Lezione di Anatomia Patologica

BIOLOGIA MOLECOLARE

NEL LINFONODO SENTINELLA

Luigia Macrì

Università degli Studi di Torino

AO-U San Giovanni Battista

di Torino

Linfonodo

Sentinella

1. Cos’è il linfonodo sentinella?

Il Linfonodo Sentinella è il

primo linfonodo che riceve la

linfa da un tumore ed è quello

che più probabilmente viene

colonizzato dalle cellule

tumorali, dando origine alle

“METASTASI” linfonodali.

Sentinella

2. Chi esamina il linfonodo sentinella?

L’ANATOMO PATOLOGO è il

medico che con un esame al

microscopio valuta la presenza

di metastasi nel Linfonodo

Sentinella.

3. Quando può essere esaminato?

La diagnosi al microscopio sul Linfonodo Sentinella, per

definire se ci sono o meno metastasi, viene effettuata

dall’anatomo patologo dopo

o durante l’intervento.

In questo caso si parla di esame intraoperatorio .

EE

ICC

2 mm

2 mm

LINFONODO SENTINELLA

FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA

RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE

UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA

J Clin Pathol 2004;57:695–701.

Le procedure anatomo-patologiche per la valutazione del LS

mancano di standardizzazione

• riduzione macroscopica

• utilizzo dell’esame al congelatore

• numero di sezioni istologiche da esaminare

• utilizzo di colorazioni ancillari

• stesura del referto

Based on AJCC/UICC TNM, 7th edition

Protocol web posting date: October 2009

(sn): Valutato il solo linfonodo(i) sentinella. Se vengono asportati 6 o più linfonodi sentinella e/o

linfonodi non sentinella, questa sigla non dovrebbe essere utilizzata.

pN0Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, non ulteriori

valutazioni per cellule tumorali isolate.

pN0(i–) Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con

STAGING

nella VALUTAZIONE CLASSICA DEL

LINFONODO SENTINELLA

pN1

pN1 a: METASTASI interessanti da1 a 3 linfonodi ascellari, con almeno

una metastasi più grande di 2.0 mm

pN1mi: MICROMETASTASI (più grandi di 0.2 mm e/o composte da più

di 200 cellule, ma nessuna metastasi più grande di 2.0 mm).

pN0(i–) Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con

valutazione immunoistochimica negativa

pN0(i+) Gruppi di cellule maligne, o singole cellule, in linfonodo(i)

regionale(i) non più grandi di 0.2 mm, o meno di 200 cellule in una

singola sezione istologica (evidenziate da colorazione E/E o ICC, incluse

le cellule tumorali isolate)

LINFONODO SENTINELLA

FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA

RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE

UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA

4. Nuove tecnologie

In questo caso l’anatomo patologo non cerca più le cellule tumorali al

microscopio, ma esegue indagini di biologia molecolare che permettono

valutare la presenza di molecole di RNA proprie delle cellule di tumori della

mammella (proteina CK19) nel Linfonodo Sentinella.

In particolare la metodica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA)

prevede l’uso di uno strumento automatizzato e di prodotti dedicati (kit).

OSNA OSNA OneOne StepStep NucleicNucleic Acid Acid AmplificationAmplification

� PROCEDURA AUTOMATIZZATA DI AMPLIFICAZIONE DEGLI

ACIDI NUCLEICI

� VERIFICA LA PRESENZA DEL GENE DELLA CK19 NEL

TESSUTO LINFONODALETESSUTO LINFONODALE

�CONSENTE UNA DIAGNOSI MOLECOLARE DEL

LINFONODO SENTINELLA INTRAOPERATORIA DEFINITIVA

� FORNISCE UN RISULTATO DI NEGATIVO, MICROMETASTASI

O MACROMETASTASI

++Macro-Metastasi

mRNA della CK19Dimensioni delle metastasi

La diagnosi OSNA

SENTINELLA

CLASSICOSENTINELLA

OSNA

++

+

-

Macro-Metastasi

Micro-Metastasi

ITC / background

250 copie

mRNA/µL – CK19

(5.0 x 106)

5.000 copie

mRNA/µL – CK19

(1.0 x 108)

Diagnosi di carcinoma

mammarioValutazione ECOGRAFICA dei linfonodi

LNF non sospetti LNF sospetti

Agoaspirato

LINFONODO SENTINELLA

FLOW-CHART DIAGNOSTICA - MOLINETTE

positivonegativo

dissezione ascellare

Metodica istologica standard

Valutazione ICC della positività per CK-19

(sul tumore primitivo)

CK-19 POSITIVO CK-19 NEGATIVO

OSNA + Imprint

EE

ICC

2 mm

2 mm

IMPRINT

DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN: DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN: utilizzo dell’intero linfonodoutilizzo dell’intero linfonodo

molecolare

morfologica

OSNA

IMPRINT

Interpretazione e diagnosi

Patologo

molecolare

OSNA 110 casi

Metodo Tradizionale

169 casi

Macrometastasi 11% 20 %

2010: eseguiti 279 LS presso Breast Unit Molinette

Macrometastasi 11% 20 %

Micrometastasi 18% 8%

ITC71% 73%

Negativo

P<0.01

Macrometastasi OSNAMetodo

Tradizionale

Cavo ascellare positivo

42% 45%

Micrometastasi OSNA Metodo

Tradizionale

Cavo ascellare positivo

22% 22%

GRAZIE PER L’ATTENZIONEGRAZIE PER L’ATTENZIONE