Convalide Di Metodo - 31 Marzo

Il controllo microbiologico dei prodotti nonobbligatoriamente sterili

Esecuzione delle analisi e convalida dei metodisecondo la nuova monografia armonizzata

Gabriella Galimberti Cristina Vigan

Bayer Healthcare Manuf. Intendis Manuf.

Bayer HealthCare

G. Galimberti, Bayer HealthCare Manuf. C. Vigan, Intendis Manufact.

Convalida di metodo (method suitability)

Che cosa richiedevano le Farmacopee precedenti?

European Pharmacopoeia 2.6.12

Se il prodotto da essere analizzato ha attivit antimicrobica, questa deve essere adeguatamenteneutralizzata. (Presente anche in 2.6.13)Se per questo scopo si usano inattivanti, devono essere dimostrate la loro efficacia e la loro nontossicit verso i microorganismi.La scelta di un metodo pu essere basata su fattori come la natura del prodotto ed il numero dimicroorganismi che ci si aspetta di trovare.Ogni metodo scelto deve essere adeguatamente validato.

Effectiveness of culture media and validity of the counting methodColtivare i ceppi separatamente in liquido (elenco ceppi, tempi, temperature, esempi di terreni).Diluire in sol. fisiologica tamponata peptonata fino ad ottenere circa 100 ufc/ml. Per il controllo delmetodo di conteggio usare le sospensioni separatamente in presenza ed in assenza del prodotto.Per la conta in piastra e per la filtrazione si deve ottenere una conta che non differisca di pi di unfattore 5 (= 20-500%) da quella del controllo (inoculo). Per lMPN il valore deve collocarsi entro il95% del limite di confidenza dellinoculo.


USP

La validit dei risultati dei test descritti in questo capitolo si basa sulladeguatezza delladimostrazione che i campioni, nelle condizioni di test, non inibiscono la moltiplicazionedei microorganismi che possono essere presenti.

In preparazione allesecuzione del test, su una base regolare e se le circostanze lorichiedono in seguito, inoculare campioni diluiti del materiale da testare con colture vitaliseparate di S. aureus, E. coli, P. aeruginosa e Salmonella. Ci pu essere fattoaggiungendo 1 ml di una diluizione non inferiore a 103 di una brodo-coltura di 24 h delmicroorganismo alla prima diluizione del campione e seguendo la procedura di test.

La mancata crescita di uno pi microorganismi invalida quella parte di test e necessita diuna modifica alla procedura per aumento del volume di diluente, aggiunta di uno o piagenti inattivanti (ad es. lecitina di soia 0.5%, polisorbato 20 4.0%), entrambi, usando ilmetodo per filtrazione (vedi test di sterilit) se possibile.

Se con tutte le modifiche non comunque possibile ottenere il recupero, si deduce che ilprodotto ha attivit battericida e che, quindi, non pu essere contaminato da quellespecie microbiche. Il monitoraggio deve comunque essere eseguito per valutare qualesia lo spettro di inibizione e lattivit battericida del prodotto.

Prima della conta fare il test per lassenza di propriet antimicrobiche.


USP

Questo capitolo una guida per la convalida dei metodi per i capitoli AntimicrobialEffectiveness Tests, Sterility tests e Microbial limit tests.Sottolinea pi volte limportanza della neutralizzazione delle propriet antimicrobicheeventualmente possedute dal prodotto.

Fattori influentiNatura del microrganismo usato per la prova (specie, ATCC, ambientale)Preparazione dellinoculo (popolazioni microbiche omogenee, preparazione e conservazionestandardizzate)Condizioni del test (riprodurre le condizioni delle analisi - diluenti, temperatura, luce)Condizioni del recupero (terreni, tempi e temperature di incubazione)

Metodi di neutralizzazioneInibizione chimica, diluizione, filtrazione su membrana

Convalida del metodo di neutralizzazioneEfficacia del neutralizzante e sua non tossicit (tre gruppi: prodotto + neutralizzante,diluente + neutralizzante, diluente).


USP

Conteggio su agar: recupero > 70% - almeno tre replichecon pi repliche possibile effettuare una valutazione statistica dei risultati.Conteggio per filtrazione: fa riferimento al Test di sterilit. Linoculo viene posto nel terzorisciacquo. Consigliano di verificare la tossicit della membrana e leventuale aderenza deim.o. sulle pareti del dispositivo di filtrazione.

Recupero di microrganismi stressatiI test prescrivono luso di ceppi ATCC, ma i m.o. eventualmente presenti nei prodotti spessosono stressati, o, al contrario, adattati allambiente ostile. Consigliano di fare alcune proveper verificare la sopravvivenza dei m.o. nel prodotto ed il loro recupero dopo lesposizione in terreni differenti. Accettabilit per terreni alternativi: max. 0.5 log di errore.

Stima del numero di ufcIl numero corretto 25-250 per batteri e lieviti, 8-80 per le muffe (ceppi prescritti da USP).Per conte su membrana e per altri ceppi si dovrebbe calcolare il range con il metodo fornito.Conte molto basse hanno una percentuale di errore elevata (es. per 3 ufc nella dil. 1:10 laconta di 30 ufc ha un errore del 58%.


Che cosa prevede la nuova armonizzata

2.6.12 ()Deve essere stabilit la capacit del test di rilevare microorganismi in presenza delprodotto.Ladeguatezza deve essere confermata se vengono introdotti dei cambiamenti chepossono interferire con lesito del test.

Inoculo e diluizione

Aggiungere al campione preparato e ad un controllo (senza prodotto) un volume disospensione microbica tale da ottenere un inoculo di non pi di 100 ufc. Il volumedellinoculo non deve eccedere l1% del volume del prodotto diluito.Per dimostrare un recupero accettabile necessario utilizzare per il test il fattore didiluizione pi basso possibile. Se ci non fosse possibile a causa dellattivit antimicrobicadel campione o di una scarsa solubilit, si possono usare protocolli differenti. Se non possibile in alcun modo evitare linibizione della crescita microbica da parte del campione,laliquota di sospensione microbica pu essere aggiunta dopo la neutralizzazione,diluizione o filtrazione.


Neutralizzazione/rimozione dellattivit antimicrobicaConfrontare il numero di microorganismi recuperati dal campione con quelli delcontrollo.

Si ha inibizione se il recupero ridotto di un fattore maggiore di 2 (= 50%). Inquesto caso modificare la procedura, ad esempio:

aumentando il volume del diluente o del brodo colturaleaggiungendo un agente neutralizzante specifico o generico (vedi tabella)usando il metodo per filtrazionecombianando i tre metodi sopra descritti.

Se non possibile trovare un adatto metodo di neutralizzazione, si deve assumereche il prodotto abbia attivit microbicida. Questa informazione serve ad indicareche il prodotto non a rischio di contaminazione da parte di quella data speciemicrobica. Comunque sempre possibile che il prodotto inibisca anche altre speciemicrobiche qui non considerate. Perci eseguire il test alla massima diluizionecompatibile con la crescita microbica e con lo specifico criterio di accettazione.


Interpretazione dei risultati

La conta di ogni microorgansimo non deve differire per pi di un fattore 2 da quelladel controllo. Per lMPN il valore deve collocarsi entro il 95% del limite di confidenzadellinoculo.Se i criteri non sono soddisfatti per uno o pi microorganismi per lanalisi bisognausare il metodo e le condizioni di test che pi si avvicinano ai criteri.

Messa a punto del metodo

Nelle precedenti Farmacopee questa parte era inclusa in quella dellanalisi.Generalmente per la messa a punto del metodo si usa 1 g diluito 1:10.Diluenti suggeriti: soluzione fisiologica tamponata peptonata pH 7.0, tampone fosfatopH 7.2, TSB. Se necessario correggere il pH in modo che si collochi tra 6 e 8.Per i prodotti insolubili in acqua aggiungere dei tensioattivi

Attenzione allindice HLB! (Hydrophylic/Lypophylic Balance).10: idrofilo


2.6.13 ()

Se il prodotto da essere esaminato possiede attivit antimicrobica, questa deveessere se possibile rimossa o neutralizzata come descritto al capitolo 2.6.12().

Se sono utilizzati dei tensioattivi per la preparazione del campione, deve esseredimostrata la loro assenza di tossicit verso i microorganismi e la loro compatibilitcon eventuali inattivanti usati, come descritto in 2.6.12 ().


Agenti inattivanti

Ioni calcio o magnesioSodio EDTA

TiosolfatoMercuriali, alogeni, aldeidi

TioglicolatoMercuriali

Polisorbato (Tween)Composti dellammonio quaternario,iodio, parabeni

LecitinaComposti dellammonio quaternario,parabeni, bi-guanidi

GlicinaAldeidi

DiluizioneFenolici, alcoli, aldeidi, sorbato

Sodio idrogeno solfito (sodio bisolfito)Glutaraldeide, mercuriali

Metodo - NeutralizzanteSostanza inibente


Inoculation and dilution

Q: What is the sufficient volume of the microbial suspension of notmore than 100 CFU? What does 100 CFU refer to?

A: The micro-organisms are to be added to the diluted/suspendedproduct at the end of the preparation o after the neutralisation (inthe last fraction of the rinsing fluid in the case of filtration orsimultaneously with the preparation in/on the Petri dish in thecase of the plate count method). The 100 CFU refers to theinoculum (e.g. what will be on the filter or on the plate).

Q: If I am going to validate a TAMC: should I use both C. albicansand A. niger for my qualification? And if I am validating for yeastand mould count should both C. albicans and A. niger be usedfor the qualification?

A: Yeast and moulds must be recovered on both CSA and SDA.Yes, you must validate with C. albicans and A. niger.


Neutralisation/removal of antimicrobial activity

Q: Why is it necessary to demonstrate the efficacy of neutralisingagents? Has this to be performed by comparison of buffersolutions with and without neutralising agents? From our point ofview it is not necessary, if recovery of micro-organisms in thepresence of product is given. It is very time consuming to testdifferent combinations of neutralising agents prior to thevalidation test.

A: It is good practice to test the efficacy and the absence of toxicityof the neutralising agent. Effectiveness is checked byperforming incubation of the product with and withoutneutralising agent, absence of toxicity is performed on a blankwith neutraliser and without product. This can be done inparallel.


Suitability of the test method

Q: Does it mean that for each test strain, individual suitability testshave to be performed, or is it possible to use a mixed inoculum ofall 4 strains?

A: The method states that the strains are inoculated individually. Nomixed inoculum is permitted.

Q: Test strains must be inoculated individually using a number ofmicro-organisms equivalent to not more than 100 CFU, could youclarify if this means that only the specific microorganism underdetection in the test method is inoculated into the growth mediumor if each of the 4 micro-organisms are added individually to thegrowth medium for each of the specific test methods?

A: It is only the specified micro-organism under detection which isinoculated.


Convalida di metodo

APPROCCIO ALLACONVALIDA / SUITABILITY DEL METODO


In microbiologia Convalida del metodo?Chiarimento .

I capitoli della USP con il numero fino a (compendialchapters) per definizione sono validati. Quindi, in realt, noi nonpossiamo validare i metodi, ma solo dimostrare la correttezza delrecupero (method suitability).

Quindi, lo scopo di uno studio di correttezza del metodo (methodsuitability) in microbiologia non quello di validare il saggio, ma didimostrare che il nostro metodo analitico corretto, o adatto, ovveroche lo schema utilizzato permetta il recupero dei microorganismivivi, ovvero ancora che la crescita dei microorganismi non sia inibitadallattivit antimicrobicaresidua del prodotto.

Pertanto: Suitability del metodo


Da Allegato 15 al Vol. IV delle EU GMP:

Tutte le convalide dovrebbero essere pianificate; gli elementi chiave di un programma di Convalidadovrebbero essere chiaramente definiti edocumentati in un Validation Master Plan odocumento equivalente

Pianificazione mediante: VMP


Definizione delValidation Master Plan (VMP)

Documento di riferimento: definisce lo scopo le attivit nelle varie fasi della Convalida la loro sequenza cronologica le responsabilit il team la formazione del personale e le procedure

necessariedocumentazione


Attivit descritte nel VMP:

FASE I: Convalida terreni Terreni di coltura oggetto di convalida Scelta dei fornitori dei terreni di coltura Test Conformit dei terreni di coltura

FASE II: Convalida/Suitability dei metodi dei prodotti finiti delle materie prime dei materiali confezionamento primario


Convalida terreni (FASE I)1) Terreni di coltura oggetto di convalida:

E.coli ATCC 8739S.aureus ATCC 6358S.aureus ATCC 6358MSA

E.coli ATCC 8739/P.aeruginosa ATCC 9027CTA

/E.coli ATCC 8739S. typhimurium ATCC 14028XLDA

S.aureus ATCC 6538/S. typhimurium ATCC 14028RVSV

/E.coli ATCC 8739E.coli ATCC 8739MCA

S.aureus ATCC 6538/E.coli ATCC 8739MCB

/E.coli ATCC 8739P.aeruginosa ATCC 9027

E.coli ATCC 8739P.aeruginosa ATCC 9027

VRBGA

S.aureus ATCC 6538/E.coli ATCC 8739P.aeruginosa ATCC 9027

EEB

ProprietInibitorie

ProprietIndicative

ProprietCrescita

Terrenocoltura


2) Scelta dei fornitori dei terreni di coltura:

selezione di due fornitori per ciascunterreno sulla base della corrispondenzadella composizione riportata in Ph. Eur

Convalida terreni(FASE I)


Esempio:

7,1 0,2pH7,1 0,2pH7,1 0,2pH

1000 mlPurified Water1000 mlPurified Water1000 mlPurified Water

13,5 gAgar13,5 gAgar-agar13,5 gAgar

1 mgCrystal violet1 mgCrystal violet1 mgCrystal violet

30 mgNeutral red30 mgNeutral red30 mgNeutral red

1,5 gBile salt1,5 gBile salt mixture1,5 gBile salt

10,0 gLactose10,0 gLactose10,0 gLactosemonohydrate

5,0 gSodium chloride5,0 gSodium chloride5,0 gSodium chloride

3,0 gPeptone (meat andcasein)

3,0 gPeptone frommeat

3,0 gPeptone (meatand casein)

17,0 gPancreatic digest ofgelatin

17,0 gPeptone fromcasein)

17,0 gPancreatic digestof gelatin

Fornitore 2Fornitore 1Richieste Ph Eur

MacConkey Agar


Convalida dei terreni( FASE I)

3) Test Conformit dei terreni di coltura:valutazione delle propriet

crescita, indicative e di inibizioneInoculo100 UFC Inoculo100 UFC

Ripetizione test su 3 lotti per ciascun terrenodi coltura


RISULTATI(FASE I)

Tutti i terreni selezionati presentanobuone propriet di crescita,

indicative e di inibizione ad eccezione diXLDA e MSA

E.Coli (germeindicativo) - noncresce su XLDA

E.Coli (germe inibitorio)- parzialmente inibitosu MSA

PROBLEMI EMERSI


Convalida del metodo(FASE II)

1. Convalida /Suitabilitydei metodi per lanalisi microbiologica

dei prodotti finiti delle materie prime dei materiali di confezionamento primario

Ripetizione su 3 lotti


Convalida metodo(FASE II)

Operazioni preliminari: Verifica del pH presenza/assenza di attivit antimicrobica Neutralizzazione dellattivit antimicrobica Diluizione Agenti inattivanti Filtrazione su membrana

Scelta del metodo


Total aerobic microrganism count (TAMC) /Total yeasts and moulds count (TYMC)

3-5 gg

30-35 C

CSA

1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml

5-7 gg

20-25 CSABA

CSA

3-5 gg

30-35 C

1ml1ml1ml1ml

10ml

90 ml NAPP 10 gr prodotto

10 - 100 UFC/piastra

E. coli

103 -104

UFC/ml

B. subtilis

103 -104

UFC/ml

S. aureus

103 -104

UFC/ml

C. albicans

103 -104

UFC/ml

A. niger

103 -104

UFC/ml

P. aeruginosa

103 -104

UFC/ml

0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml

Il volumedellinoculo nondeve eccedere l1%del volume delprodotto diluito.


Ricerca microrganismi specificiBile-Tolerant, Gram-Negative Bacteria (Absence/Presence)

90 ml CSB

10 gr prodotto 10 gr prodotto

90 ml CSB

E. coli

10-100 UFC/ml

1 mlP. aeruginosa

10-100 UFC/ml

1 ml

Subcoltura Subcoltura

VRBGA

18-24 h 30-35 C 18-24 h 30-35 C

EEB da 100 ml

24-48 h 30-35 C

10 ml

24-48 h 30-35 C

EEB da 100ml

10 ml

VRBGA


Ricerca Microrganismi specifici

E. coli

18-72 h

30-35 C

Subcoltura

MCA

24-48 h

42-44 C1 ml

100ml MCB

18-24h

30-35CE. coli

10-100 UFC/ml

1 ml

90 ml NAPP

10 gr

prodotto

10 ml

90 ml CSB


Ricerca microrganismi specificiP. aeruginosa, S. aureus

Subcoltura18-72 h

30-35 CCTA

Subcoltura18-72 h

30-35 CMSA

18-24h

30-35C

18-24h

30-35C

P. aeruginosa

10-100 UFC/ml

S. aureus

10-100 UFC/ml

1 ml

1 ml

90 ml NAPP

10 gr

prodotto

90 ml CSB

90 ml CSB

10 ml


Ricerca microrganismi specificiS. typhimurium

Trasferimento diretto con pre-arricchimento

90 ml CSB

10 gr

prodotto

0,1 ml

10 ml RVSB

18-24h

30-35C18-48 h

30-35 C

Subcoltura

XLDA

18-24h

30-35CS. typhimurium

10-100 UFC/ml

1 ml


Valutazione e interpretazione deiRISULTATI

Conta totaleConfrontare il numero di microrganismi recuperati dalcampione con quelli del controllo e calcolare il fattore di Recovery:La conta di ogni microorgansimo non deve differire per pi di unfattore 2 da quella del controllo, questo significa che,Per es. con un inoculo di 100 CFU, sono accettabili conteda 100/2 = 50 CFU a 100 x 2 = 200 CFU con un FR tra 2 e 0.5 calcolatocome CFU controllo

CFU campione

Microrganismi specificiCrescita


11,1 - 0,760/6535/4342/4544/45A. niger ATCC 16404

0,911,130/3636/3640/3836/38A. niger ATCC 16404

Microrganismi specifici : crescita

1 - 0,80,939/4242/4432/3837/36C. albicans ATCC 10231

TYMC (SABA)

0,90,81,127/3336/4832/4030/40C. albicans ATCC 10231

1,1 - 1,21,150/5144/5147/5252/62B. subtilis ATCC 6633

1,10,9 - 133/3537/3835/3039/31E. coli ATCC 8739

1 - 0,90,998/10097/9986/9689/95P. aeruginosa ATCC 9027

10,9 - 162/6671/7562/7065/70S. aureus ATCC 6538

Lotto 3Lotto 2Lotto 1TAMC (CSA )

Fattorerecovery

Test in PRESENZA diprodotto

Test inASSENZAdi prodotto

Microrg. Tests

Esempio Prodotto 1 ( assenza di inibizione)


Esempio Prodotto 2 (antibiotico)

11,10,939/4430/3936/3737/39A. niger ATCC 16404

Fattorerecovery

Test in PRESENZA diprodotto

Test inASSENZAdi prodotto

Microrg. Tests

Microrganismi specifici : nessuna crescita

0,80,9 - 150/4650/5857/6046/50C. albicans ATCC 10231

TYMC (SABA)

0,80,9 - 132/3434/3640/4136/30A. niger ATCC 16404

1,21,2 - 125/3520/2826/2327/33C. albicans ATCC 10231

00052/62B. subtilis ATCC 6633

00039/31E. coli ATCC 8739

00089/95P. aeruginosa ATCC 9027

00065/70S. aureus ATCC 6538

Lotto 3Lotto 2Lotto 1TAMC (CSA)


ConclusioniSulla base dei dati di Suitability:

Stesura metodi relativi a ciascun prodotto per utilizzo del test diroutine

In caso di recovery > 2 per un dato microrganismo o Nessuna crescita per imicrorganismi specificiSe non stato possibile trovare un adatto metodo di neutralizzazione, si deve assumere che ilprodotto abbia attivit antimicrobica. Questa informazione serve ad indicare che il prodotto non a rischio di contaminazione da parte di quella data specie microbica. Comunque semprepossibile che il prodotto inibisca anche altre specie microbiche qui non considerate.

Per la conta microbica totale- eseguire test alla massima diluizione compatibile con il criterio di

accettazionePer la ricerca di microrganismi specifici

- Non eseguire il test - Eseguire comunque il test allo scopodi rilevare gli eventuali ceppi resistenti


Messa a punto del metodo

Valutare le caratteristiche del prodotto:

liquido, solido, acquoso, grasso, idrosolubile, pH, Aw,filtrabilit, pericolosit, eccStudi di ricerca e sviluppo sulla molecola?

Prove di preparazione del campione in modo non sterile.


Water activity

Indice della presenza di acqua realmente utilizzabile daparte dei m.o.

Rapporto tra la pressione di vapore acqueo del prodotto ela pressione di vapore dellacqua pura aw= P/Po. uguale a 1/100 della RH generata dal campione in unsistema chiuso.

P. aeruginosa: 0.97 Halobacterium halobium: 0.75

S. aureus: 0.86 Rhodotorula mucilaginosa: 0.92

Aspergillus niger: 0.77 Zygosaccharomices rouxii: 0.62


Esempio 1: materia prima (antimicotico)

Problema: difficilmente solubile in acqua

1a soluzione del problema:

Preparazione del prodotto: 2 g + 10 g PEG 400 monoricinoleato + TSB(dil. 1:300). Non si scioglie.


Preparazione del prodotto: 10 g + 15 g di sol. 0.1% di sodio tiosolfato+ sol. fis. tamp. pept. (dil. 1:10) sciolto completamente.


Esempio 2: materia prima in polvere (inibente)

Problema: difficilmente solubile in acqua

1 tentativo:

Diluizione 1:10 con TSB + Tween 80: non si scioglie.

2 tentativo:

Il pH acido (3.44) tentiamo di correggerlo anche pereliminare linibizione 7 ml di NaOH 1N: pH 7.46Si scioglie completamente.


Metodo degli aloni

(Par-Test, test di Kirby Bauer)

Rapida valutazione della presenza di attivit inibitoria

Risultati non precisi, ma indicativi.


Accettabilit del recupero

La correttezza dei limiti 70%, 50%, 70-130% per ilrecupero sempre un acceso dibattito.

Sutton ha dimostrato con studi pratici e statistici che se itecnici hanno una buona manualit una variabilit entroil 75% ampiamente ottenibile. Oltre il 130% puavere senso se indice di un metodo migliore.

Comunque dopo lunghe discussioni si scritto il 50%perch sembra (senza prove scientifiche) piraggiungibile da tutti. Questo, per, non vuol dire chesia valido per tutti i test (ad es. se non prescritto alcunlimite).


Qualche consiglio:

Attenzione agli agenti inattivanti ed emulsionanti:spesso creano pi danno che beneficio (es. il sodiotiosolfato, il PEG 400 monoricinoleato, il TTC sono tossiciverso i Gram +).

Attenzione ai tempi di crescita dei m.o. nella fertilitdei terreni selettivi (coincide con quelli della convalida?).

Attenzione al gap tra convalida ed analisi di routine(non sempre il caso di fare i primi della classe).


Qualche dubbio:

? Qual il punto esatto in cui aggiungere linoculo?? Per i test preliminari posso usare un campione 2?


Proposte alternative:Il lavoro di convalida lungo ed oneroso e se il metodo vaanche registrato...

Insieme al metodo base si pu convalidare qualchealternativa. Ad esempio:

Permanenza dei brodi per le ricerche per pi gg in

incubatore.

Utilizzo di metodi differenti (pi di un terreno per le

ricerche o per le conte, pi di un metodo di

conteggio). Skip testing (ICH Q6A).


Esempio 1: prodotto topico per lacnePrincipio attivo inibente (soprattutto verso i Gram +) epH basso (4.8)


Preparazione del prodotto: dil. 1:20 in TSB con inattivanti*

Ricerche: TSB con inattivanti dil. 1:200 (= 2 litri!)

LB con inattivanti dil. 1:300 (= 3 litri!).


Preparazione del prodotto: 10 g + 30 g di sol. fis. tamp. pept.,

correzione del pH con 4 ml di NaOH 4N, dil. 1:10.

Ricerche: 10 ml in TSB.

* 3% Tween 80, 0.5% sodio tiosolfato, 0.3% lecitina.


Esempio 2: detergente per lacnePrincipio attivo inibente (soprattutto verso i Gram +)

Problema: S. aureus non cresce.

Conta:Prodotto diluito 1:10 + 103 e 104 cellule: nullaProdotto diluito 1:100 + 103 e 104 cellule: crescita scarsa (


Esempio 3: prodotto solido antinfiammatorio

Principio attivo inibente (soprattutto verso i Gram +)

Preparazione del campione: dil. 1:10 con sol. fis. tamp. pept.

Prova con Par test: dil. 1:10 inibente, dil. 1:100 no.

Conta:Prodotto diluito 1:10 + ceppi: recupero nullo dei Gram +Prodotto diluito 1:100 + ceppi: OK.

Ricerca:

Nessuna inibizione

Conclusione:

Il problema si risolto con la diluizione.


Esempio 4: antisettico ad uso vaginale

Problema: inibizione verso S. aureusMetodo di conta scelto: filtrazione su membrana

Risultati delle varie prove:

Soluzione: uso di un inattivante (Tween 80).

868110500 ml5 aliquote da 100ml



Recoveryriferimento

RecoveryPT +

Tween 1%

RecoveryPT

Totalelavaggio

N LAVAGGI


Bibliografia - 1

HABERER K.: New Microbiological Chapters of the European Pharmacopoeia - InternationallyHarmonized Methods for Microbiological Examination of Non-sterile Products. Presentata al 2simposio AFI/BioMerieux Linnovazione tecnologica nei controlli microbiologici delle produzionifarmaceutiche - Firenze 23.11.06.S. SUTTON: Microbial Recovery Studies - 50% or 70%?. Pharmaceutical Microbiology ForumNewsletter - Vol. 13 (9).Gruppo di Studio di Microbiologia dellA.F.I: Metodi di controllo della contaminazione microbica: verifiche, valutazioni e suggerimenti). Poster presentato al Simposio A.F.I. del 1992 a Riva delGarda.Gruppo di Studio di Microbiologia dellA.F.I: Lanalisi microbiologica dei prodotti farmaceutici non obbligatoriamente sterili: corretto approccio per la definizione e la convalida dei metodi. Poster presentato al Simposio A.F.I. del 1995 a Riccione.Gruppo di Studio di Microbiologia dellA.F.I: Contributo alla convalida dei metodi per il controllo microbiologico (Prodotti farmaceutici non obbligatoriamente sterili). Poster presentato alla conferenza I rischi microbiologici del 2000 nel settore alimentare, organizzata da Oxoid a Bologna nel1995.Gruppo di Studio di Microbiologia dellA.F.I: Contribution to the validation of microbiologicalanalysis methods. Control of non-sterile pharmaceutical products. S.T.P. Pharma pratiques 7 (1) 40-44 1997.


Bibliografia - 2

FARMACOPEA UFFICIALE DELLA REPUBBLICA ITALIANA XII ed. 2008 Requisiti microbiologicidelle preparazioni farmaceutiche. - I suppl. 1998 Requisiti microbiologici delle preparazionifarmaceutiche.EUROPEAN PHARMACOPOEIA 6.5 - 2.6.12. Microbiological examination of non-sterile products:total viable aerobic count. - 2.6.13 Microbiological examination of non-sterile products: test forspecified micro-organisms. - 5.1.4. Microbiological quality of pharmaceutical preparations. - 5.1.6-Alternative methods for control of microbiological quality.THE UNITED STATES PHARMACOPOEIA 32 - Microbial limit tests. - Microbiologicalexamination of non-sterile products: microbial enumeration tests. - Microbiologicalexamination of non-sterile products: test for specified micro-organisms. - Microbiologicalquality of pharmaceutical preparations. - Validation of microbial recovery formpharmacopoeial articles.W. MANU-TAWIAH, B.A. BRESCIA, E.R. MONTGOMERY: Setting threshold limits for thesignificance of objectionable microorganisms in oral pharmaceutical products. J. Pharm Sci.Technol. 2001 May-Jun; 55(3):171-5.ICH - Specifications: test procedures and acceptance criteria for new drug substances and newdrug products. Q6A


Bibliografia - 3

http://pharmtech.findpharma.com/ The Harmonization of the Microbial LimitsTests. Dec 2, 2006 By S. Sutton - Pharmaceutical Technology.European Directorate for the Quality of Medicines. Help desk:http://www.pheur.org/site/page_630.php?rubrique=446US Food and Drug Administration, Bacterial Analytical Manual Online.http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-toc.html.US Food and Drug Administration, Guide to Inspections of MicrobiologicalPharmaceutical Quality Control Laboratories. 7/93.www.fda.gov/ora/inspect_ref/igs/micro.html.

http://www.emea.europa.eu/inspections/qwp/q02.htmhttp://www.edqm.eu/site/Homepage-628.htmlhttp://www.usp.org/http://www.iss.it/farc/index.php?lang=1http://www.socgenmicrobiol.org.uk/http://www.microbiologyforum.org/news.htmhttp://www.pharmig.org.uk/http://www.doctorfungus.org/index.htmhttp://www.fda.gov/CDER/comment.htmhttp://pharmtech.findpharma.com/

Convalide Di Metodo - 31 Marzo

Documents

Transcript of Convalide Di Metodo - 31 Marzo