resultados
26
Tabla 8
Parámetros bioquímicos fisiológicos de función renal en ratas macho Wistar.
HEMATOLÓGICOS RANGO UNIDAD DE MEDIDA
BUN 0,2 – 44,99 mg/dL
UREA 0,4 – 100,39 mg/dL
Creatinina 0,35 – 0,79 mg/dL
Nota. Abreviaturas: BUN: Nitrógeno ureico en sangre. Fuente Propia
En la tabla 9 podemos encontrar de manera agrupada los marcadores de función
hepática y renal divididos por rango de valores y en unidades de medida en las 17 ratas
macho Wistar evaluadas en el presente estudio.
Tabla 9
Parámetros bioquímicos fisiológicos de ratas macho Wistar.
BIOQUÍMICAS RANGO N° ANIMALES UNIDAD DE
MEDIDA
ALT 49 – 173,99 17 U/L
AST 46 – 245,99 17 U/L
BUN 0,2 – 44,99 17 mg/dL
UREA 0,4 – 100,39 17 mg/dL
Creatinina 0,35 – 0,79 17 mg/dL
Nota. Abreviaturas: AST: Aspartatoaminotransferasa ALT: Alaninoaminotransferasa BUN:
Nitrógeno ureico en sangre. Fuente Propia
Discusión
23
9. Discusión
Como se ha expresado a lo largo de este documento, varios factores pueden
influenciar de manera significativa en los resultados de los valores de las muestras
suministradas, los cuales pueden ser el sexo, la raza, la cepa, la edad, condiciones
ambientales, la toma de la muestra, los equipos utilizados, entre otros (Aleman, 1998;
Balkaya et al., 2001; Marshall et al., 2010). Sin embargo, la medición de los diferentes
componentes sanguíneos como la línea celular (glóbulos blancos y glóbulos rojos), el
hematocrito, la hemoglobina, las plaquetas y marcadores de función orgánica
específicamente renal (creatinina y BUN) y hepática (ALT y AST), en las ratas Wistar es
de suma importancia para los diferentes campos científicos no solo en animales sino
también en humanos, ya que al compartir un ADN del 95% de similitud hace que este tipo
de modelo animal sea de gran valor científico y epidemiológico (Delwatta et al., 2018). En
este sentido, tener conocimiento de estos valores, específicamente los del bioterio de la
universidad industrial de Santander, nos podrá brindar datos más exactos a la hora de
realizar futuras publicaciones científicas a nivel local y departamental.
En la presente investigación, el hematocrito presento valores entre el 32-67% en la
totalidad de la muestra tomada con una media de 51.01%, estos resultados son similares a
lo reportado por Bolant et al., (1989) quien menciona que la dieta presenta una estrecha
relación con este parámetro, secundario al suministro de hierro presente en la alimentación
(Rodent lab 5010), este mineral es de vital importancia para la formación de hemoglobina
quien a su vez está relacionada de manera directa en los valores de hematocrito en sangre
ya que son directamente proporcionales Feldman et al., (2017), esta dieta es fundamental
para regular las condiciones climáticas de luz, humedad y temperatura, todo lo relacionado
con la extubación de los animales, y el medio que rodea a la rata, son variables
fundamentales que pueden generar cambios en el hematocrito (Kampfmann, 2012). Por
otra parte, Arcila et al., (2010), reporta que los niveles de hematocrito de las ratas
estudiadas esta entre el 49-54% con un promedio de 51.3% el cual no difiere de los
resultados mencionados en este estudio explicado esto ya que ambos estudios fueron
realizados al mismo nivel del mar y la misma presión parcial de O2.
Por otra parte, la hemoglobina se encontró en un rango entre 11,0 – 18,49 g/dl con
una media de 15 g/dl. Para la medición de la hemoglobina, los datos obtenidos en la
presente investigación pueden ser comparados por los de Arcila et al., (2010), donde
reportan valor de 15,24 g/dl, y a los reportados por Cepeda y León (2017) que reportan
13,90 g/dl; Sin embargo, difiere a los reportados Sousa (2017) que indico un promedio de
11,51 g/dl esto puede ser explicado por una diferencia de 939 m.s.n.m. ya que a mayor a
altitud mayor es la concentración de hemoglobina.
Los datos obtenidos para el recuento de glóbulos rojos fueron de 5,82 – 12,31 106
/µl y una media de 9,07 106 /µl. Para la variable de recuento de glóbulos rojos se encuentra
Discusión
24
cierta similitud con Arcila et al., (2010), reporta datos del 8,23 106 /µl, puesto que se realizó
en las mismas condiciones ambientales y atmosféricas. Pero se haya gran diferencia con
los resultados de Cepeda y León (2017) los cuales indica que los glóbulos rojos presentaron
un recuento de 6,00 x 106 /µl, ya que este estudio utilizo como muestra ratas hembra por
ende hay menor producción de testosterona que en ratas macho y al tener mayor
concentración de testosterona habrá más formación de glóbulos rojos Feldman et al.,
(2017).
Las plaquetas son partículas celulares esenciales para el normal desarrollo de la
hemostasia, su formación deriva de los megacariocitos, tienen un tamaño de 0,5 a 2,5 µm
y a nivel de microscopía electrónica, la membrana plaquetaria tiene un espesor de 20 nm.
Castex (2017). Para el recuento de las plaquetas, el valor puede variar por la edad y el
género de las ratas. (Arcila et al., 2010). La determinación de los parámetros
hematológicos es importante para la evaluación preclínica sobre todo en ámbitos
quirúrgicos donde niveles bajos aumenta el riesgo de sangrado intraoperatorio y
postoperatorio. El valor de las plaquetas obtenidas en este trabajo 499,9 103/mm3 se pueden
comparar con los valores dados Arcila et al., (2010), reportan valores de 422,9 x 103/mm3,
siendo similar a lo reportado en este trabajo de grado ya que este estudio trabajo con cepa
Wistar. Y se observa valores diferentes por Cepeda y León (2017), donde reportan que el
promedio es de 548.800 x 103/mm3, se puede considerar esta diferencia por las
características genéticas propias de la cepa ya que ellos utilizaron Rattus norvegicus.
Los leucocitos, también llamados también glóbulos o línea blanca, tienen una
función principal la cual es actuar como vigilantes y potentes defensores contra
microorganismos invasores. El tipo más abundante de leucocito es el neutrófilo, introduce
y destruye bacterias y patógenos fúngicos invasores, a través de un proceso
denominado fagocitosis. Otro tipo de patógenos como los parásitos más grandes son
fagocitados por los eosinófilos. Los monocitos que circulan en el torrente sanguíneo se
desplazan hacia los tejidos afectados, donde se diferencian hacia macrófagos y realizan el
proceso de fagocitosis. Los granulocitos, como los basófilos y los mastocitos, liberan
sustancias inflamatorias almacenadas como citoquinas e interleuquinas que atraen
leucocitos adicionales más especializados al sitio de infección y desencadenan una
respuesta inflamatoria con el objetivo de destruir o inactivar agentes externos patógenos
Maya (2008). Se originan en la médula ósea y en el tejido linfático. Son células con núcleo,
mitocondrias y otros orgánulos celulares, siendo capaz de moverse libremente mediante
seudópodos. Su tamaño oscila entre los 8 y 20 μm (Arcila et al., 2010).
El valor de los glóbulos blancos 12,02 103/mm, para la muestra de la línea blanca
en los animales evaluados, se puede indicar que el número total fue similar a lo reportado
por Arcila et al., (2010), donde indicaron que el valor total de glóbulos blancos era de 13,32
103/mm puesto que se realizó en el mismo bioterio y se puede atribuir a las condiciones de
barreras sanitarias de este; ya que el bioterio no cuenta con sistema de filtrado de alta
Discusión
25
eficiencia, ni tratamiento de agua, condiciones que hacen que crezcan cargas
microbiológicas (hongos y bacterias) Malgor (2009); pero fue superior a lo reportado por
Cepeda y León (2017), donde indicaron valores de 7,1 103/mm secundario a que este
estudio se utilizó un fármaco como la ciclofosfamida, el cual es un inmunodepresor. Sin
embargo, los datos obtenidos se encuentran entre los rangos reportados por la literatura, lo
que indica que el sistema inmunológico de las ratas macho se encuentra adecuadas en sus
porcentajes y pueden repercutir en forma positiva en la protección de esta especie, siendo
la primera barrera contra patógenos. Los linfocitos en ratas tienen un mayor porcentaje en
sangre en este estudio dio como resultado (72 – 84-49 µl) mayor con relación a los
granulocitos (8 – 22,99106 /µl), ya que los linfocitos son responsables de la respuesta
inmune, tanto de la mediada por células (respuesta celular), así como también de la mediada
por anticuerpos (respuesta humoral) (Rodríguez, 2013; Cepeda y León 2017)
En este proyecto además se evaluaron los constituyentes bioquímicos de las ratas
específicamente los relacionados con la función hepática y renal ya que son de vital
importancia en el ámbito clínico de las ratas, comenzare mencionando las pruebas de
función hepática las cuales son AST Y ALT enzimas que son producidas a nivel del hígado,
órgano que realiza síntesis y destrucción de hidratos de carbono, lípidos y proteínas,
excreción de productos de desecho a través de la bilis, modulación de la respuesta
inmunitaria entre otras funciones de gran importancia clínica, al presentar niveles elevados
de dichas enzimas nos hace sospechar de daño hepático, estos marcadores son usados en
estudios de hepatotoxicidad de diversas sustancias. Los rangos no varían entre sexo ni edad
de las ratas. (Seibel et al., 2010). Para terminar esta breve introducción que nos ofrece un
panorama sobre la importancia de esto marcadores también se midió los niveles séricos de
BUN y creatinina el primero es una sustancia que proviene del metabolismo de la urea su
principal importancia clínica es establecer la función renal ya que este producto de desecho
se elimina a nivel renal por esto al tener niveles elevados es un signo claro de daño o
sufrimiento renal. La creatinina al igual que el BUN es el resultado del metabolismo de
una sustancia llamada creatina que principalmente se encuentra en el musculo y así es como
se forma la creatinina que también es excretada por vía renal esta es de más importancia
para medir la función renal, concentraciones elevadas en sangre sugieren daño renal, esta
última varían sus rangos dependiendo la edad de las ratas donde a menor edad los valores
tienden a ser menores que en ratas adultas. (Bolant et al., 1989).
Los valores de las enzimas hepática, en donde se evaluaron AST y ALT; el
resultado del rango de ALT fue de 49 – 174,9 U/L y una media de 89,43 U/L, indicando
para el enzima ALT= 41- 83,1 U/L rango reportado por Goñi et al., (2011) este , mientras
que el valor obtenido es superior a lo reportado por de Sousa et al., (2017), donde reportan
la media de 54,16 UI/L; Para el enzima AST el rango obtenido es 110,69 U/L y un rango
de 46 – 245,9 U/L, un valor dentro de nuestro rango reportado por Seibel et al., (2010),
indicando que la enzima presento un promedio de del 100.9 u/L. Sin embargo, el valor se
encuentra encima de los rangos establecidos por la literatura. Nuestro estudio mostro
Discusión
26
diferencias de valores observado por otros autores, diferencias que se pueden atribuir: a la
cepa del animal, metodologías aplicadas en los equipos y dosis de reactivos, así mismo
como el análisis (manual o automatizado) Melo et al., (2012). Factores adicionales
mencionados anteriormente como el sexo, cepa, condiciones ambientales y método de
recolección, son parámetros que pueden variar en los valores bioquímicos Sousa (2017).
Se conoce que la urea y la creatinina son parámetros evaluadores de función renal
son desechos resultantes del metabolismo que se excretan por vía renal y de ese modo se
comparan; Para las mediciones de los valores de urea el promedio de este estudio fue de
30,39 mg/dL, los datos son similares a los reportados por de Sousa et al., (2017), donde
establecen un promedio de 31,76 mg/dL esto puede ser explicado debido a que se utilizaron
ratas de edades y dieta similares una adecuada hidratación y factores ambientales
controlados, pero difieren con los resultados de Lima et al., (2014) que fueron 39,97
mg/dL. Esto puede ser explicado ya que muchos factores como la alimentación,
hidratación, infecciones y genética pueden influenciar de manera significativa los valores
de BUN y creatinina. Los valores obtenidos para creatinina fueron de 0,58 mg/dL, el cual
es similar a los resultados de Sousa et al., (2017) indicando un promedio de 0,76 mg/dL.
Estas enzimas pueden variar por factores como la dieta de rata, almacenamiento de la
muestra, aunque no se presenta variaciones significativas con el sexo de las ratas analizadas
(Seibel et al., 2010). Con esto se puede indicar que los animales del estudio no presentaban
desórdenes hepáticos, y metabólicos que afectaran los perfiles bioquímicos.
Conclusión
26
10. Conclusión
Se identificaron los rangos de parámetros hematológicos y bioquímicos normales
en ratas macho Wistar mantenidas en condiciones específicas de temperatura, humedad,
luminosidad, agua y alimentación del bioterio accesorio de la Universidad Industrial de
Santander.
Referencias bibliográficas
26
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Referencias bibliográficas
30
Apéndices
Apéndice. A Valores hematológicos de los machos del estudio
HTO HB GR PLQ
32,9 11 5,82 54
47,7 15,5 8,88 408
46,5 15,5 8,89 533
43,8 15,7 8,29 522
43,7 14 7,79 390
41,5 13,6 7,86 472
42,6 14,2 8,14 504
58,6 15,8 9,8 577
60,9 15,9 10,16 389
64 17 10,46 457
52,8 14 8,95 586
47,3 13,3 7,94 4,88
51,2 13 8,61 37
55,8 14,8 9,74 456
54,6 13,9 9,48 820
57,1 14,8 9,52 592
66,2 17,2 11,24 871
HTO HB GR PLQ
Media 51,64 15,00 9,07 491,99
D.S. 8,65 1,69 1,37 182,26
Referencias bibliográficas
31
Apéndice. B Valores de la línea blanca de los machos del estudio
GB GRAN MON LIN
1,8 23 3 74
7,4 19 0 81
7,8 16 0 84
9,8 22 3 75
13,2 16 4 80
11 16 6 78
13,9 13 4 83
18,4 12 10 77
12 15 9 74
11,5 18 6 73
12,8 8 7 84
11,4 13 15 72
8,3 13 7 78
18,1 15 6 78
15,7 13 7 78
11,1 12 8 80
13,1 13 7 78
GB GRAN MON LIN
Media 12,02 15,13 6,47 78,09
D.S. 4,11 3,65 3,7 3,58
Referencias bibliográficas
32
Apéndice .C Valores del perfil bioquímico de los Animales del estudio.
ALT AST BUN UREA Creatinina
49 53 15,3 32,7 0,6
142 70 31,1 66,7 0,73
167 67 40,4 86,5 0,65
129 55 36 77 0,73
138 46 22,9 49 0,59
143 57 17,5 37,5 0,71
146 50 14,2 3,5 0,49
55 143 16,4 35,2 0,35
68 138 13,4 28,6 0,43
55 145 14,4 30,8 0,56
62 164 14,2 30,3 0,58
69 176 19,9 42,6 0,61
65 120 0,5 1 0,62
58 106 0,4 0,8 0,66
50 103 0,3 0,6 0,52
73 216 0,2 0,4 0,54
52 122 3,5 7,6 0,42
ALT AST BUN UREA Creatinina
Media 89,43 110,69 15,70 30,39 0,58
D.S 39,41 48,75 10,8 23,45 0,10
