Allergeni alimentari: impiego di metodi analitici validati per lindagine in Regione Piemonte nel...

Allergeni alimentari: impiego di metodi analitici validati per

l’indagine in Regione Piemonte nel periodo 2007- 2009

Daniela Manila BianchiIZS Piemonte Liguria e Valle d’AostaS.C. Controllo Alimenti e Igiene delle Produzioni

ISTITUTO ZOOPROFILATTICO SPERIMENTALE DEL PIEMONTE LIGURIA E VALLE D’AOSTA

Manila Bianchi, 4 giugno 2010

Di cosa parliamo …

•Allergeni e allergie

•Normativa allergeni alimentari

•Validazione di metodi di laboratorio

•Piano di monitoraggio Regione Piemonte


ALLERGIE ALIMENTARI

Patogenesi scatenanti una reazione immunologica

INTOLLERANZE ALIMENTARI

Reazione di ipersensibilità di natura non allergica

Allergeni e allergie



Allergeni e allergie


Il 90% delle allergie è attribuito a: • latte vaccino, • uova, • crostacei, • pesce, • arachidi, • soia, • frutta con guscio, • cereali

(Scampisi, 2003),(Moneret, 2005).

Risulta allergico il 2% degli adultil’8% dei bambini

Sicherer et al., 2003


Allerte RASFF 2007Microrganismi pot patogeniAlergeniBiocontaminantiBiotossineEtichettaturaAdditiviCorpi estraneiOGMMetalli pesantiContaminanti industrialiContaminazione microbicaMigrazioneMicotossineAspetti organoletticiParassitiResidui PesticidiResidui di Med VetAltro

39 allerte EU



Allerte RASFF 2008



Paese di origine dell’allerta – RASFF 2008



8 Cereali e prodotti da forno

8 Preparazioni a base di cacao, caffè e te

4 Pasticceria

3 Alimenti dietetici e supplementi

1 Prodotti della pesca

1 Frutta e verdure

1 Erbe e spezie

5 Carne diversa da pollame

2 Latte e prodotti lattiero caseari

2 Bevande non alcoliche

1 Frutta a guscio

6 Piatti pronti e snack

5 Zuppe, brodi e salse

1 Altro

48 TOTALE

Allerte allergeni:Alimenti coinvoltiRASFF, 2008




Normativa allergeni

• Dir 89/395/CEE • Dir 89/396/CEE• Dir 2000/13/CE• Dir 2003/89/CE• Dir 2006/142/CE• Dir 2007/68/CE

• D.Lvo 109/1992• D.Lvo 181/2003• D.Lvo 114/2006• D.Lvo 178/2007• Reg CE 415/2009

http://www.autoaz.it/images/rubriche/10/immagine/normativa.jpg



E’ sancito l’obbligo per i produttori di dichiarare in etichetta tutti gli ingredienti e le sostanze da loro derivate (Tabella 1) abolendo la regola del 25% prevista dalla vecchia Direttiva 2000/13/CE (D. Lgs. N. 109 del 27/01/1992 a livello nazionale), secondo la quale era possibile non indicare i componenti degli ingredienti composti che rappresentavano meno del 25% del prodotto finito e la possibilità di indicare uno degli ingredienti solo con il nome della categoria di appartenenza.




• Cereali contenenti glutine (cioè frumento, segale, orzo, avena, farro, kamut o i loro ceppi ibridati) e prodotti derivati

• Crostacei e prodotti derivati• Uova e prodotti derivati

• Pesce e prodotti derivati

• Arachidi e prodotti derivati

• Soia e prodotti derivati

• Latte e prodotti derivati (compreso il lattosio)

• Frutta a guscio cioè mandorle,nocciole , noci comuni , noci di acagiù, noci pecan noci del Brasile, pistacchi, noci del Queensland e prodotti derivati

• Sedano e prodotti derivati

• Senape e prodotti derivati

• Semi di sesamo e prodotti derivati

• Anidride solforosa e solfiti in concentrazioni superiori a 10 mg/kg o 10 mg/l espressi come SO2.»

Allergeni alimentari che devono essere dichiarati ove presenti (Sezione III, Allegato I della Direttiva 2003/89/CE, previsto dall’art. 8 comma 1)




Laboratori ufficiali1. L'autorità competente designa i laboratori che possono eseguire

l'analisi dei campioni prelevati durante i controlli ufficiali.2. Le autorità competenti, tuttavia, possono designare soltanto i

laboratori che operano, sono valutati e accreditati conformemente alle seguenti norme europee:

• EN ISO/IEC 17025 su "Criteri generali sulla competenza dei laboratori di prova e di taratura";

• EN 45002 su "Criteri generali per la valutazione dei laboratori di prova";

• EN 45003 su "Sistemi di accreditamento dei laboratori di taratura e di prova – requisiti generali per il funzionamento e il riconoscimento"

Reg. 882/2004 art 12

3. L'accreditamento e la valutazione dei laboratori di prova possono riguardare singole prove o gruppi di prove.4. L'autorità competente può annullare la designazione di cui al paragrafo 1 se le condizioni non sono più rispettate




Metodi analitici

REG. CE 2076/2005

Entro il 31/12/2009

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Validazione di metodi analitici

• Identificazione di metodi applicabili su campioni del CU• Stesura di POS• Verifica preliminare delle performance dei metodi• Ottimizzazione in laboratorio• Validazione primaria dei metodi• Partecipazione a circuiti interlaboratorio


http://www.google.it/imgres?imgurl=http://www.uni.com/uni/controller/it/comunicare/articoli/immagini_2009/accredia.jpg&imgrefurl=http://www.uni.com/uni/controller/it/comunicare/articoli/2009_4/accredia4.htm&usg=__uLro7LMwS-yzFRSRk1ZFlUSw-e4=&h=98&w=260&sz=30&hl=it&start=1&sig2=XeP8RFcbcaHJlBU1XGZmrA&itbs=1&tbnid=kKqvoKLI5Eh4iM:&tbnh=42&tbnw=112&prev=/images%3Fq%3Daccredia%26hl%3Dit%26gbv%3D2%26tbs%3Disch:1&ei=jdIHTPT8ONev_Qbx2s3cDw



Accreditamento di metodi di laboratorio

• DNA crostacei RealTime PCR

• DNA molluschi RealTime PCR

• Ovoproteine ELISA

• Beta-lattoglobuline ELISA

Validazione primaria in laboratorio

di analisi per determinazione




Validazione di metodi analitici

• precisione (in termine di ripetibilità e riproducibilità)• specificità e sensibilità analitica• robustezza• stabilità• accuratezza • limite di rivelazione (LOD)

Parametri minimi da valutare

Impegno notevoleCosti: tempo, reagenti, personale




Validazione di metodo in Real-Time PCR per determinazione di

Specificità: 100%

LOD: 0.002 ng di DNA di crostacei in 100 ng totali (circa 1 copia genomica)

Robustezza: ottima

Precisione: K=1

CROSTACEISpecificità: 100%

LOD: 0.1 ng di DNA di crostacei in 100 ng totali (circa 6 copie genomiche)

Robustezza: ottima

Precisione: K=1

MOLLUSCHI




Validazione di metodo in ELISA per determinazione di

Sensibilità diagnostica 1

Specificità diagnostica 1

LOD: 0.4 ppm Robustezza: buona

Stabilità buona

LATTOGLOBULINESensibilità diagnostica 1

Specificità diagnostica 1

LOD: 0.4 ppm Robustezza: buona

Stabilità buona

OVOPROTEINE



L’esperienza piemontese 2006-2007


http://www.google.it/imgres?imgurl=http://www.mcrivaroloracing.com/MCrivarolo/web/regione-piemonte.jpg&imgrefurl=http://www.mcrivaroloracing.com/MCrivarolo/web/PAG%2520CALENDARIO%25202010.htm&usg=___ixkuRSpv2kA9A4XYIp3c68lW0w=&h=366&w=1144&sz=139&hl=it&start=1&sig2=9ieGjghA-WCNqvg6_nz1EQ&itbs=1&tbnid=3tQLYWDM8hNGaM:&tbnh=48&tbnw=150&prev=/images%3Fq%3Dregione%2Bpiemonte%26hl%3Dit%26gbv%3D2%26tbs%3Disch:1&ei=btMHTNWyNc2K_AaImu3gDw


L’esperienza piemontese 2008-2010





Campionamento ufficiale (4 o 5 aliquote)

Prelievo eseguito daiServizi Veterinari Regionali

Campioni non conformi: segnalazione NC e possibilità richiesta analisi di revisione




Campioni eseguiti a seguito di segnalazione di sintomatologia

2 gelati di soia1 prosciutto cotto1 gelato di riso

Sintomatologia allergica in 4 bambini

Campionamento ufficialeda parte di A.C.

Positività per beta-lattoglobuline



Manila Bianchi, 19 maggio 2010

I risultati del piano di monitoraggio

2007 N° analisi N° analisi non conformi

%N.C.

Lattosio 169 7 4,1 %

β-lattoglobuline 171 8 4,67 %

Ovoproteine 190 10 5,26 %

Analisi Totali 530 25 4,72 %






%N.C.

Lattosio 230 4 1,73%


Ovoproteine 258 11 4,26 %

Crostacei 79 0 0 %

Molluschi 77 0 0 %

Analisi Totali 897 33 4,44 %






%N.C.

Lattosio 121 1 0,8 %


Ovoproteine 202 8 4 %

Crostacei 74 1 1,35 %

Molluschi 60 1 1,66 %

Analisi Totali 733 18 2,5%

Il trend


2007 2008 2009

Lattosio = 4,1 % 1,73% 0,8%

β-lattoglobuline = 4,67 % 7,14% 2,5%

Ovoproteine = 5,26 % 4,26% 4%

Crostacei = 0 % 1,35%

Molluschi = 0 % 1,66%



Conclusioni • Garantire elevato livello di sicurezza

alimentare e tutela dei consumatori

• Problematica che interessa una porzione limitata della popolazione ma con % crescenti

• Requisiti normativi relativamente recenti rispetto ad altri criteri di sicurezza



Conclusioni Necessità di metodi analitici:

• validati (garanzia di performance elevate)

• che rispondono ai requisiti di legge

• che soddisfano le esigenze del laboratorio

• che soddisfano le esigenze del cliente (OSA o AC)



Conclusioni OSA:

• Necessità di implementare autocontrollo in relazione a problema allergeni

• Disporre di metodi analitici per autocontrollo altrettanto affidabili

• Verifica costante di processi e impianti per controllare il rischio di ingresso allergeni in filiere free



Conclusioni Autorità Competente:

• Positiva esperienza della Regione Piemonte

• Monitoraggio prosegue nel 2010

• Contributo alla sensibilizzazione degli OSA


Manila Bianchi

S.C. Controllo Alimenti e Igiene delle Produzioni

Grazie per l’attenzione

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